白细胞介素-1α对猪小梁细胞基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶抑制剂表达的影响

背景房水外流通路的阻塞或小梁网细胞外基质（ECM）的异常堆积导致房水流畅系数降低是引起眼压升高的原因之一,基质金属蛋白酶（MMPs）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的平衡对ECM的代谢至关重要,白细胞介素-1α（IL-1α）可以通过调节MMPs的表达而调节房水的外流。目的研究猪重组IL-1α对体外培养的猪眼小梁细胞MMP-2、MMP-3及TIMP-1表达的影响。方法从猪眼取出带有小梁组织的巩膜,用组织块培养法培养小梁细胞并进行传代,第3代的猪小梁细胞应用纤维连接蛋白（FN）和层黏连蛋白（LM）进行鉴定。第3代小梁细胞血清饥饿培养24h后分为2组,对照组加入无血清培养基,IL组加入10m／L IL-1α,分别培养30min。采用细胞免疫化学法分析IL组MMP-2、MMP-3及TIMP-1蛋白在培养小梁细胞中的表达;采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测小梁细胞中MMP-2mRNA、MMP-3mRNA及TIMP-1 mRNA的表达,并与对照组的检测结果进行比较。结果传3代的细胞对FN和LM呈现阳性反应。与对照组比较,IL组小梁细胞中MMP-3和TIMP-1蛋白的表达量（A值）明显升高,差异均有统计学意义（t=-7．694、t=-5．199,P〈0．05）,但2组间小梁细胞中MMP-2表达的差异无统计学意义（t=-2．365,P〉0．05）。IL组小梁细胞中MMP-3mRNA和TIMP-1mRNA的表达量（A值）明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=-3．025、t=-1．921,P〈0．05）,而2组间小梁细胞中MMP-2mRNA的表达差异无统计学意义（t=-1．173,P〉0．05）。结论外源性IL-1α能增加猪眼小梁细胞中MMP-3、TIMP-1的表达,引起MMP-3／TIMP-1平衡改变,促进小梁网ECM的分解,增加房水外流,而对MMP-2的表达无影响。     

HA义眼台眶内植入术后义眼台取出的原因分析

目的 分析羟基磷灰石(HA)义眼台眶内植入术后义眼台取出的原因,探讨预防义眼台取出的有效方法.方法 对1995年9月～2009年6月在我院收治的所有HA义眼台植入术后义眼台取出的35例患者进行回顾性调查.针对不同的病因进行相应治疗,治疗无效后行义眼台取出术.结果 共调查有完全随访资料的35例患者.最终导致义眼台取出的原因分为义眼台暴露20例,义眼台感染6例,脓性肉芽肿9例.其中,9例脓性肉芽肿患者义眼台均未完全血管化.结论 HA义眼台眶内植入术后义眼台取出是严重并发症之一,是多种因素综合影响所致.义眼台血管化不足、义眼台暴露、义眼台感染及脓性肉芽肿是义眼台取出的常见原因.     

整合素β1介导的ERK/MAPK通道在人晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的研究转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)对培养的人氉晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)整合素β1、磷酸化ERK(pERK)及F-actin表达的影响,探讨整合素β1介导的ERK/MAPK通路在HLEC转分化中的作用。方法体外培养的HLEC,加入不同浓度(0ng·L-1和10ng·L-1、33ng·L-1、100ng·L-1、333ng·L-1、1000ng·L-1)的TGF-β2处理不同时间(12h、24h、48h、72h),采用MTT法测定TGF-β2对HLEC增殖的影响,并确定最佳干涉浓度和时间用于后续实验。实验分2组,实验组用含最佳干涉浓度TGF-β2的培养基培养HLEC,对照组使用无血清培养基培养,于最佳干涉时间对2组细胞行免疫细胞化学染色检测HLEC中整合素β1、pERK及F-actin的表达,RT-PCR检测整合素β1、pERK及F-actin mRNA的表达。结果 TGF-β2抑制HLEC的增殖,呈浓度和时间依赖性,TGF-β2的最佳干涉终浓度为100ng·L-1,作用48h后达到最大抑制效果。TGF-β2增加HLEC整合素β1、pERK及F-actin的表达,相对表达量分别为0.116±0.031、0.123±0.028、0.140±0.033,均较对照组(0.045±0.011、0.025±0.009、0.079±0.024)明显升高(均为P<0.01)。RT-PCR结果显示,TGF-β2明显促进整合素β1mR-NA、pERK mRNA及F-actin mRNA的表达,相对表达量分别为0.658±0.146、0.582±0.171、0.760±0.193,较对照组(0.246±0.051、0.338±0.092、0.138±0.027)明显升高(均为P<0.01)。结论 TGF-β2抑制了HLEC的增殖,促进整合素β1、pERK及F-actin的表达,整合素β1介导的ERK/MAPK信号通路可能参与了HLEC转分化过程,导致后囊膜混浊。     

IL-1α对猪小梁细胞ELAM-1、MAPK通路蛋白表达的影响

目的研究猪重组白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)对体外培养的猪眼小梁细胞内皮白细胞黏附因子-1(endothelial leukocyte adhesion molecule-1,ELAM-1)及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路蛋白表达的影响。方法传第3代的猪眼小梁细胞血清饥饿培养24h后,利用IL-1α进行干预。免疫组织化学分析干预后猪眼小梁细胞E-LAM-1的表达;采用Western blotting检测干预后细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-JunN端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38通路磷酸化水平的变化。结果正常猪眼小梁细胞不表达ELAM-1,经IL-1α刺激后小梁细胞磷酸化的ELAM-1、ERK1/2、JNK和P38的表达显著增加;MAPK通路所包括的ERK、JNK和p38通路均发生活化,其中对JNK通路的影响最大。结论外源性IL-1α对猪眼小梁细胞MAPK信号转导通路可产生影响,IL-1α可诱导猪眼小梁细胞表达ELAM-1。     

