耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达

将来自嗜热脂肪芽孢杆菌IAM 110 0 1的高温乳糖酶基因bgaB亚克隆到具强启动子的大肠杆菌载体 pKK 2 2 3 3中 ,经IPTG诱导后 ,表达出的重组蛋白质仍具有耐高温活性 ,其相对分子质量与天然蛋白质相似 ,表达量为 1.5U/mg ,比出发菌株高 10倍     

地塞米松对人晶状体上皮细胞中波形蛋白表达的影响

目的 探讨地塞米松(dexamethasone,Dex)对人晶状体上皮细胞系(human lens epithelial cells,HLEC)中波形蛋白表达的影响以及波形蛋白表达变化在糖皮质激素性白内障形成中的作用.方法 对HLEC进行传代培养,应用DMEM和DMEM+1μmol·L-1Dex作用于HLEC 7 d,采用实时PCR和Western-blot从基因水平和蛋白水平检测波形蛋白的表达变化,采用免疫荧光染色法检测波形蛋白在细胞中的分布及表达变化.结果 实时PCR结果显示,Dex组较对照组波形蛋白mRNA表达减少,组间差异有统计学意义(P＜0.05).Western-blot检测结果显示,Dex组较对照组波形蛋白含量减少,组间差异有统计学意义(P＜0.05),提示Dex可降低波形蛋白的表达.免疫荧光染色结果显示Dex组较对照组波形蛋白表达减少,与Western-blot检测结果一致.结论 Dex可诱导HLEC中波形蛋白表达减少,从而引起HLEC异常的增殖和分化,最终导致糖皮质激素性白内障的形成.     

美国药物治疗管理实施现状

药物治疗管理是一种包括药物治疗评估、药物治疗咨询、慢病管理、药物治疗方案制定等一系列活动的专业化药学服务。这一概念最早起源于美国并逐步发展成熟。当前美国药物治疗管理已形成一套比较完整的服务体系,并应用于药学服务各场所。该文综述美国药物治疗管理服务提供方式和基于不同服务场所开展的药物治疗管理相关内容,介绍美国药物治疗管理的实施现状,以期为我国开展药物治疗管理服务实践提供参考。     

半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件

从嗜热脂肪芽孢杆菌 (IAM 110 0 1)中克隆出编码热稳定的半乳糖苷酶蛋白基因bgaB ,构建具T7强启动子的pET 2 0 (b) bgaB质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 .经IPTG诱导后 ,重组菌周质中乳糖酶酶活达到 0 .12U /mL ,胞内酶活为 1.35U /mL ,比酶活为 6 .6 6U/mg蛋白 ,比酶源菌产生的酶活提高 5 0倍 .通过对IPTG诱导时机、诱导浓度和诱导时间的优化研究 ,重组菌产生的比酶活进一步提高至酶源菌的 90倍 .     

波形蛋白与糖皮质激素性白内障的关系

长期全身或局部使用糖皮质激素可引起晶状体后囊下混浊( posterior subcapsular opacities, PSO),称为糖皮质激素性白内障( glucocorticoid-induced cataract, GIC )。有关GIC的发病机制,有多种假说,但都不能很好地解释PSO的形成过程,因而在预防和治疗上尚无有效手段。有新观点认为,激素可能通过其受体介导的波形蛋白的改变影响晶状体上皮细胞增殖和分化,最终导致GIC的形成。因此,研究波形蛋白对晶状体上皮细胞增殖和分化的影响,可能是GIC发病机制研究的一个新方向。     

眼内醛脱氢酶在防止紫外线辐射损伤中的作用

人眼持续暴露于来自阳光紫外线辐射（ultraviolet radiation,UVR）中会产生大量的活性氧族（reactive oxygen species,ROS）,诱导氧化应激反应,产生毒性醛损伤眼组织.醛脱氢酶（aldehydedehydrogenase,ALDH）超家族是一类多功能蛋白,在内、外源性醛的代谢及抗氧化应激等过程中起着重要作用.ALDH在眼部防止UVR损伤的机制尚不明确.ALDH在眼部主要分布于角膜和晶状体中,其中ALDH1A1和ALDH3A1表达丰富,可能与抗UVR损伤有关.新近的研究提示,针对ALDH的药物可能对某些眼病有益.     

