促红细胞生成素抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制

目的研究促红细胞生成素(EPO)抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制。方法胰酶消化法提取大鼠视网膜神经细胞进行原代培养,随机分为对照组、模型组及不同浓度EPO治疗组,培养48 h后TUNEL法测定细胞凋亡情况,免疫细胞化学法(SP法)测定NF-κB蛋白表达。结果细胞凋亡检测显示模型组同对照组相比凋亡细胞明显增多(P<0.01),各EPO治疗组同模型组相比凋亡细胞明显减少(P<0.01);免疫细胞化学法见NF-κB蛋白在对照组仅有极少量表达,在模型组呈弱阳性表达,而各EPO治疗组较模型组表达明显增强(P<0.01)。随着EPO浓度从5 kU.L-1增加到40 kU.L-1,视网膜神经细胞的凋亡明显减少,NF-κB蛋白的表达明显上升,呈一定浓度依赖性。结论高糖状态是引发大鼠视网膜神经细胞发生凋亡的损伤性因素之一,EPO能抑制高糖引发的凋亡,发挥神经保护作用,其机制可能是通过上调NF-κB的表达来实现,这为临床早期糖尿病视网膜病变的治疗提供了理论依据。     

rhEPO对光损伤诱导的RPE细胞Bcl-2表达影响

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对光损伤诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞Bcl-2表达的影响及其作用机制.方法 取成人ARPE-19细胞株传代培养的2～5代细胞建立光损伤模型,采用酶联免疫吸附实验和免疫组织化学方法检测不同浓度rhEPO干预治疗前后RPE细胞Bcl-2表达的变化;并添加特异性Jak2激酶抑制剂AG490,检测RPE细胞Bcl-2表达的变化.结果 rhEPO可明显增强RPE细胞光损伤后Bcl-2的表达,与光损伤模型组相比较,rhEPO各药物干预组细胞Bcl-2表达均增强,差异有显著意义(F=18.756,q=36.028～44.285,P<0.01),以40 kU/L rhEPO组作用最明显.而加入AG490后,rhEPO对Bcl-2的上调作用被明显阻断(q=42.171,P<0.01).结论 rhEPO可能是通过增强Bcl-2的表达而抑制光损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,rhEP0上调Bcl-2的表达可能是通过Jak2 PIK3/PKB途径实现的.     

大鼠视网膜神经细胞的原代培养

目的:在前人建立的方法上优化SD大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法,为后续研究提供实验基础。方法:使用胰酶消化法分离新生1～3dSD大鼠视网膜神经细胞,以DMEM/F12为培养基体外培养,免疫组织化学染色的方法进行鉴定。结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长,部分细胞伸出突起,且有些突起相互连接。免疫细胞化学染色显示,培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)抗体反应阳性。结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。