转化生长因子-β（TGF-β）空间动态分布的角膜基质创伤修复体外三维培养体系的构建

目的　研究构建模拟角膜基质创伤修复过程中转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）空间动态分布的体外三维培养系统。方法　从新鲜牛眼中分离角膜基质细胞，用含体积分数10％胎牛血清（fetal bovine serum,FBS)的DMEM/F12培养基进行培养，而后构建Pellet体外三维培养模型进行培养。将Pellet分为有透析袋组和无透析袋组，置入Transwell小室系统上下室中培养48 h后换液，上室为0.50 μg·L^-1TGF-β1+0.25 μg·L^-1TGF-β2+体积分数10％FBS，下室为体积分数10％FBS，分别于培养后72 h观察Pellet培养模型的形态变化并采用Real-time PCR法分别检测2组上下室Pellet中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ，Col Ⅰ）和Col Ⅲ mRNA相对表达量。结果　培养后72 h Pellet均呈团状生长。有透析袋组Transwell小室系统上、下室α-SMA mRNA表达量分别为1.595±0.025、1.148±0.009，FN mRNA表达量分别为1.090±0.011、0.844±0.015，Col Ⅰ mRNA表达量分别为1.445±0.035、1.165±0.008，Col Ⅲ mRNA表达量分别为1.726±0.031、1.314±0.020，Col Ⅲ/Col Ⅰ比值分别为1.126±0.019、0.957±0.013，上下室各项指标比较差异均有统计学意义（均为P=0.000）。无透析袋组Transwell小室系统上、下室α-SMA mRNA表达量分别为1.363±0.018、1.360±0.002，FN mRNA表达量分别为0.946±0.017、0.952±0.012，Col Ⅰ mRNA表达量分别为1.261±0.011、1.258±0.029，Col Ⅲ mRNA表达量分别为1.459±0.027、1.462±0.033，Col Ⅲ/Col Ⅰ比值分别为1.157±0.029、1.163±0.090，上下室各项指标比较，差异均无统计学意义（均为P>0.05）。无透析袋组上室细胞中α-SMA、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ mRNA的相对表达量与有透析袋组上室、有透析袋组下室比较，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。无透析袋组下室细胞中α-SMA、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ mRNA的相对表达量与有透析袋组上室、有透析袋组下室比较，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　Transwell小室系统与透析袋相结合可构建模拟TGF-β空间动态分布的体外三维培养系统。