小鼠胚泡着床相关基因的差减筛选

目的:筛选新的小鼠胚泡着床相关基因。方法:对孕4.5 d小鼠着床和非着床位点的子宫内膜组织进行PCR差减。获得了2个新的在小鼠胚泡着床位点高表达的EST(EST8和EST81)。结果:EST8在孕4.5 d小鼠着床位点、肝脏中表达较高,在非着床位点和卵巢中亦有微量表达。EST81主要在孕4.5 d小鼠子宫着床组织和卵巢中表达,其它各种组织中也有微量表达。用PCR方法获得了相应的全长。cDNA,长度分别为1665bp和1364bp。结论:用差减筛选获得的两种cDNA是孕小鼠着床相关基因,其功能有待进一步研究。     

重组人绒毛膜促性腺激素β-亚基对C57BL小鼠免疫应答反应及抗血清特征的研究

采用福氏性剂，对C57BL小鼠进行重组hCGβ和天然hCGβ免疫应签反应的比较研究，结果表明：两者引发的抗血清性质相似，与hCG有较高的亲和力（K（γβ）≈5．86×108／mol／L，Kaβ≈8．18×108／mol／L）；抗血清能有效地抑制（125）I－hCG与睾丸受体的结合，结果提示重组hCGβ抗血清与天然hCGβ抗血清相似，具有中和hCG的生物活性能力，重组hCGβ可作为免疫避孕疫苗的抗原。     

hCGβ-C3d融合蛋白在CHO细胞中的表达

为了提高hCGβ的免疫原性 ,构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒pcDNA3 hCGβ C3d3,使其转染稳定表达系统中国仓鼠卵细胞 (CHO )后 ,检测融合蛋白分泌情况。CHO细胞转染了pcDNA3 hCGβ C3d3质粒后 ,经 4 8h培养 ,1 0× 10 6个CHO细胞可分泌 6 6 0ng的重组融合hCGβ C3d3蛋白。细胞免疫化学技术分析显示 ,表达产物既有hCGβ的组分也有C3d的成分。经SDS PAGE及免疫印迹试验发现CHO细胞培养上清液中含有三组蛋白成分 ,其相对分子质量分别为12 0 0 0 0、90 0 0 0和 6 5 0 0 0。利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接 ,构建了pcDNA3 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,为提高hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础     

新鲜和冷冻保存的人羊膜中bFGFmRNA的检测

目的 研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA。方法 从新鲜和保存1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA，RT-PCR一步法扩增。PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoRⅠ、HindⅢ双酶切．将酶切产物通过T4DNA连接酶连接，重组质粒。将重组质粒导入感受态的DH5a大肠杆菌中．筛选阳性菌落抽提质粒后行酶切鉴定．选取阳性克隆测序。结果 RT-PCR产物电泳．可见单一清晰的条带，约410bp。重组质粒酶切后见二条带，小带约410bp，与插入片段一致，测序结果表明目的片段与bFGF的序列完全相同。结论 新鲜和冷冻保存的羊膜组织中存在bFGF的mRNA。     

hCGb-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达

目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果:在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别为125kD和138kD左右。结论:运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白,为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。     

hCGβ-(CTP)_4和hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达hCGβ-(CTP)_4、hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4融合蛋白,并对蛋白进行分离纯化。方法:将pBSMR-(CTP)_4中的(CTP)_4基因片断克隆入表达载体pET-28a(+),得到表达质粒pET-28a(+)-(CTP)_4。将PCR获得的补体C3d-P28 DNA序列以头尾串连的方式构建四聚体。将(C3d-P28)_4基因片断克隆入pBSMR-(CTP)_4,得到pBSMR-(CTP)_4-(C3d-P28)_4,进一步得到表达质粒pET-28a(+)*(CTP)_4-(C3d-P28)_4。将表达质粒pET-28a(+)-(CTP)_4和pET-28a(+)-(CTP)_4- (C3d-P28)_4分别转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白hCGβ-(CTP)_4和hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4。采用Ni-NTA-resin和凝胶过滤方法纯化蛋白。结果:菌株经IPTG诱导后检测到目的基因的表达产物, SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白的分子量分别为27kD和40kD左右。结论:在BL21 (DE3)中成功表达了hCGβ-(CTP)_4和hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4融合蛋白,并确立了纯化方法,为进一步研究其免疫原性和应用于抗肿瘤疫苗奠定了基础。     

Human μ-opioid receptor overexpressed in baculovirus system and its pharmacological characterizations

目的：高效表达具有类似哺乳动物特性的人μ阿片受体．方法：人μ阿片受体表达在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９昆虫细胞中，用受体结合分析和ｃＡＭＰ分析研究表达产物的药理学特征．结果：［３Ｈ］二丙诺啡及［３Ｈ］羟甲芬太尼（Ｏｈｍ）的最大结合能力分别是９．１±０．７，６５２±０．２３ｎｍｏｌ／ｇ蛋白．μ选择性激动剂对［３Ｈ］二丙诺啡或［３Ｈ］Ｏｈｍ与表达受体的结合均有很强的抑制作用，而δ及κ激动剂则均无抑制作用．μ选择性激动剂有效抑制ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ刺激的ｃＡＭＰ聚集，这种作用能被拮抗剂纳洛酮阻断．结论：在Ｓｆ９昆虫细胞中高效表达的人μ阿片受体保持着野生型人μ阿片受体的特征     

重组人绒毛膜促性腺激素β-亚基(hCGβ)抗血清对hCG生物活性能力的影响

该文将重组hCGβ免疫C57BL小鼠，观察了抗hCG抗血清对hCG诱发的睾丸间质细胞分泌睾酮和雌幼SD大鼠子宫增重的影响。结果表明：重组hCGβ抗血清可不同程度抑制hCG诱发的睾丸间质细胞分泌睾酮和雌幼sn大鼠子宫增重，提示重组hCGβ抗血清与hCG形成的复合物缺乏生物活性，重组hCGβ抗血清具有中和hCG的生物活性能力。     

The Study on Immuno-response and Antisera Properties of Recombinant β-subunit of Human Chorionic Gonadotropin in C57 Black Mouse

Humanchorionicgonadotropin(hCG),aglycoproteinhormone,issecretedbythetrophocyteofh..a.fetus.Ithaseffectsofstimulatingthecorpusluteumtoproduceprogesteroneandestradiolinordertomaintaintheirseralevelsandcanbevaluedasareliableindexforpregnancy.AsantihCGantibodycanblockpregnancybyneutralizingthebiologicalactivityofhCG,itwouldbeexpectedasanapproachforimmunologicalcontraceptionl'--'l.DatafrompreviousresearchonusingnaturalhCGasimmunocontraceptivevaccineshowedthat,hadtheantibodiesraisedpossessthecapa…     

B7家族新成员:ICOS-L

B7家族的经典分子包括B7．1和B7．2，主要表达在抗原递呈细胞的表面，并通过与其配体CD28、CIIA-4的结合在T细胞的生长、分化、活化、死亡中起着重要作用。继CD28家族的ICOS—L发现以后，ICOS的配体-B7家族的一个新成员也随之确定，由于该分子是由几个实验室分别独立发现的，而现在对该分子尚无统一命名，故本文暂用ICOS-L表示。