视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞的诱导分化作用

目的探讨视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞(BMSCs)的诱导分化作用。方法原代培养胚龄17d(E17)及生后3d(P3)SD大鼠的视网膜细胞,分别收集培养上清液,过滤后与DMEM按2:3混合,用此混合液诱导BMSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,对诱导后的细胞进行神经丝蛋白(NF)、胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)及视网膜特异性标记物进行免疫化学染色,统计分析阳性细胞数;再用RT-PCR进一步检测诱导结果。结果E17和P3细胞上清液均能诱导BMSCs表达NF[(10.35±2.66)%,(10.64±3.94)%]和GFAP[(27.86±7.97)%,(24.38±5.80)%],但只有P3细胞上清液诱导的BMSCs表达视蛋白(opsin),同时RT-PCR也检测到视细胞发育调节转录因子Crx mRNA的表达。结论视网膜细胞培养上清液可以诱导BMSCs向神经元、胶质细胞与视细胞分化。     

阻断神经生长因子信号部分抑制雌二醇对恒河猴视网膜血管内皮细胞的作用

目的研究神经生长因子(NGF)信号系统在雌激素调控视网膜血管内皮细胞中的作用。方法选用恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞系RF/6A，RT-PCR检测雌激素受体(estrogen receptor，ER)、NGF及其受体在视网膜血管内皮细胞中的表达。分别观察雌二醇(estradiol，E2)、NGF及VEGF、EGF、BDNF等对血管内皮细胞活力(MTT法)的作用。用流式细胞术-细胞周期法检测E2、NCF及E2与K252a共同处理组的凋亡率。NGF抗体和选择性TrkA拮抗剂K252a研究对上述作用的阻断效应。同样的分组进行细胞划痕修复实验。96孔板AngioMatrix胶上观察E2及NGF对RF／6A内皮细胞管腔形成能力的影响。结果RF／6A在细胞外基质胶上可形成管腔样结构。RT-PCR检测到ER-α、NGF及NGF受体TrkA的mRNA。1nmol/L～100nmol/L E2可以剂量依赖性的增强细胞活力及单层细胞的划痕修复能力，其增强作用可部分被NGF抗体及100nmol/L的K252a选择性阻断。凋亡率检测显示各组凋亡率相近。E2可促进RF／6A形成管腔，但不能被NGF抗体、TrkA阻断。结论除VEGF外，E2还可通过NGF信号系统对视网膜血管内皮细胞活力、划痕修复起促进作用。但结果提示，阻断NGF信号系统不影响E2促RF/6A形成管腔的作用。     

人眼结膜杯状细胞的定量研究

目的：研究杯状细胞在结膜各个方位的分布、形态及数量。方法：6眼（30－90岁）结膜,采用切片结合铺片的方法,1％阿利新兰,0．3％甲苯胺兰,HE染色,经显微摄像头输入Macintosh图象处理系统计数。结果：杯状细胞呈多房空泡状,圆形,核偏 位,单个,散在或密集分布。不同年龄组均以鼻下象限数量最多。80－90岁组杯状细胞的绝对数明显下降。结论：切片,铺片联合图象处理系统可以定量,准确地计算杯状细胞在结膜中的绝对数,从而为眼表疾病的研究提供有力的参考指标。     

突触囊泡蛋白研究进展

突触囊泡蛋白 (Synaptophysin,Syp)是分布于突触囊泡膜上含量丰富的糖蛋白之一 ,与递质释放关系密切 ,并可影响突触可塑性。Syp可作为神经元和神经内分泌细胞的可靠标记物用于神经系统形态、功能和发育以及相关疾病的研究。对于 Syp的功能及其具体作用机制 ,尚待进一步研究。     

口腔扁平苔藓病理改变的免疫发病机制研究进展

口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是最常见的非感染性口腔黏膜疾病,主要累及颊部、舌及牙龈等部位,有时可合并皮肤病变。病变可呈条纹状、斑块状白色损害、黏膜糜烂、萎缩等多种表现。该病在成人中发病率为1％～4％,易发于40岁以上的成人,女性多见。一般认为,本病与自身免疫、神经精神、全身疾病等因素有关,但确切机制不详。近年来OLP在组织病理学损伤机制方而取得了一定进展,如细胞黏附分子的改变可影响淋巴细胞迁移入上皮组织;     

