特应性皮炎患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶信号转导通路的表达

目的 探讨特应性皮炎（AD）患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶（PI3K）信号转导通路活化情况及其临床意义。 方法 检测38例AD患者的T细胞PI3K通路活性,健康对照组38例。外周血T淋巴细胞分离采用Rosettsep T细胞提取试剂盒提取,PI3K活性采用免疫沉淀和酶联免疫吸附试验（ELISA）,Akt及其磷酸化蛋白采用免疫印迹法,T细胞增殖采用噻唑蓝（MTT）,白细胞介素（IL）6和IL-10水平采用ELISA检测。 结果 新鲜分离的AD患者外周血T细胞PI3K和Akt活性均显著高于健康对照组（P < 0.05）。AD患者T细胞在体外培养24 h后PI3K和Akt活性与健康对照组比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,健康对照组T细胞用AD患者血清孵育24 h后PI3K和Akt活性显著增高（P < 0.05）。PI3K特异性抑制剂LY294002显著抑制AD患者T细胞增殖［（123 ± 25）和（195 ± 28）,P < 0.05］及分泌IL-6和IL-10分别为［（431 ± 64） ng/L和（823 ± 128） ng/L,P < 0.05］,［（120 ± 21） ng/L和（213 ± 35） ng/L,P < 0.05］。新鲜分离的AD患者外周血T细胞PI3K和Akt活性与疾病严重程度指数（EASI）无相关。 结论 AD患者外周血T细胞存在磷酸肌醇3激酶信号转导通路活化异常,并与T细胞增殖和细胞因子分泌有关,提示AD患者外周血中可能存在激活该通路的血清因子。     

成人急性髓系白血病患者CD68、C反应蛋白、血小板计数与疗效的相关性研究

目的 探讨成人急性髓系白血病（AML）患者CD68、C反应蛋白（CRP）、血小板计数（PLT）与疗效的相关性。方法 根据疗效是否为完全缓解（CR）将96例AML患者分为CR组（n=53）和非CR组（n=43）。分析疗效的影响因素及CD68、CRP、PLT与疗效的相关性。结果 CR组患者CD68和CRP均明显低于非CR组,PLT明显高于非CR组,差异均有统计学意义（P﹤0.01）。多因素分析显示,CD68、CRP及PLT均是AML患者疗效的独立影响因素（P﹤0.05）。Kendall分析显示,AML患者疗效与CD68、CRP均呈负相关,与PLT呈正相关（P﹤0.01）。结论 CD68、CRP及PLT均是AML患者接受治疗后疗效的独立影响因素,并且CD68、CRP与疗效呈负相关,PLT与疗效呈正相关,因此在AML患者的治疗过程中,动态监测相关影响因素的变化情况可以为临床医师诊断病情提供依据。     

生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

目的 探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法 培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组,分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染。实时定量反转录-聚合酶链反应（RT?PCR）、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达。采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 转染后48 h,生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56 ± 0.15、0.88 ± 0.37、0.90 ± 0.43,蛋白表达水平分别为0.59 ± 0.04、0.86 ± 0.05、0.91 ± 0.07,差异均有统计学意义（F = 276.67、243.61,均P < 0.001）,且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（均P > 0.05）。重复测量方差分析显示,转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖（F = 13.19,P = 0.004）,且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组（均P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后24 h, 3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 83.97,P = 0.002）,且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后48 h,生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组（均P < 0.05）和阴性对照组（均P < 0.05）。结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点。     

