CFDA-SE标记虹膜色素上皮细胞的自体移植

目的探讨兔眼自体虹膜色素上皮细胞（irispigment epithelialcells，IPECs）羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）标记后，采用单通道内路移植方法将传代的IPECs移植于视网膜神经上皮层下的可行性。方法取兔眼自体虹膜细胞分离培养并传代，于第3代经CFDA-SE染色后移植到自体视网膜神经上皮层下。术后不同时间应用彩色眼底照相、激光扫描检眼镜、光学相干断层扫描进行活体观察。不同时间点对移植眼进行切片并常规染色及免疫组化，用光学显微镜对移植细胞进行观察和评价。实验数据采用两均数的等效检验，以0．5倍标准差作为等效界值观察移植前后ZO-1和Actin表达情况。结果移植术后观察显示移植区界限清晰；激光扫描检眼镜可观察到移植区内荧光；光学相干断层扫描和HE染色均显示移植区神经上皮层下有色素上皮细胞堆积，并随时间推移堆积逐渐变平。经免疫组化显示移植区ZO-1、Actin呈棕色点，有规律的间断分布在Bruch膜上，IPECs嵌插在原始的RPECs间，且形成完整的单层。结论CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料，在IPECs移植中可作为理想的标记物应用；我们首次使用的单通道内路移植方法具有手术快捷简单、安全、并发症少等优点。[眼科新进展2007；27（3）：165-169】     

青光眼滤过手术中抗瘢痕治疗的研究进展

青光眼滤过手术是降低青光眼眼内压的主要手术方法,其目的是为了建立一个可替代的房水流出通道来降低眼内压,避免术后瘢痕形成是通道建立的关键。免疫抑制剂如丝裂霉素c、5-氟尿嘧啶用来对抗滤过术后瘢痕形成由来已久。虽然这些药物提高手术的成功率,但不良反应、并发症一直困扰着临床医生。近年来,不断有新型抗瘢痕药物被发现,本文就最近几年用于青光眼滤过术的抗瘢痕药物作一综述。     

活体染料羧基荧光素乙酰乙酸对兔眼虹膜色素上皮细胞体外染色的研究

目的 探讨活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记兔眼虹膜色素上皮（IPE）细胞的可行性。 方法 使用酶消化加机械分离的方法分离培养兔眼IPE细胞，将传3～4代的IPE细胞用2.5、5、10、20、40 μmol/L浓度的CFSE分别作用1、5、10 min进行染色，通过观察染色后的细胞荧光强度和细胞贴壁率筛选出最理想的标记条件。采用流式细胞术追踪检测标记的IPE细胞的荧光强度变化。用免疫荧光抗体标记法检测此染色剂有无渗漏以及是否对周围细胞着染。 结果 浓度为20 μmol/L的CFSE 37℃下水浴作用1 min为IPE细胞染色、观测、研究的最适条件。流式细胞仪和荧光显微镜观察结果显示，CFSE对IPE细胞染色可持续4周以上，未发生染料渗漏或转染其它细胞，且此浓度的CFSE不影响细胞的性状。 结论 活体染料CFSE是一种染色率高，追踪时间长，应用简便安全可靠的标记兔IPE细胞的新方法。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 261-264)     

一种体外培养兔眼色素上皮细胞的新方法

目的 建立一种体外培养的兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的新方法.方法 采用Dispase对兔眼RPE细胞进行原代培养,免疫组化通过MNF116和s-100鉴定细胞纯度.将细胞接种于铺有laminin的Transwell滤膜上,观察到细胞融合后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况.结果 成功培养了原代兔眼RPE细胞并且无其它细胞污染.透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接.ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成.结论 兔眼RPE细胞能够用Dispase成功分离并培养.     

体外培养的成年兔眼色素上皮细胞屏障功能的研究

目的 研究体外培养的成年兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的血-视网膜外屏障功能.方法 对成年兔眼RPE 细胞进行原代培养,免疫组织化学通过MNF116和S-100鉴定细胞纯度.将细胞接种于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上,分别于培养过程中不同时间点进行跨膜电阻测定,待电阻达到平台期后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况.结果 成功原代培养了兔眼RPE 细胞并且无其他细胞污染.接种于Transwell后,RPE 细胞TER值3周达到最高值约88.14 Ω·cm2,维持1周并开始下降.透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接.ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成.结论 成年兔眼RPE细胞通过培养于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上可以成功建立细胞屏障功能模型.     

活体染料羧基荧光素乙酰乙酸标记视网膜色素上皮细胞的体外研究

视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cens，RPECs）的退化导致视网膜感觉层的继发性改变，甚至产生视力丧失。RPECs的移植治疗仍是临床和研究的热点。其中，移植细胞的标记始终是移植研究的一个难题。活体染料羧基荧光素乙酰乙酸[5-（and-6）-carboxyflurescein diacetate，succinimidylester，CFDA-SE]最初是用于研究淋巴细胞增殖，具有染色好、阳性率高、观察结果直观可靠、并可长期追踪标记细胞等优点，现已被应用于标记血细胞，并成功的用于移植细胞的定位及标记。我们首次将此染料用于标记RPECs，深入探究此标记方法的可行性及优点，为今后RPECs移植研究开辟了广阔的前景。     

胚胎发育中神经视网膜对血视网膜外屏障结构形成的作用

目的 研究胚胎发育中神经视网膜对血视网膜外屏障结构形成的作用。 方法 将孵化7、10、14 d的鸡胚眼各150、120和90只，分批分别剥离视网膜神经上皮层（RNE）和色素上皮层（RPE）。RNE用来制备不同条件的培养液（7drcS F3、10drcSF3和14drcSF3），将7 d和14 d的RPE细胞分别培养到12 mmTranswell滤膜上,其顶房分别用SF3或上述条件培养液，底房均用SF2培养液。形成单层RPE细胞后，测定此上皮层的电阻(TER)。最后固定细胞，用细胞免疫组织化学方法和透射电子显微镜检测RPE细胞间紧密连接形成的情况。 结果 不同培养液(SF3/S F2, 7drcSF3/SF2,10drcSF3/SF2, 14drcSF3/SF2)培养7d和14d鸡胚眼的RPE细胞TER之间的差异有非常显著性的意义(P＜0.01)。电子显微镜结果显示神经视网膜条件培养液可以使RPE细胞产生细胞极性，有效地促使紧密连接条带形成连续的网状结构。 结论 神经视网膜对血视网膜外屏障结构的形成起积极的促进作用。 （中华眼底病杂志，2004，20：237-240）     

角膜内皮损伤的相关因素分析

角膜保持透明性的重要条件是内皮细胞的生理功能正常和解剖完整,内皮损伤的影响因素取决于年龄,外伤,遗传,代谢遗传,可在相关术后被破坏其组织结构,眼病相关及全身疾病都会影响角膜内皮的生理特性,成人内皮损伤后不能再生,只能靠邻近细胞迁移及扩展,近年来专家和学者对角膜内皮相关研究越发关注,本文就引起角膜内皮损伤的个性因素及相关原理作一综述。