热量限制对成年弱视小鼠初级视皮质突触可塑性的调控作用

目的：探讨热量限制（CR）对成年单眼形觉剥夺（MD）弱视小鼠视皮质突触可塑性的调控作用及可能的分子机制。方法：实验研究。将54只新生健康昆明小鼠按随机数字表法分为正常组、MD+自由进食（AL）组、MD+CR组,每组18 只。小鼠21 日龄时构建MD模型,35 日龄时去除剥夺因素,63 日龄时通过行为学检测视敏度及电生理检测视功能;免疫组织化学及Western Blot法检测视皮质组织中可塑性相关蛋白突触后致密蛋白95（PSD95）、突触素（SYP）、生长相关蛋白43（GAP-43）等的表达;RT-PCR检测胰岛素样生长因子1（IGF-1）的表达。采用重复测量双因素方差分析比较各组数据差异。结果：最终正常组、MD+AL组、MD+CR组分别有14、18、18 只小鼠完成研究。从第1 周开始,MD+CR组小鼠体质量百分比的增加明显低于MD+AL组（P<0.05）。MD+AL组小鼠视敏度明显低于正常组和MD+CR组小鼠的视敏度（P<0.05）。MD+AL组小鼠PSD95、GAP-43、SYP的表达均明显低于正常组和MD+CR组小鼠（P<0.05）。MD+AL组小鼠视皮质中IGF-1 mRNA水平较正常组和MD+CR组显著降低（P<0.05）。结论：CR能改善成年MD弱视小鼠视觉功能,增加视皮质中可塑性相关蛋白的表达,重新激活视皮质可塑性,其机制可能与其调节IGF-1的表达有关。     

急性高眼压后大鼠视网膜葡萄糖转运因子-1的表达

目的:观察急性高眼压后大鼠视网膜葡萄糖转运因子-1(GLUT-1)的表达变化及其对视网膜损伤的影响.方法:利用急性高眼压大鼠模型,通过免疫组织化学和免疫印迹检测急性高眼压后大鼠视网膜GLUT-1蛋白的表达变化;Nissl染色观察视网膜神经细胞层次改变及节细胞数的变化.结果:正常视网膜血管内皮细胞有GLUT-1表达,急性高眼压后3h开始下调,6h达最低值,之后1d、3d、7d逐渐恢复至正常水平.Nissl染色结果显示急性高眼压后3h、6h和12 h视网膜节细胞数减少不明显,到1、3d,视网膜层次紊乱、变薄,节细胞数明显减少.结论:急性高眼压后早期大鼠视网膜GLUT-1表达下调,影响了视网膜葡萄糖的转运,这可能是视网膜结构紊乱,节细胞丢失的重要原因.     