输血相关急性肺损伤患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞变化的临床意义

目的检测输血相关急性肺损伤（TRALI）患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞（Treg）的计数及其功能基因又头框蛋白3（Foxp3）mRNA的表达水平,以及探讨其与疾病预后的关系。方法收集2008年6月至2011年11月期间健康体检者（对照组,n=30）和重症监护病房收治的TRALI患者[TRALI组,n=26,TRALI组按预后又分为死亡组（n=5）和存活组（n=21）]外周抗凝血,采用流式细胞术分析各组T细胞亚群。采用四色流式细胞术以Foxp3-FITC／CD25-PE／CD4-PerCP／CD3-PC7抗体组合检测各组受试者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的计数,比较死亡组和存活组患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的水平。实时荧光定量PCR技术检测特异性转录因子Foxp3mRNA的表达水平,并分析患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的比例与Foxp3mRNA的表达水平的关系。结果TRALI患者与对照组健康人间CD3＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞计数的差异无统计学意义,而CD3＋CD8＋T细胞则较对照组增加（P〈0．05）,CD4＋／CD8＋比值降低（P〈0．05）。死亡组CD3＋CD8＋T细胞比例高于存活组（P〈0．05）,C133＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞比例和CD4＋／CD8＋比值则低于存活组（均P〈0．05）。TRALI患者外周血CD4＋CD2.5high Foxp3＋Treg计数为（8．86±3．14）％,明显高于健康对照组（5．67±2．43）％（P〈0．05）。TRALI死亡组患者外周血CD4＋CD2shighFoxp3＋Treg计数为（11．23±3．79）％,显著高于存活组患者（7．69±3．21）％（P〈0．05）。TRALI患者外周血Foxp3mRNA的表达水平为（3．77±2．73）×10^5拷贝/ug,显著高于对照组（0．43±0．21）×10^5拷贝／μg（P〈0．05）。TRALI患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg计数与Foxp3mRNA的表达水平呈正相关（r=0．5131,P〈0．05）。结论TRAM患者外周血CD4＋CD.5highFoxp3＋Treg和Foxp3mRNA的变化可能是导致TRALI疾病发展的关键因素之一,与?     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶信号通路在强噪声诱导豚鼠前庭毛细胞凋亡中的作用

目的 探讨强噪声对豚鼠前庭毛细胞死亡的机制及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通道在强噪声诱导前庭毛细胞凋亡中的作用,进一步揭示噪声性耳聋的发病机制,为临床治疗提供理论基础.方法 将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1、5、15d组及对照组(每组各8只)在处死前测ABR.取每组4只豚鼠前庭毛细胞作石蜡切片.另外4只豚鼠提取前庭毛细胞总蛋白,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测前庭毛细胞的凋亡,免疫组织化学法及Western blotting法检测JNK信号途径蛋白质P-JNK、P-c-Jun的表达.结果 噪声暴露组前庭毛细胞存在TUNEL阳性细胞,以1d组最多,逐渐减少,15 d组最少,对照组未见阳性细胞.免疫组织化学结果显示,噪声暴露组P-JNK、P-c-Jun有免疫反应阳性,定位于细胞核,对照组未见阳性细胞.Western blotting检测JNK信号途径蛋白质P-JNK、P-c-Jun水平在强噪声刺激后,1d迅速增高并快速活化,5d达高峰,随后逐渐下降,但在15d仍然维持较高水平.结论 强噪声可以通过诱导细胞凋亡造成前庭毛细胞损伤,同时P-JNK标志着JNK信号途径的激活,提示JNK信号通路可能是介导强噪声诱导豚鼠前庭毛细胞凋亡信号通道之一,在前庭毛细胞损伤中发挥重要作用.     

臭氧暴露对哮喘大鼠CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞数量和Foxp3mRNA表达的影响

