实验性视网膜缺血-再灌注损伤中坏死性凋亡相关因子的表达变化

目的　建立视网膜缺血-再灌注损伤（ｒｅｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ,ＲＩＲＩ）模型,观察坏死性凋亡是否参与其病理过程。方法　野生型Ｃ５７小鼠随机分为对照组及实验组。对照组不做任何处理,实验组采用前房灌注法建立ＲＩＲＩ模型,并于ＲＩＲＩ后１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ分别收集视网膜或眼球,行荧光定量ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫荧光染色检测受体相互作用蛋白（ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＲＩＰ）３及ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的表达变化。结果　荧光定量ＰＣＲ检测ＲＩＰ３、ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的ｍＲＮＡ表达,与对照组比较,实验组在不同时间点均有显著升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＩＰ３及ＲＩＰ１表达以早期升高为主,后期逐渐下降。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。组织切片免疫荧光染色也发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。结论　实验性ＲＩＲＩ模型中,坏死性凋亡参与了其病理过程。坏死性凋亡特异性蛋白ＲＩＰ３表达以早期升高为主,后期逐渐下降。     

秋水仙碱对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究秋水仙碱对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTCFs)增殖及凋亡的影响.方法 体外培养HTCFs,并对传代培养的细胞进行鉴定;采用MTS法检测不同浓度的秋水仙碱对HTCFs增殖的抑制作用;以Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测秋水仙碱对细胞凋亡的影响;使用蛋白质印迹法检测秋水仙碱对凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Caspase-9、Caspase-3及active-Caspase-3表达的影响.结果 MTS检测显示秋水仙碱对HTCFs具有明显抑制作用,并呈剂量及时间依赖性.流式细胞术检测发现秋水仙碱作用48 h可诱导HTCFs发生剂量依赖性凋亡,与对照组相比,5μmol·L-1、10 μmol·L-1、20μmol·L-1的秋水仙碱作用HTCFs的凋亡率分别为(18.37±4.26)％、(33.80±5.02)％及(52.00±2.00)％,差异具有统计学意义(F=91.59,P＜0.00l).蛋白质印迹法检测结果显示,秋水仙碱可诱导细胞内凋亡关键蛋白Caspase-3及PARP的活化.结论 秋水仙碱可以明显抑制HTCFs的体外增殖,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活而诱导细胞发生凋亡相关.