牡荆苷对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤模型中神经节细胞的保护作用

目的探讨牡荆苷对大鼠视网膜缺血-再灌注(RIR)引起的视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法将60只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、模型组和牡荆苷组,均以右眼为实验眼。模型组和牡荆苷组大鼠采用前房灌注方法建立RIR模型,牡荆苷组大鼠建模后每日按照25 mg/kg剂量腹腔内注射牡荆苷生理盐水溶液,模型组大鼠腹腔内注射相同剂量的生理盐水,连续给药7 d。正常对照组大鼠右眼仅行前房穿刺而不升高眼压,同时腹腔内注射相同剂量的生理盐水。造模后7 d过量麻醉法处死大鼠,采用组织病理学染色法检测大鼠视网膜厚度和RGCs数量,采用逆行荧光金染色标记法检测RGCs密度,采用TUNEL染色法检测RGCs凋亡情况,采用比色法检测视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)浓度,采用Western blot法检测大鼠视网膜组织细胞质Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、NQO1、细胞核Nrf2蛋白表达。结果模型组大鼠视网膜厚度为(90.21±3.55)μm,明显低于正常对照组的(128.20±5.31)μm和牡荆苷组的(119.65±6.14)μm,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组单位面积RGCs数量为(1300.85±14.00)个/mm²,明显低于正常对照组的(2330.12±15.05)个/mm²和牡荆苷组的(1921.64±11.78)个/mm²,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组TUNEL阳性RGCs比率为(68.34±5.04)%,明显高于正常对照组的(3.01±0.18)%和牡荆苷组的(35.51±2.04)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织中SOD活性明显低于正常对照组和牡荆苷组,MDA、NO摩尔浓度明显高于正常对照组和牡荆苷组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织中细胞质Nrf2蛋白相对表达量明显低于正常对照组,HO-1、NQO1和细胞核Nrf2蛋白相对表达量明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);牡荆苷组大鼠视网膜组织中细胞质Nrf2蛋白相对表达量明显低于模型组和正常对照组,HO-1、NQO1和细胞核Nrf2蛋白相对表达量明显高于模型组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论牡荆苷能减少RGCs凋亡,缓解RIR引起的大鼠视网膜氧化应激损伤,这一作用可能是通过活化Nrf2相关信号通路而实现的。     

葡萄糖调节蛋白在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的时相性表达及意义

目的 检测葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated protein 78,grp78)在大鼠视网膜缺血再灌注后不同时期的表达情况,探讨内质网应激在视网膜缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法 36只Wistar大鼠随机分为6组:缺血再灌注6 h、12 h、24 h、48 h和72 h组,以及正常对照组,每组6只大鼠.缺血组大鼠均行单眼生理盐水前房高压灌注(110 mmHg×60 min,1 kPa=7.5 mmHg)的方法 建立视网膜缺血再灌注模型,用免疫组织化学和半定量RT-PCR方法 检测grp78 在视网膜中的定位及时相性表达,取各组平均光密度值进行统计分析.结果 grp78在正常大鼠视网膜中少量表达,主要分布于视网膜内核层和神经节细胞层,免疫组织化学和RT-PCR检测均发现在视网膜缺血再灌注后6 h grp78的表达量开始升高(A值为0.778±0.004,与正常对照组0.756±0.007相比P＜0.05);再灌注后24 h其表达量达到峰值(A值为0.851±0.040),与正常对照组比较P＜0.01,与12 h组(A值为0.799±0.010)相比P＜0.01;再灌注48 h grp78表达开始下降(A值为0.825±0.007,与24 h相比P＜0.05),但仍高于正常对照组(P＜0.01);72 h组grp78的表达与正常组相比,差异无统计学意义.结论 grp78参与了大鼠视网膜缺血再灌注损伤机制,若能在损伤早期内质网应激环节上加以干预,可为临床治疗和干预提供一定的理论依据.     

