供体骨髓细胞输注促进小鼠皮肤移植耐受及其机理的研究

目的　探索“细胞 +环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统联合抗H 2 b 单克隆抗体、供体骨髓细胞输注诱导移植耐受的作用及其机制。方法　第 0天 ,经尾静脉给C5 7BL/ 6 (H 2 b,B6 )小鼠注入 10 8BALB/c(H 2 d,B/c)来源的脾细胞 ,第 2天 ,腹腔注射环磷酰胺 2 0 0mg/kg ,第 3、5天 ,分别经尾静脉注入抗H 2 b 单抗 ,剂量为 40 0 μg/ 0 .5ml,第 8天进行皮肤移植。皮肤移植后 1周 (第 15天 ) ,输入 2× 10 7供体BALB/c来源的骨髓细胞。观察皮肤移植物存活时间 ,并于第 30天对耐受B6小鼠作混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR) ,迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等确定耐受的状态。并通过过继转移实验、嵌合体检查及脾细胞中细胞因子mRNA的表达情况 ,进一步探讨耐受形成的机制。结果　采用此诱导方案 ,B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物长期存活。耐受可以被过继转移 ;耐受小鼠胸腺内的嵌合程度与耐受的维持密切相关 ;TH1型细胞因子在耐受小鼠中明显降低 ,而TH2型细胞因子明显升高。结论　“细胞 +CP”系统联合H 2 b 单克隆抗体、供体骨髓细胞输注能够诱导异基因小鼠皮肤移植耐受。耐受机制与胸腺嵌合体的存在密切相关。克隆无能 (aner gy)、抑制细胞和TH1/TH2偏移在耐受中也     

贝那普利联合美托洛尔治疗老年原发性高血压合并心力衰竭疗效分析

目的 对老年原发性高血压合并心力衰竭患者应用贝那普利联合美托洛尔进行治疗后分析治疗效果。方法 选取2020年1月-2022年7月在本院治疗的老年原发性高血压合并心力衰竭患者80例。按照随机抽签法将患者分成2组,参照组、试验组,40例/组,贝那普利药物疗法用于参照组,以此为基础,试验组再行美托洛尔药物疗法。针对2组患者治疗前后血压水平和心功能指标,及治疗前后的baPWV静息心率6MWT和生活质量、治疗有效率和不良反应开展讨论分析。结果 2组在药物治疗前的相关数据没有显著差异,两组比较后结果（P>0.05）;2组行不同药物治疗后,血压水平中参照组较差,数据比较后结果（P<0.05）;参照组和试验组心功能指标中参照组改善较差,数据分析后结果（P<0.05）;2组baPWV静息心率指标以及6MWT中参照组较差,对比分析后结果（P<0.05）;生活质量评分中参照组评分较低,研究对比结果为（P<0.05）;治疗有效率研究中参照组较低,统计分析后结果（P<0.05）;不良反应率中参照组和试验组无突出差异,对比后结果（P>0.05）。结论 对老年原发性高血压合...     

康柏西普单次玻璃体内注射对糖尿病黄斑水肿患者黄斑形态与功能的影响

目的　观察糖尿病黄斑水肿（diabetic macular edema,DME）患者接受康柏西普单次玻璃体内注射治疗后黄斑形态与功能的恢复情况。方法　回顾性分析23例（25眼）DME患者临床资料。按照是否接受康柏西普玻璃体内注射治疗分为治疗组和对照组。观察并比较两组患者观察起点与终点（治疗组术前与术后1个月比较,对照组入组与随访观察1个月比较）最佳矫正视力（best corrected visual acuity,BCVA）、黄斑中心凹视网膜厚度（central retinal thickness,CRT）和微视野计检测的视网膜光敏感度等。结果　治疗组观察起点CRT为(448.73±193.25)μm,观察终点CRT为（300.60±74.93）μm,二者比较差异有统计学意义(t=2.768,P=0.010)。所有患者经康柏西普玻璃体内注射治疗后均无手术并发症发生。所有研究对象4°内注视点均>75%,治疗组和对照组4°与8°的视野视网膜光敏感度观察终点与观察起点比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）,两组间4°与8°视野视网膜光敏感度在观察起点及观察终点比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）;两组12°平均视网膜光敏感度比较差异有统计学意义（P=0.011）。结论　玻璃体内单次注射康柏西普治疗DME安全有效,能够有效地减轻黄斑水肿及提高视力,形态学恢复早于功能学恢复。     

