女性A型血友病FⅧ基因突变分析

报道罕见的女性A型血友病1例,并对其凝血因子Ⅶ进行基因突变分析。患者,女,65岁,因为跌倒后右胸痛2d入院,院内查体提示胸壁皮下血肿,双下肢等长,髋屈曲及内旋受限。测定凝血指标提示APTT61．3s,正常血浆纠正后为41．3s,而PT、FIB、TT均正常。有既往出血史。FⅧ活性为2％,FⅨ活性为200％,vWF：Ag为120％,vWF：RCof100％,vWF：CBAl28％,FⅧ结合分析正常;髋关节X片提示;双侧髋臼发育不良,髋关节骨关节炎。临床诊断为血友病A型。提取该患者外周血DNA,根据NM_000132之凝血因子FⅦ基因序列设计合成了其第14外显子特异的引物,行聚合酶链反应扩增,并对扩增产物进行测序分析,测序结果与标准序列进行比较,发现该患者出现4111A→C杂合突变,使1314位氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸,产生一错意突变,该突变未见其它文献报道．     

绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达

目的：构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达，探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值。方法：实验于2004-8／12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行。以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板，反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因，经测序验证后，亚克隆至穿梭质粒pAdTrack CMV中，与骨架质粒pAdEasy 1同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增，利用AdEasy 1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达，并用病毒上清转化大鼠神经干细胞，检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达。结果：①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653bp个核苷酸，同源性比较该序列正确。②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆，转染293细胞包装后的病毒滴度为lxl09PFU／mL。③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经干细胞扩增出653bp的带。结论：成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达。     

1999年郴州市0～4岁儿童死亡监测性别研究

世界各国都十分重视儿童的生存与发展问题。近年来 ,我国局部地区存在儿童男女性别比例失衡 ,在医疗保健方面 ,女孩应享有的权益未充分得到保障 ,因而引起社会广泛关注。为了探讨我市是否存在类似情况及其原因 ,针对性采取干预措施 ,确保儿童正当的合法权益不受侵害 ,使他们健康生存和发展 ,我们采用分层整群抽样法 ,从全市 11个县 (市、区 )随机抽取 46个乡 (镇 ) ,作为市级 0～ 4岁儿童死亡监测点 ,对不同性别出生、就医、死亡等情况进行监测研究 ,现将监测结果总结于下。1　监测方法1.1　对象　监测点内所有 0～ 4岁儿童1.2　方法　拟定…     

人TCP11L2和鼠Tcp1112基因的定位及表达的初步研究

目的观察人TCP11L2和鼠Tcp1112基因在细胞中的表达及定位和Tcp1112基因的表达谱研究。方法用RT-PCR法从正常人和鼠睾丸组织中分别扩增得到人TCP11L2基因和鼠Tcp1112基因的开放读码框全长cDNA并定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1质粒中,构建了pEGFP-TCP11L2和pEGFP-Tcp1112融合基因表达载体,然后以脂质体介导转入MDCK细胞中,荧光显微镜下观察融合基因的表达情况;RT-PCR检测鼠Tcp1112基因在组织中的表达情况。结果在转染重组真核表达载体pEGFP-TCP11L2、pEGFP-Tcp1112的MDCK细胞中,荧光主要集中在细胞核外区域,而在转染空白载体pEGFP-N1的细胞中,荧光布满整个细胞;RT-PCR检测鼠Tcp1112为多组织表达。结论人TCP11L2和鼠Tcp1112蛋白能在MDCK细胞中高效表达,表达的蛋白定位在细胞核外区域,鼠Tcp1112的多组织表达提示该基因与鼠Tcp11基因功能的不同。     

少指(趾)畸形一家系的调查分析

少指(趾)畸形较多指(趾)、并指(趾)和短指(趾)畸形少见,而双上肢和双下肢都发生少指(趾)则更为少见,国内资料报道较少。桂东县贝溪乡××村有一少指(趾)畸形家系,我们于1997年3月21日专程前往对其家系进行了流行病学调查,现将结果报告如下。1　家系资料先证者郭××,女,45岁,出生时双上肢、双下肢均为少指(趾)畸形。家系调查发现,其父、母系形态均正常;先证者有7个兄姐,都因患传染病等因素先后在未成年时夭折,这7个兄姐均无少指(趾)畸形;先证者(Ⅱ8)15岁时,与一正常张姓男性婚配后生下4个子女(二男二女),均为双上肢、双下肢少指(趾)畸形(见…     

米非司酮配伍前列腺素类药物终止早孕的临床应用

<正>米非司酮终止早孕的药理作用、剂量及与不同类型的前列腺素(PG)类药物配伍,经多年的基础和临床研究后,积累了一些经验,近年来在国内得到了广泛应用.该药在适应证范围内明显优于负压吸宫术终止早孕,而且被易于接受,是当前公认的一种较好的药物抗早孕的方法.因此,在药物抗旱孕的研究中取得了突破性的进展,具有十分重要的临床意义和发展前途.     

绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达

目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值。方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行。以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,与骨架质粒pAdEasy1同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达。结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653bp个核苷酸,同源性比较该序列正确。②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL。③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经干细胞扩增出653bp的带。结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达。     

少指缺掌并足裂畸形一家系调查及其病因研究

目的　研究先天性少指缺掌并足裂畸形一家系患者的临床表现及其致病原因。方法　在患者家系调查的基础上 ,设立正常对照组与患者组 ,应用聚合酶链反应技术对两组的 P6 3基因第 5～ 8外显子基因组 DNA测序分析。结果　体检发现 ,患者双上肢少拇指、食指和中指 ,缺桡侧手掌并双下肢足裂畸形。病因研究提示 ,P6 3基因第 5～ 8外显子 PCR扩增片段大小分别为 2 84 bp、2 5 9bp、2 4 5 bp和 2 5 9bp。患者与正常对照的扩增片段大小一致。但将患者扩增的片段 DNA序列分别与正常对照组以及人类基因库P6 3基因 DNA序列进行比较时则发现于 P6 3基因第 5外显子的第 6 6 5位碱基对出现突变 ,即由 G突变为A。结论　先天性少指缺掌并足裂家系患者系由 P6 3基因第 5外显子基因组的第 6 6 5位碱基对突变所致。     

应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.     

HSF4基因突变导致常染色体显性遗传核性白内障

目的 鉴定一个延续5代常染色体显性遗传核性白内障家系的致病基因。方法 根据已知先天性白内障致病基因在染色体上的定位，选择了D16S539分子标记，对该家系进行连锁分析，通过基因测序鉴定致病基因。结果 该69名家系成员中有16例患有先天性核性白内障，致病基因定位于16q21-q22，并在候选基因HSF4外显子3检测到一新的突变杂合子134456G-A，该突变导致112E的同义突变，而在家系正常成员中则未检测到该突变。结论 该家系核性白内障表型很可能系由HSF4基因134456G-A突变所致，且此突变尚未见报道。