糖尿病视网膜病变合并视神经病变的临床分析

目的探讨糖尿病视网膜病变合并糖尿病性视乳头病变和缺血性视神经病变两类疾病的发病特点及其发生与DR分期的相关性。方法回顾性分析诊断为DR的1126例患者2034只眼的眼底彩照、FFA与视野等资料,筛选出糖尿病性视乳头病变11例15眼,糖尿病缺血性视神经病变24例27眼,分析两组患者的年龄、眼别、视力、糖尿病病程、主诉等临床资料,并分析两类疾病的发生与DR分期的相关性。结果(1)DR合并DP发病率为0.74%,合并ION的发病率为1.33%,两类疾病在视力下降程度、糖尿病病程等方面都有不同。(2)背景期DR合并DP和ION的发病率高于增殖期DR。结论DR合并视神经病变并不少见,对于DR患者不明原因的视力下降,应考虑合并视神经病变的发生,以免延误患者病情。     

热休克蛋白与视网膜视神经疾病的研究进展

热休克蛋白是细胞在受到各种理化刺激后高效表达的一组蛋白质,具有保护细胞、抵抗细胞凋亡的作用,热休克蛋白在视网膜疾病及视神经再生及修复中的作用已引起人们重视,我们主要对热休克蛋白在视网膜视神经疾病方面的研究进展简要综述.     

糖尿病大鼠视网膜中内质网应激蛋白的表达及意义

目的 检测内质网应激蛋白(bip)在糖尿病大鼠视网膜组织中的表达情况,探讨内质网应激在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用和机制.方法 Wistar大鼠随机分为4组:链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠3、6、9个月模型组及正常对照组,每组10只.采用腹腔注射STZ 60 mg/kg,制备大鼠糖尿病模型;分批处死,每只大鼠左眼免疫组织化学法检测视网膜组织中bip的表达,右眼半定量RT桺CR方法 检测bip mRNA的表达.结果 bip在正常大鼠视网膜组织中少量表达,主要分布于视网膜内核层和神经节细胞层,糖尿病3个月组bip在各层的表达量升高,6个月组表达最高.结论 bip参与了DR的发病机制,在早期糖尿病大鼠视网膜组织中,细胞的应激能力随糖尿病病程延长而增强.     

不同类型视网膜病变患者视网膜外层厚度变化研究

目的　探讨不同类型视网膜病变（diabetic retinitis,DR）患者视网膜外层厚度的变化特点。方法　选择糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者194例（194眼），其中无糖尿病视网膜病变（non-diabetic retinopathy，NDR）患者75例为NDR组，增殖型糖尿病视网膜病变组（proliferative diabetic retinitis，PDR）组患者64例为PDR组，糖尿病视网膜病变黄斑水肿（diabetic macular edema，DME）组患者55例为DME组，并选择50名50眼正常健康人作为对照组，均进行光学相干断层扫描成像检查，测定黄斑中心凹及距黄斑中心凹750 μm处鼻上、颞上等方位视网膜光感受器外节厚度（photoreceptor retinal photoreceptor outer segmen，PROS）、视网膜光感受器厚度（total length of the photoreceptors，TLP）、视网膜神经纤维层厚度（retinal nerve fiber layer，RNFL），并分析上述指标与患者视力变化的关系。结果　四组患者黄斑中心凹PROS、TLP、RNFL比较差异均有统计学意义（均为P<0.05），PDR组、DME组黄斑中心凹PROS［（35.61±4.41）μm,(32.58±6.74)μm］、TLP［（48.14±3.26）μm,(44.11±2.71)μm］、RNFL［（53.02±5.44）μm,(49.85±4.36)μm］均低于对照组与NDR组（均为P<0.05），DME组均低于PDR组，其旁黄斑中心凹鼻上、颞上RNFL又低于PDR组，差异均有统计学意义（均为P<0.05）；四组患者最佳矫正视力比较差异均有统计学意义（均为 P<0.05），PDR、DME组最佳矫正视力(0.81±2.24，0.55±0.23)低于对照组与NDR组（均为P<0.05），DME组低于PDR组（P<0.05）；DR患者黄斑中心凹PROS、TLP及RNFL均与患者最佳矫正视力呈正相关（均为P<0.05）。结论　PDR、DME患者PROS、RNFL、TLP均较正常健康人与非DR患者变薄或缩短，且其变化与患者视力变化存在紧密关联。     