新生小鼠视网膜病变的基因表达谱变化

目的 应用基因芯片技术研究早产儿视网膜病（retinopathy of prematurity，ROP）基因表达谱的变化规律及意义。方法 7日龄C57BL／6J新生小鼠暴露于75％的高氧5d后回到空气中，制成ROP动物模型，应用Trizol法抽提17日龄小鼠ROP模型及同时期对照组小鼠的视网膜总RNA，逆转录并用Cy3和Cy5标记，与小鼠Oligo表达谱芯片杂交，扫描后获取基因表达信息，进行差异分析、聚类分析和基因分类等生物信息学分析。结果 与正常小鼠比较，视网膜病变小鼠有1347个基因呈差异表达。SOM聚类显示12类不同的表达差异变化模式，基因本体学分析显示变化的基因并不局限于血管生成相关因子，发育相关基因及G蛋白信号通路相关基因改变亦很明显（P〈0.05）。结论 ROP小鼠视网膜基因表达谱有较大改变，为今后从分子生物学角度探索该病发病机制和进行基因治疗奠定基础。     

人眼球前后段发育的定量研究

目的 了解胚胎时期眼球前、后段的确切大小及其变化规律。方法 解剖45例不同时期的眼球,制备眼球壁外层铺片。用计算机图像分析技术测量角膜和巩膜表面积,计算角膜所占整个眼球的面积比。绘制角膜与眼球表面积增长曲线。结果 人胚胎眼球在第12周以前增长比较缓慢,此后眼球表面积增长迅速。角膜在眼球表面积中所占的比值在整个胚胎发育过程中变化不大,保持在1／10－1／11;成人约为1／15。结论 人眼角膜、巩膜在胚胎期近似成比例生长,出生以后眼后段生长明显快于出生前。成人角膜占眼球表面积的1／15。     

氧诱导的血管增生性视网膜病变小鼠模型

目的 建立可量化的血管增生性视网膜病变小鼠模型。方法 将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠17只暴露于75％氧浓度环境下饲养持续5d,然后回到正常空气中饲养;17只同龄幼鼠置于正常空气环境中饲养作为对照。ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变;用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目;视网膜组织切片用CD31进行免疫组织化学染色。结果 持续高浓度氧使幼鼠视网膜血管收缩、分支闭塞、中央部可见灌注降低,相对低氧使视网膜血管扩张、增生。组织切片可见正常对照组平均每张切片突破内界膜内皮细胞核数目<1个,给氧组平均24个/切片,两组比较差别有显著性意义(P<0.01)。给氧组视网膜组织切片经用CD31抗体处理后显示内界膜玻璃体面细胞染色阳性。结论 该模型具有可重复性强、可定量研究的优点,是进行视网膜新生血管发生机制及药物干预的合适模型。     

干细胞神经定向分化研究与医学转化

作为一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,人类多能性干细胞,包括人胚干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)及人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)等,能进一步分化成为多种类型的功能细胞,修复受损组织,有望为解决退行性疾病与组织损伤等难题提供新的途径。根据发育生物学理论,目前已建立有效的干细胞分化方案,可将人多能干细胞分化为特定类型的神经元和胶质细胞,包括GABA能、多巴胺能、脊髓运动神经元,以及星形胶质细胞和少突胶质细胞。本文综述了当前干细胞生物学中的与神经分化相关的几个热点问题,着重介绍人类与小鼠干细胞生物学方面的差异及干细胞研究向再生医学转化中的问题,特别是我国干细胞研究医学转化所面临的机遇与挑战。这些问题的解决将对提高我国的干细胞研究水平,推动干细胞研究向医学应用转化具有重要意义。     

晶状体损伤促进视神经再生的作用及机制

目的：研究晶状体损伤对视神经再生的促进作用,并探讨巨噬细胞所起的作用。方法：成年 SD 大鼠钳夹造成视神经损伤模型(NC),戳伤晶状体(LP),玻璃体内注射酵母多糖(ZI)或注射体外活化的单核/巨噬细胞 (MI),动物以此分组。用 Nissl 染色法显示存活的视网膜节细胞(RGCs),用抗 GAP-43抗体标记轴突再生 RGCs,用抗 ED-1抗体标记活化的单核/巨噬细胞。结果：NC LP 组存活的 RGCs 比 NC 组明显增加,再生的 RGCs 及活化的单核/巨噬细胞都有明显增多的结果。NC ZI 组与 NC MI 组也有类似结果。结论：晶状体损伤具有显著促进视神经再生的作用,其机制可能与趋化并激活巨噬细胞有关。