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞E-钙黏素和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

背景：有研究表明,人晶状体上皮细胞的间质转分化是后发性白内障的主要病理改变,转化生长因子β2可以诱导间质转分化的发生。 目的：体外培养人晶状体上皮细胞,观察转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞转分化相关蛋白E-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。 方法：利用组织块法体外培养人晶状体上皮细胞并传代,选择传5代的细胞进行实验,采用100 ng/L转化生长因子β2诱导48 h,反转录-聚合酶链反应方法检测E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达,应用蛋白质印迹法Western blot检测其蛋白表达。 结果与结论：转化生长因子β2处理人晶状体上皮细胞48 h后,细胞E-钙黏蛋白表达明显减弱,α-平滑肌肌动蛋白的表达明显增强。提示转化生长因子β2可以成功诱导晶状体上皮细胞间质转分化,转化生长因子β2处理的晶状体上皮细胞可以作为间质转分化的细胞模型。     

压力对猪眼小梁细胞表达ELAM-1、MMPs/TIMPs的影响

目的 培养猪眼小梁细胞,研究压力对体外培养的猪眼小梁内皮细胞白细胞粘附分子-1 (ELAM-1)、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-3及基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-2表达的影响。方法 培养猪眼小梁细胞并鉴定,建立细胞水平的青光眼模型,对传第3代猪眼小梁细胞分别施加20、40、60 、80mmHg压力作为实验组,0mmHg为对照组。培养6h后行ELAM-1免疫组织化学SP法染色,培养24h后行MMP-2、MMP-3和TIMP-2免疫组织化学SP法染色,并对染色结果进行统计学分析。结果 培养细胞为猪眼小梁细胞,正常小梁细胞不表达ELAM-1,压力为40、60、80mmHg时,ELAM-1的表达同0、20mmHg组相比表达明显增加。正常小梁细胞可以少量表达MMP-2、MMP-3及TIMP-2。压力为40、60mmHg时,MMP-2、TIMP-2的表达同0、20、80mmHg相比表达明显增加,压力不影响小梁细胞MMP-3的表达。结论 一定范围内压力的变化可以促进猪眼小梁细胞表达ELAM-1,可以改变MMPs／TIMPs之间的平衡状态,进而影响小梁细胞外基质(ECM)的代谢,改变房水外流阻力, ELAM-1、MMPs在青光眼的发病中可能发挥重要作用。     

地塞米松对小梁细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的 观察地塞米松对培养的牛眼小梁细胞水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响.方法 应用含浓度为5,25,50,250μg/L的地塞米松培养液作用体外培养的第3～4代牛眼小梁细胞.7d后,免疫组织化学方法检测牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平,与正常体外培养的细胞进行对照并进行定量分析.结果 正常牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白表达,其灰度值为184.83±1.52,在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松作用7d后,AQP-1蛋白表达灰度值分别为185.95±1.49,193.25±1.18,196.88±0.91,204.26±1.64.当地塞米松浓度≥25μg/L时出现抑制作用(P<0.05).结论 在体外培养条件下,地塞米松可抑制牛眼小梁细胞AQP-1的表达,这可能与糖皮质激素应用后房水流出阻力增加、眼压升高所继发的青光眼有关.     

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞间质转分化的影响

目的:探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对培养的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖及诱导HLECs间质转分化的影响。方法:体外培养HLECs,培养基加入不同质量浓度TGF-β2进行干预,采用MTT法测定TGF-β2对细胞增殖的影响;细胞免疫化学染色方法检测100ng/LTGF-β2作用后E-钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和F-肌动蛋白(F-actin)的表达;RT-PCR方法检测E-cadherin、α-SMAmRNA的表达。结果:经TGF-β2处理后的HLECs增殖受到抑制;TGF-β2减弱HLECsE-cadherin的表达,相对表达量为(10.674±3.233),较对照组的(23.352±4.192)减弱(t=4.232,P=0.013)。TGF-β2增加HLECsα-SMA和F-actin的表达,相对表达量分别为(17.613±4.272)、(15.857±4.121),较对照组的0、(4.272±1.538)增强(Z=12.537,P<0.001;t=7.186,P=0.004)。RT-PCR结果显示,TGF-β2组HLECsE-cadherinmRNA的相对表达量为(0.321±0.081),较对照组的(0.983±0.248)减弱(t=3.491,P=0.008);TGF-β2组细胞α-SMAmRNA相对表达量为(0.632±0.158),较对照组的(0.097±0.028)增强(t=5.365,P=0.005)。结论:TGF-β2可以抑制HLECs的增殖,诱导HLECs间质转分化,可能参与后囊膜混浊的形成。     

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞E-钙黏素和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

背景：有研究表明,人晶状体上皮细胞的间质转分化是后发性白内障的主要病理改变,转化生长因子β2可以诱导间质转分化的发生。目的：体外培养人晶状体上皮细胞,观察转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞转分化相关蛋白E-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法：利用组织块法体外培养人晶状体上皮细胞并传代,选择传5代的细胞进行实验,采用100ng/L转化生长因子β2诱导48h,反转录-聚合酶链反应方法检测E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达,应用蛋白质印迹法Westernblot检测其蛋白表达。结果与结论：转化生长因子β2处理人晶状体上皮细胞48h后,细胞E-钙黏蛋白表达明显减弱,α-平滑肌肌动蛋白的表达明显增强。提示转化生长因子β2可以成功诱导晶状体上皮细胞间质转分化,转化生长因子β2处理的晶状体上皮细胞可以作为间质转分化的细胞模型。