血管内皮生长因子抑制剂在角膜新生血管治疗中的研究进展

正常角膜是无血管、完全透明的组织,是眼部重要的屈光介质,但许多眼部疾病均可破坏抗血管生成因子与促血管生成因子之间的平衡,导致病理性角膜新生血管(CNV)的形成.大量研究表明,CNV的形成与血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的激活密切相关.通过多靶点多途径阻断该信号通路可以有效抑制新生血管的形成,为CNV的治疗带来了希望.目前,针对新生血管性眼病的新型靶向治疗策略主要包括VEGF抑制剂和以微小RNA(miRNA)为核心的基因治疗,前者主要包括抗VEGF单克隆抗体、核酸适体、VEGFtrap、VEGF受体(VEGFR)酪氨酸激酶抑制剂等.本文将对具有代表性的抗VEGF药物和基因治疗的作用机制、用药疗效、药物安全性及研究现状进行综述.     

miR-142通过上调AKT2的表达促进角膜新生血管形成

目的：研究microRNA142（miR-142）对角膜新生血管形成的影响及其相关机制。方法：实验设置空白对照组、阴性对照组、过表达miR-142组以及干扰miR-142组,分别利用miR-142模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor）过表达和干扰miR-142;CCK-8增殖实验检测miR-142对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因验证AKT2是否为miR-142的直接靶基因;RT-PCR和Western blot实验检测miR-142对AKT2表达水平的影响。结果：CCK-8增殖实验结果显示空白对照组、阴性对照组和过表达miR-142组96 h的吸光度（absorbance,A）均值分别为872.21±44.20、842.16±49.54和1 407.91±16.58,差异具有统计学意义（F=102.8,P=0.000）。干扰miR-142后HUVECs增殖能力明显减弱（空白对照组=919.69±25.46,阴性对照组=856.76±36.22,干扰miR-142组=602.77±25.62;F=72.8,P=0.000）。双荧光素酶报告基因结果发现过表达miR-142后AKT2表达水平没有明显变化（对照组=0.36,过表达miR-142组=0.46,P=0.147）。RT-PCR结果显示过表达miR-142（0.408±0.046）后AKT2表达水平较阴性对照组（0.173±0.022）升高（P=0.018）,干扰miR-142组（0.16±0.02）较阴性对照组（0.362±0.068）明显降低（P=0.037）,差异均具有统计学意义。Western blot实验进一步验证了miR-142对AKT2基因的调控作用。进一步研究发现,shRNA干扰AKT2后miR-142促进HUVECs增殖的作用消失,对照组、过表达miR-142组、过表达miR-142+shRNA-AKT2组和shRNA-AKT2组的96 h吸光度值分别为981.80±75.40、1 357.81±47.56、806.39±49.70和921.59±40.38,差异具有统计学意义（F=40.97,P=0.000）。结论：miR-142通过上调AKT2的表达促进HUVECs增殖,从而促进角膜新生血管形成。