高糖对人晶状体上皮细胞沉默信号调节蛋白6（SIRT6）表达的影响

目的　观察高浓度葡萄糖对人晶状体上皮细胞(SRA01/04)活性及沉默信号调节蛋白6（SIRT6）表达的影响。方法　将SRA01/04细胞在不同葡萄糖浓度（5.5 mmol·L^-1、15.5 mmol·L^-1、25.5 mmol·L^-1、35.5 mmol·L^-1、45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1）培养基中培养48 h后,用光镜观察SRA01/04细胞形态;CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性;Western blot检测各组细胞SIRT6蛋白的表达水平。然后将SRA01/04细胞用55.5 mmol·L^-1葡萄糖干预,培养不同时间（0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h）后,Western blot检测不同时间SRA01/04细胞SIRT6蛋白表达水平。免疫荧光技术检测对照组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖）和高糖组（55.5 mmol·L^-1葡萄糖）细胞的SIRT6蛋白表达情况。结果　随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的数量逐渐降低。CCK-8检测结果显示,与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组相比,随着葡萄糖浓度增加,SRA01/04细胞的活性逐渐降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,SRA01/04细胞的SIRT6蛋白表达与葡萄糖呈浓度和时间依赖性,45.5 mmol·L^-1、55.5 mmol·L^-1、75.5 mmol·L^-1葡萄糖组与5.5 mmol·L^-1葡萄糖组比较,以及24 h组、48 h组和72 h组与0 h组比较,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。细胞免疫荧光结果显示,SRA01/04细胞中的SIRT6蛋白主要在细胞核表达,高糖组SRA01/04细胞中SIRT6蛋白表达较对照组显著降低（P<0.05),且高糖组细胞核出现明显的核固缩和核碎裂现象。结论　高浓度葡萄糖可以降低SRA01/04细胞的增殖活性,降低SIRT6蛋白的表达水平。     

紫外线照射对人视网膜色素上皮细胞活性和沉默信息调节因子6（SIRT6)表达的影响

目的　探讨紫外线照射对人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19细胞）活性和沉默信息调节因子6（SIRT6)表达的影响。方法　将对数生长期的ARPE-19细胞按照照射剂量随机分为对照组（0 mJ·cm^-2）及7.5 mJ·cm^-2、15.0 mJ·cm^-2、30.0 mJ·cm^-2、60.0 mJ·cm^-2、120.0 mJ·cm^-2、240.0 mJ·cm^-2照射剂量组进行干预培养。照射后继续常规培养24 h，采用倒置荧光显微镜观察细胞形态并拍照，CCK-8法检测细胞存活率，Western blot检测各组细胞中SIRT6的表达情况，采用免疫荧光染色对对照组、30.0 mJ·cm^-2照射剂量组和240.0 mJ·cm^-2照射剂量组ARPE-19细胞中SIRT6进行定位检测。结果　对照组ARPE-19细胞呈梭形贴壁生长，边界清楚，连接紧密，细胞状态良好；30.0 mJ·cm^-2照射剂量组ARPE-19细胞形态不规整，细胞数量略有减少，细胞间连接疏松。CCK-8法检测结果显示:与对照组相比，ARPE-19细胞在不同剂量紫外线照射后，细胞存活率显著降低且呈剂量依赖性（均为P＜0.05）。与对照组相比，除较低照射剂量组（7.5 mJ·cm^-2、15.0 mJ·cm^-2）外，其余各组SIRT6蛋白相对表达量均降低，且随着照射剂量的增加呈剂量依赖性逐渐降低（均为P＜0.05）。经过30.0 mJ·cm^-2紫外线照射后，ARPE-19细胞随着再培养时间的延长，细胞中SIRT6蛋白的相对表达量逐渐下降（均为P＜0.05）。对照组、30.0 mJ·cm^-2照射剂量组和240.0 mJ·cm^-2照射剂量组SIRT6主要表达于ARPE-19细胞核内；与对照组相比，30.0 mJ·cm^-2照射剂量组和240.0 mJ·cm^-2照射剂量组ARPE-19细胞中SIRT6的荧光强度显著降低，且240.0 mJ·cm^-2照射剂量组降低更明显。结论　紫外线照射能够降低ARPE-19细胞的增殖活性，同时也能下调细胞中SIRT6的表达。