不同非甾体类抗炎药物对超声乳化白内障吸除联合IOL植入术后抗炎效果的随机对照研究

目的比较2种非甾体类抗炎药物对超声乳化白内障吸除联合人工晶状体(IOL)植入术后的抗炎疗效及安全性。方法采用随机双盲临床对照研究方法, 选取2020年10月至2021年2月于山东第一医科大学附属青岛眼科医院就诊的年龄相关性白内障患者90例90眼。采用随机数字表法将患者分为双氯芬酸钠组和溴芬酸钠组, 每组45例45眼, 均行超声乳化白内障吸除联合IOL植入术, 并在围手术期分别点用0.1%新型双氯芬酸钠滴眼液(不含防腐剂)4次/日和0.1%溴芬酸钠滴眼液2次/日, 连续用药6周。于术前及术后1 d、1周、6周对患者的客观症状进行评估, 采用基础泪液分泌试验检测泪液分泌量, 采用干眼分析仪记录泪膜破裂时间, 在裂隙灯显微镜钴蓝光照射下观察角膜荧光素染色情况, 采用裂隙灯显微镜测定前房闪辉并分级, 采用光学相干断层扫描仪测量黄斑中央区厚度并检查有无黄斑囊样水肿;同时对视力、眼压及药物安全性和不良反应进行检测和评价。结果所有受试者手术过程顺利, 术中未发生并发症, 均按要求完成治疗和随访。双氯芬酸钠组和溴芬酸钠组患者主观症状评分术前分别为(0.47±0.73)和(0.47±0.51)分, 术后...     

美国医疗保险与药物治疗管理服务

美国药物治疗管理服务在解决和预防药物相关问题、提高药物治疗质量、降低医疗成本等方面发挥了重要作用。该文简要介绍美国医疗保险与美国老年和残障健康保险(Medicare)D部分药物治疗管理服务的受益人资格标准、服务提供者、服务要求、标准化文件等内容,以期为推动我国将药物治疗管理服务纳入医疗保险提供借鉴。     

药物治疗管理服务流程及能力要求

药物治疗管理服务是药师主导的旨在改善患者用药安全、有效、经济的重要手段,目前在美国已经取得了显著成效。我国的药物治疗管理服务仍处于初级阶段,规范化服务流程尚未形成,药师服务能力有待提升。该文介绍美国药师开展药物治疗管理服务的具体流程和能力要求,以期为我国开展规范的药物治疗管理服务提供参考。     

高效液相色谱-串联质谱法在检测绝经后妇女血清中雌激素及其代谢物中的应用

目的 建立一种高灵敏度的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),分析绝经后妇女血清中包含雌酮(E1)、雌二醇(E2)及其羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸结合/硫酸结合(-G/S)等代谢产物的水平。方法 采用叔丁基甲醚液-液萃取法,结合β-葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酸酯酶水解及丹磺酰氯对萃取后的血清样品进行衍生化处理。以同位素标记的雌酮-d4作为内标,采用Waters UPLCⅠ-Class/Xevo TQS液质联用系统测定。以ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7μm)为色谱柱,水/甲醇(含0.05%甲酸和2 mmol/L甲酸铵)为流动相,0.3 mL/min流速梯度洗脱。柱温为50℃,进样量10μL。电喷雾离子源(ESI)正离子模式下扫描,多重反应监测(MRM)下测定,分析时间7 min。结果 各类雌激素定量下限低至1～2 pg/mL,平均加标回收率在90.3%～111.3%之间。绝经后妇女血清各类雌激素总量远高于临床常规雌激素指标E2的水平,并以E1-G/S和16α-羟基雌酮结合型(16OHE1-G/S)水平相对较高。各类雌激素-G/S结合型水...