增生性玻璃体视网膜病变基因治疗的研究进展

随着分子生物学的发展，应用基因转移技术治疗PVR已成为可能。本对PVR的发病机制、PVR基因治疗的理论基础以及PVR基因治疗的方法和前景进行综述。     

Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中调控DNA损伤修复相关基因

目的:检测Dicer1在卵巢癌间质肿瘤相关成纤维细胞中的表达情况,探讨其对DNA双键断裂损伤(DSB)修复相关基因的影响。方法:应用基因集合富集分析(GSEA)方法分析卵巢癌间质和正常卵巢间质基因表达公共数据库GSE40595,探索Dicer1对DSB修复相关通路及关键基因的调控作用,并筛选出相关差异基因。应用重组人转化生长因子β1(h TGFβ1)细胞因子诱导成纤维细胞系MRC5细胞活化成为肿瘤相关成纤维细胞(CAFs),即MRC5-CAFs。以靶向Dicer1基因的siRNA转染MRC5-CAFs,下调其Dicer1表达水平。qRT-PCR、Western blot法分别检测Dicer1及分析所得相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX、BRCA1、ATR、RAD51 mRNA水平及Dicer1和DSB损伤修复关键基因γ-H2AX(磷酸化H2AX)、RAD51蛋白水平。荧光共聚焦检测细胞核蛋白γ-H2AX表达;采用CCK8试验检测细胞活性。结果:GSEA分析结果显示,Dicer1表达水平与DSB(NES=1.7942109,FDRq=0.0067545176)及DNA损伤修复(NES=2.4433048,FDRq=0)显著正相关,进一步通过相关分析筛选出在上述通路中与Dicer1表达正相关的显著基因集。沉默MRC5-CAFs细胞中Dicer1表达后,DSB相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX及损伤修复相关基因BRCA1、ATR、RAD51均较对照组显著下降,与GSEA分析结果一致。荧光共聚焦显微镜检测到沉默Dicer1 MRC5-CAFs细胞内聚集较少的DSB。CCK8试验结果显示,MRC5-CAFs细胞在20μmol/L顺铂作用下,Dicer1-si组不同时间梯度的细胞活性率均低于NC-si组。结论:Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中正向调控DNA损伤修复相关基因,抑制Dicer1表达后其对顺铂敏感性显著增加。     

整合素β1阳性卵巢癌细胞具干细胞样属性和间质属性分析

目的:检测和分选人卵巢癌细胞系SKOV3及原代卵巢癌细胞中整合素β1(ITGβ1)阳性细胞,鉴定其是否具有肿瘤干细胞生物学特性。方法:从临床卵巢癌患者腹水中成功分离卵巢癌细胞后,采用流式细胞技术检测SKOV3及原代卵巢癌细胞中ITGβ1和干细胞标志CD133的阳性率;流式分选得到ITGβ1(+)和ITGβ1(-)两群细胞后,采用qRT-PCR比较卵巢癌干细胞相关基因(CD44、CD133、ALDH1、OCT)及上皮间质化(EMT)分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)表达情况,采用悬浮成球试验观察两者干细胞潜能。最后通过免疫缺陷小鼠体内的有限稀释成瘤试验对比ITGβ1(+)/ITGβ1(-)细胞的成瘤能力、自我更新和自我分化能力。结果:SKOV3细胞中可检测到少量的CD133(+)细胞,其比率为(0.91±0.12)%,腹水原代细胞中CD133(+)比率为(2.38±0.34)%;ITGβ1检测SKOV3中ITGβ1(+)比率为(1.95±0.24)%,原代卵巢癌细胞中含量为(3.78±0.28)%;流式分选得到的ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞表达更高的干细胞基因(CD133、CD44、ALDH1、OCT4)(P<0.05)、更低的上皮标志E-cadherin(P<0.05)和更高的间质标志(N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)(P<0.05);悬浮成球试验结果显示:SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞成球数量明显增多,球体体积也明显大于ITGβ1(-)细胞(P<0.05);体内成瘤试验结果显示:在SKOV3细胞系或原代卵巢癌细胞中102个ITGβ1(+)细胞即可成瘤,成瘤比率分别为1/5和2/5,成瘤时间分别为64天和54天;而至少需要104个ITGβ1(-)细胞SKOV3细胞系才有成瘤现象,至少需要103个ITGβ(-)细胞原代卵巢癌细胞才有成瘤现象,成瘤比率均为1/5,成瘤时间分别为78天和68天;ITGβ1(+)细胞的成瘤能力至少为ITGβ1(-)细胞的100倍。结论:卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞高表达间质属性和干细胞基因,具备自我分化、自我更新和体内成瘤能力,ITGβ1(+)表型可考虑作为分选卵巢癌干细胞的新方法。     

猪骨蛋白对骨质疏松大鼠尿中钙磷水平的影响

摘要:目的:探讨猪骨蛋白对骨质疏松大鼠尿液中钙磷和羟脯氨酸水平的影响.方法:取3月龄Wistar大鼠60只,随机分成6组.A组大鼠灌胃2.5 ml/d生理盐水,其它各组大鼠2.5 ml/(kg·d)肌肉注射地塞米松,2次/周,共6周造成骨质疏松模型.之后,A和B组灌胃5ml/d生理盐水,C组灌胃300 mg/(kg·d...     