IGF-1介导的丰富环境对成年弱视小鼠视皮层可塑性的影响

目的:检测丰富环境干预对单眼剥夺成年弱视小鼠视皮质中IGF-1及其受体的表达变化,初步探讨其对成年弱视小鼠初级视皮质突触可塑性的影响及分子机制。方法:将正常新生昆明小鼠随机分为正常组(Nor),单眼剥夺+标准环境组(MD+SE),单眼剥夺+丰富环境组(MD+EE),单眼剥夺+氟西汀组(MD+FLX)。在小鼠21日龄时构建单眼剥夺模型,确定模型建立成功后,每组选取18只小鼠按照预先分组放置在标准环境或丰富环境中饲养4wk,单眼剥夺+氟西汀组小鼠饮水中加入氟西汀。通过前爪触地反射实验检测小鼠视敏度,闪光视觉诱发电位检测客观视功能;小鼠处死后取材,使用电镜检测视皮层神经元的突触间隙宽度、突触活性区长度及突触后致密物厚度,Western Blot法检测视皮层中IGF-1、IGF-1R及IGFBP5蛋白表达。结果:(1)视敏度检测结果:MD+SE组小鼠前爪触地成功率明显低于Nor组(P<0.001);MD+EE组及MD+FLX组小鼠前爪触地成功率明显高于MD+SE组(均P<0.001);与MD+FLX组比较,MD+EE组小鼠前爪触地成功率无差异(P=0.816)。(2)闪光视觉诱发电位检测结果:与Nor组比较,MD+SE组小鼠剥夺眼闪光视觉诱发电位P2波潜伏期延长、波幅降低(均P<0.01);丰富环境饲养后,MD+EE组较MD+SE组小鼠剥夺眼闪光视觉诱发电位P2波潜伏期缩短、波幅增加(均P<0.01);与MD+FLX组比较,MD+EE组小鼠剥夺眼闪光视觉诱发电位P2波的潜伏期和波幅变化无差异(P>0.05)。(3)电镜检测视皮层神经细胞突触超微结构:与N or组比较,M D+SE组小鼠剥夺眼对侧视皮层神经细胞突触间隙增宽(P <0.01),突触活性区长度缩短(P <0.01),突触后致密物厚度变薄(P <0.01);丰富环境饲养后,MD+EE组小鼠较MD+SE组突触间隙变窄(P=0.0035),突触活性区长度延长(P<0.01),突触后致密物厚度增加(P<0.01),MD+EE组突触超微结构各项指标较MD+FLX组比较无差异(P>0.05)。(4)Western blot检测视皮层中IGF-1、IGF-1R及IGFBP5蛋白表达:MD+SE组小鼠IGF-1及IGF-1R蛋白表达明显低于Nor组(均P<0.01);MD+EE组小鼠IGF-1及IGF蛋白的表达明显高于MD+SE组(均P<0.01),然而仍显著低于Nor组(均P<0.01)。各组间小鼠IGFBP5蛋白表达异常无差异(P>0.05)。结论:丰富环境能重新激活成年单眼剥夺弱视小鼠视皮质可塑性,改善弱视小鼠视觉功能,其机制可能与调控IGF-1及受体的表达有关。     

Adiporedoxin对TNFα诱导血管内皮细胞Integrin α4和Integrin β1表达的影响

目的研究脂过氧化物酶(adiporedoxin,Adrx)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导血管内皮细胞整合素α4(Integrin α4)和整合素β1(Integrin β1)表达的影响。方法过表达实验分为空载体组、空载体+TNF-α组、Adrx+TNF-α组;si-RNA干扰实验分为si-Control组、TNF-α组、si-Adrx+TNF-α组。将Adrx质粒和si-Adrx分别转染HUVEC细胞后,用TNF-α处理细胞,Real-time PCR和Western blotting分别检测Integrin α4和Integrin β1 mRNA和蛋白水平。结果TNF-α上调Integrin α4、Integrin β1表达;与单用TNF-α处理组比较,Adrx+TNF-α组细胞Integrin α4和Integrin β1 mRNA和蛋白水平均显著降低;而用si-RNA下调Adrx表达后,TNF-α诱导的Integrin α4和Integrin β1 mRNA和蛋白水平均明显升高。结论Adrx负调控TNF-α诱导的HUVEC细胞Integrin α4和Integrin β1表达。     

暗饲养对视神经横断后SD大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的探讨视神经横断后Müller细胞在改善视网膜节细胞轴突再生微环境及其对光信号传递突触的保护作用。方法实验建立视神经横断模型,随机分成正常昼夜循环组及黑暗饲养组,用免疫组织化学及Western blot法检测视神经横断后,SD大鼠在正常昼夜循环条件及黑暗条件下饲养时视网膜谷氨酰胺合成酶随饲养时间延长的表达变化;Nissl染色法观察相应视网膜节细胞的形态结构改变。结果正常昼夜循环饲养的大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶的表达于视神经横断后持续减少,5 d时达最低值;暗饲养的大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶的表达于视神经横断后3 d时最低,5~7 d时持续增加。Nissl染色显示暗饲养组大鼠视网膜节细胞14d时存活较多。结论正常昼夜循环条件视神经横断后Müller细胞谷氨酰胺合成酶的表达呈应激性反应,暗饲养能在突触溃变关键期维持视网膜内谷氨酰胺合成酶的表达强度。     