雷珠单抗联合全视网膜光凝治疗缺血型视网膜中央静脉阻塞的疗效观察

目的　探讨雷珠单抗联合全视网膜光凝（panretinal photocoagulation,PRP）治疗缺血型视网膜中央静脉阻塞（central retinal vein occlusion,CRVO）的效果。方法　选取2014年6月至2016年6月我院收治的缺血型CRVO患者90例（90眼）,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组各45例45眼,根据病程再将两组患者各分为两个亚组,A组病程≤3个月,B组病程>3个月,观察A、B组采用玻璃体内注射雷珠单抗（intravitreal injection of ranibizumab,IVR）+PRP治疗,对照A、B组采用单独PRP治疗,比较4组房水中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）水平,记录IVR前、PRP时及PRP后1周、1个月、3个月最佳矫正视力（best corrected visual acuity,BCVA）、黄斑中心凹视网膜厚度（central macular thickness,CMT）,并观察黄斑水肿复发率及不良反应。结果　观察A组和观察B组PRP时房水VEGF浓度较IVR前降低,且显著低于对照A组、对照B组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;观察A组PRP时及PRP后1周、1个月、3个月BCVA均优于对照A组,观察B组优于对照B组（均为P＜0.05）,且观察A组与观察B组、对照A组与对照B组比较,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;观察A组PRP后1周、1个月、3个月CMT均显著低于对照A组,观察B组低于对照B组（均为P＜0.05）,但观察A组与观察B组、对照A组与对照B组各时间点比较,差异均无统计学意义（均为P＞0.05）;观察A组和对照A组均未出现黄斑水肿复发,观察B组、对照B组黄斑水肿复发率分别为6.25%、10.0%,4组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;4组均未出现严重不良反应。结论　早期采用IVR联合PRP治疗缺血型CRVO效果确切,可显著改善视力水平。     

视网膜脂血症1例

视网膜脂血症(retinal lipoidemia)是不同原因产生的高脂血症时视网膜血管的表现、尽管高脂血症并非罕见，但视网膜脂血症却很少发现，其多发生于年轻伴有严重酸中毒的糖尿病患者，少数发生于非糖尿病原发性血脂过多或高脂血症患者。作者观察1例治疗前、后视网膜及视网膜血管的变化同血脂浓度的相关关系，报告如下。     

糖尿病性视神经病变的FFA诊断价值

目的探讨糖尿病性视神经病变的临床特点及FFA对其的诊断价值，指导临床分型及治疗。方法分析在我院行FFA检查，经内科明确诊断为糖尿病的587例患者（1074眼）的临床资料和FFA结果，筛选出视盘有异常表现（包括水肿、异常高荧光、充盈缺损、染色、新生血管）的患者，统计分析患者的临床资料，并根据文献提出的诊断标准，将糖尿病性视神经病变进行分型，包括糖尿病视乳头病变（DP）、缺血性视神经病变（ION）、视盘新生血管（NVD）、视神经萎缩，探讨各型的发病特点。结果（1）视盘有异常表现者157眼（14．6％），其中DP25眼，ION32眼，NVD85眼，视神经萎缩15眼，各型疾病在视力下降程度、患者年龄、糖尿病病程等方面都有不同。（2）增殖期DR344眼发生NVD71眼，比率为20．6％，但背景期DR合并DP和ION的发病率高于增殖期DR。结论糖尿病性视神经病变并不少见，FFA检查可以发现一些早期病变。在诊断中必不可少，具有重要的意义。     

葡萄糖调节蛋白78真核表达载体及稳定转染人视网膜色素上皮细胞株的构建

背景:葡萄糖调节蛋白78 是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用.目的:构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78 基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78 基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系.方法:扩增人葡萄糖调节蛋白78 全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1 进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR 方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78.通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78 转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418 筛选,建立稳定表达细胞系.结果与结论:体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR 方法检测,G418 筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78 mRNA 的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4 倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78 质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78.