目的 探讨低浓度臭氧暴露对支气哮喘大鼠CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量及转录因子Foxp3mRNA表达的影响.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、臭氧暴露组、哮喘组和臭氧暴露哮喘组,每组15只.哮喘组采用卵清白蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备哮喘模型,正常对照组雾化生理盐水,臭氧暴露组予吸入低浓度臭氧,臭氧暴露哮喘组于每日雾化激发OVA前给予低浓度臭氧吸入.流式细胞仪检测外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血和肺组织γ-干扰素(γ-INF)以及白细胞介素-4(IL-4)含量;聚合酶链反应(PCR)检测肺组织Foxp3mRNA表达水平.结果 哮喘组大鼠CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞占CD4T细胞的比例为6.12％±1.03％,臭氧暴露组为5.87％±1.26％,均低于正常对照组(9.85％±1.34％);臭氧暴露哮喘组CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞占CD4T细胞的比例为(3.31％±0.85％),低于正常对照组和哮喘组,差异均有统计学意义(P＜0.01).哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[血浆:(21.83±5.12) ng/L,肺组织:(0.89±0.13) ng/L]高于正常对照组[血浆:(10.58±2.73) ng/L),肺组织:(0.32±0.11) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.01);臭氧暴露哮喘组血浆和肺组织中IL-4含量[血浆:(35.47±7.24) ng/L,肺组织:(1.58±0.43) ng/L]高于正常对照组和哮喘组,差异有统计学意义(P＜0.01).哮喘组血浆和肺组织中γ-INF含量[血浆:(61.78±23.45) ng/L,肺组织:(0.69±0.21) ng/L]低于正常对照组[血浆:(158.89±60.23) ng/L,肺组织:(1.86±0.29) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.01),臭氧暴露哮喘组γ-INF含量[血浆:(10.28±2.63) ng/L,肺组织:(0.46±0.12) ng/L低于正常对照组和哮喘组,差异有统计学意义(P＜0.01).臭氧暴露哮喘组和哮喘组Foxp3mRNA表达低于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 低浓度臭氧暴露可能通过下调CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量并抑制Foxp3mRNA表达,加重哮喘大鼠体内Th1/Th2比例失衡,提示臭氧暴露可能是诱发哮喘发病的因素之一.     

重症胰腺炎肺损伤大鼠磷脂酰肌醇-3激酶表达及其抑制剂对肿瘤坏死因子-α表达的影响北大核心CSCD

急性肺损伤（ALI）是重症急性胰腺炎（SAP）常见且严重的并发症之一,若不及时干预将进一步发展成急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。目前研究结果显示ALI是一种介质病,中性粒细胞的活化、浸润及大量炎症介质的释放,可造成肺组织及其毛细血管的损伤,从而使肺损伤加重。     

MiRNA-203在寻常性银屑病皮损的表达及其对HaCaT细胞增殖的影响

目的 研究微小核糖核酸(miRNA)-203在寻常性银屑病患者皮损中的表达,并探讨对角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖的影响.方法 取2014-2016年23例寻常性银屑病患者的皮损组织和相邻非皮损组织.荧光定量PCR法检测组织中miRNA-203的表达水平,并以5'端、3'端地高辛标记的探针对皮肤组织切片中目的miRNA进行原位杂交,观察miRNA-203在皮肤组织中的定位情况.将miRNA-203模拟物(miRNA-203模拟物组)和miRNA-203模拟物阴性对照(阴性对照组)分别转染HaCaT细胞,正常细胞培养组作为空白对照组,采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和Western印迹法分别对HaCaT细胞的增殖、细胞周期及相关周期蛋白(Cyclin D1、Cyclin B1)的变化进行检测.结果 miRNA-203特异性地表达在表皮的角质形成细胞中,除细胞核外,细胞质亦有表达,且寻常性银屑病患者皮损组织中miRNA-203表达水平(1.35±0.28)显著高于非皮损组织(0.52±0.09),差异有统计学意义(t=6.76,P=0.012).转染miRNA-203模拟物能抑制HaCaT细胞增殖(F=9.36,P=0.007),且空白对照组、阴性对照组和miRNA-203模拟物组HaCaT细胞增殖率均随时间的延长逐渐增加(F=18.68,P＜0.001).与阴性对照组和空白对照组相比,miRNA-203模拟物组HaCaT细胞被阻滞在G2/M期(G2/M期细胞比例:31.33％±4.56％比17.02％±3.53％、16.67％±3.32％,均P＜0.05),HaCaT细胞周期蛋白周期蛋白D1表达水平较高(1.15±0.13比0.52±0.05、0.56±0.07,均P＜0.05),而周期蛋白B1水平较低(0.43±0.08比0.93±0.16、0.91±0.0.15,均P＜0.05).结论 miRNA-203可能参与了寻常性银屑病的发生发展过程.