依诺沙星缓释颗粒在兔眼内的药动学

目的 :观察聚乳酸 聚乙醇酸共聚物依诺沙星缓释颗粒植入兔眼内的药物释放过程。方法 :以高分子量的聚乳酸 聚乙醇酸共聚物为载体制得含药量为 30 %的依诺沙星缓释颗粒 ,并作体外药物释放度实验。将该缓释颗粒植入兔眼前房中 ,以高效液相色谱法在不同时间点做药物浓度测定。结果 :体外 4d内依诺沙星缓释制剂累积释放率为 6 .37% ,兔眼房水内 5d药物浓度变化范围 1.2 1～ 10 .2 2mg·L-1,远高于最小抑菌浓度。该缓释颗粒在兔眼房水内的药动学参数分别为T1/ 2 (Ka)0 .0 4 5h ,T1/ 2 (Ke) 2 4 .5 5h ,Tmax0 .4 1h ,Cmax9.18mg·L-1,AUC 32 8.96mg·h·L-1。结论 :该聚合物制备的依诺沙星缓释颗粒具有良好的缓释作用 ,在兔眼内药动学特点符合眼内炎抗菌药治疗的基本要求。     

P21-GFP融合基因表达载体的构建与在视网膜色素上皮细胞的表达定位

目的构建绿色荧光蛋白GFP—p21融合基因表达载体,并观察其在人视网膜色素上皮细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对视网膜色素上皮细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21 cDNA,应用基因重组技术与GFP基因融合,构建以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的重组表达质粒pGFP—p21。利用脂质体转染体外培养的人视网膜色素上皮细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pGFP—p21融合蛋白在细胞中的分布和定位,用Western Blot方法分析其蛋白的表达。结果①酶切、DNA测序均证实插入片断的正确性。②荧光显微镜观察结果显示在空载体pEGFP—C1转染组中,细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒pGFP—p21转染组中,绿色荧光主要集中在细胞核内。③Western Blot证实了pGFP—P21融合基因的表达。结论成功的构建了pGFP—p21质粒。视网膜色素上皮细胞能高效表达pGFP—p21融合基因,且主要定位于细胞核内,与p21基因的表达方式相同。     

p21/WAF1基因对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察p21／WAF1基因对体外培养的人视网膜色素上皮(hRFE)细胞增殖的影响。方法hRFE细胞原代、传代体外培养，通过脂质体介导将p21／WAF1基因转人体外培养的hRPE细胞。免疫组织化学法检测p21蛋白表达水平，并用MTT法检测其对hRFE细胞增殖抑制的作用，同时利用流式细胞仪来分析p21／WAF1基因对细胞周期的影响。结果 MTT法显示p21／WAF1基因抑制hRPE细胞的增殖。流式细胞仪检测显示转染后Go／G1期比例明显增加，S期比例减少。结论 p21／WAF1基因可有效地抑制hRPE细胞的增殖活性。