内质网功能状态对卵巢癌细胞顺铂敏感度的影响

目的 探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）功能状态对卵巢癌细胞顺铂（DDP）敏感度的影响。方法 卵巢癌细胞系SKOV3接受40 μmol/L DDP处理24 h后, qRT-PCR检测ERS相关基因改变;同时内质网示踪染料（ER-tracker）观察内质网形态变化;分别用ERS稳定剂牛磺熊去氧胆酸钠（tauroursodeoxycholate, TUDCA）或ERS诱导剂毒胡萝卜素（thapsigargin, TG）预处理SKOV3,再接受DDP处理,应用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP是否表达;从临床卵巢癌患者腹水中分离与培养原代卵巢癌细胞后,采用流式细胞术比较TUDCA及TG预处理对原代卵巢癌细胞DDP敏感度影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白PARP和Caspase-3的变化。结果 顺铂处理卵巢癌细胞系SKOV3后能够引起明显的ERS,ERS相关蛋白明显上调,内质网形态呈现颗粒化;TUDCA可以显著下调DDP引起的杀伤作用（P<0.05）,显著降低GRP78和CHOP蛋白水平;TG可以显著上调DDP引起的杀伤作用（P<0.05）、GRP78和CHOP蛋白水平;在卵巢癌腹水原代细胞中TUDCA亦可显著抑制DDP引起的杀伤作用（P<0.05）,TG亦可显著上调DDP引起的杀伤作用（P<0.05）。结论 改变ERS的功能状态能够影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

玻璃体切割术治疗后节眼球内异物的临床分析

目的 探讨玻璃体切割术治疗后节眼球内异物的临床效果。方法 对我院1999年1月～2004年10月收治各种后节球内异物95例98眼进行回顾性研究，均采用玻璃体切割联合眼球内异物取出术。按照手术前并发症将研究对象分为眼内炎组、牵拉性视网膜脱离组（Traction retinal detachment，TRD）与其它组，分析眼外伤严重程度对预后的影响，按照手术干预距外伤时间分为不同时间组，分析手术时间对眼球内异物预后的影响。结果 98眼中93眼后节眼球内异物一次手术取出率为94．0％。出院时视力≥0．01者69眼（69／98 70．41％），最好视力0．8。41例随访3个月～25个月，视力〈0．01者10眼（10／41 24．39％），0．01～0．09者12眼（12／41 29．27％），≥0．1者19眼（19／41 46．34％）。眼内炎组术后视力≥0．01为31．25％，非眼内炎非TRD组术后视力≥0．01为85．71％，两组比较有显著差异性（X^2=15．25，P〈0．005）。TRD组术后视力≥0．01为66．67％，与非眼内炎非TRD组比较，有显著差异性（X^2=4.18，P〈0．05）。眼内异物伤后24小时之内进行玻璃体切割眼内异物摘除术，术后视力≥0．01为70．59％，但经X^2处理差别无显著意义。结论 玻璃体切割术治疗后节眼球内异物有临床优越性。玻璃体切割眼球内异物取出术后视力恢复与外伤严重程度有关。为防止并发症对术后视力影响，应强调尽早行玻璃体切割眼球内异物取出手术。但需根据眼内炎症的反应、异物的性质及玻璃体视网膜情况决定手术时机。     

视网膜色素上皮损伤后相邻感光细胞及脉络膜血管的病理变化

目的:研究视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)损伤后相邻感光细胞和脉络膜血管的病理变化。方法:机械性刷除青紫蓝兔眼底髓线上方的RPE细胞,观察术后7,14,30d和90d清除区相邻感光细胞和脉络膜血管变化。结果:RPE细胞清除术后相邻的感光细胞发生退行性改变和死亡,脉络膜毛细血管萎缩。结论:RPE清除术可模拟萎缩型年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)及渗出型AMD剥膜以后的病理变化,为自体RPE移植挽救损伤的感光细胞的实验提供了良好的动物模型。