SD大鼠视网膜中央动脉的应用解剖学研究

目的　为建立稳定可靠的视神经损伤动物模型寻求解剖学依据。 方法　用红色乳胶灌注技术显示正常SD大鼠视网膜中央动脉的来源、分支、分布及其与视神经的关系,并采用体视显微镜摄片测量;明胶墨汁灌注技术显示距眼球后极2.0 mm或6.0 mm处横断视神经后视网膜的血供。 结果　视网膜中央动脉及其分支在视神经鞘内始终与视神经干伴行,视网膜中央动脉起始部到眼球后极的距离为(5.784±0.054)mm;距离眼球后极6.0 mm处鞘内视神经横断组大鼠视网膜单位面积血管数目高于其他部位横断组。 结论　在制备视神经损伤SD大鼠模型时,损伤视神经应在鞘内进行,损伤部位距眼球后极　6.0 mm最佳。     

三七总皂苷预处理对炎性内脏痛大鼠磷酸化细胞外信号调节激酸表达的影响

目的:研究三七总皂苷(PNS)预处理对磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)在炎性内脏痛大鼠脊髓及背根节的表达影响,探讨PNS对炎性内脏痛影响的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、PNS预处理组、生理盐水(NS)预处理组,处理后15 d行乙酸腹腔注射造模,每15 min记录内脏痛指数;取小肠组织进行H-E染色,光镜下计数粒细胞数目;应用免疫组织化学检测脊髓及背根节p-ERK的表达。结果:乙酸腹腔注射后,小肠炎性反应明显增强,小肠黏膜下层增厚,但各时间点与对照组比较,实验组粒细胞数无差异;120 min时PNS预处理组内脏痛指数明显低于NS预处理组;两预处理组脊髓后角pERK表达较正常组明显增高,30、60 min时PNS预处理组脊髓后角及相应背根节p-ERK表达明显高于NS预处理组。结论:PNS预处理缓解乙酸致炎性内脏痛可能是通过调节中枢神经系统起作用的,且可能与抑制p-ERK表达有关。     

人体解剖学神经系统教学探讨

神经系统是解剖学教学的重点和难点,文章从强调神经系统总论的教学,营造学生良好开端的学习氛围;应用多种教学方法授课,提高学生学习的兴趣和效率;加强实验教学,提高学生对知识的理解和掌握;联系临床病例,培养学生分析问题和解决问题的能力等方面对神经系统的教学进行探讨。     

miR-19b靶向沉默ABCA1调控巨噬细胞胆固醇流出

目的 探讨miR-19b对三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）介导巨噬细胞胆固醇流出的影响及其机制。方法 将miR-19b mimic或miR-19b inhibitor转染入THP-1源性巨噬细胞,液体闪烁计数仪检测细胞内胆固醇流出,油红O染色观察细胞内脂滴情况,生物信息学分析miR-19b与ABCA1 3′UTR的结合关系,荧光素酶报告基因检测miR-19b与ABCA1的结合情况,Western blot检测ABCA1 蛋白水平。结果 miR-19b抑制巨噬细胞胆固醇流出,增加胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成,而anti-miR-19b则刚好出现相反的结果。miR-19b与ABCA1 3′UTR的3110-3116位结合,且二者结合的自由能较低。miR-19b显著抑制荧光素酶活性及其巨噬细胞中ABCA1蛋白的表达。结论 miR-19b靶向沉默ABCA1进而抑制其介导的胆固醇流出,增加巨噬细胞内脂质蓄积。     

三七总皂苷对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞活化的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为溶媒对照(NS)组、LPS组、三七总皂苷预处理(PNS+LPS)组,采用新奇环境抑制摄食实验、糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验观察小鼠的抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测海马、杏仁核小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)的表达变化。结果 LPS导致小鼠出现抑郁样行为,包括新奇环境摄食潜伏期延长(P<0.05),糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾不动时间延长(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),PNS干预可逆转上述抑郁行为表现(P<0.05);LPS导致小鼠海马和杏仁核IBA-1阳性细胞数目显著增多(P<0.0001),PNS预处理能明显减少IBA-1的阳性细胞数(P<0.05)。结论三七总皂苷能有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁行为,其机制可能与抑制脑内小胶质细胞活化有关。