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骨髓间充质干细胞体外诱导分化为平滑肌细胞的实验 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨新西兰兔骨髓间充质干细胞在体外不同条件下定向分化为阴茎海绵体平滑肌细胞的可行性。方法:实验于2004-10/2005-05在中山大学第二附属医院实验中心完成。采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞;分别通过添加血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外直接诱导以及与阴茎海绵体平滑肌细胞不同比例(根据骨髓间充质干细胞与阴茎海绵体平滑肌细胞数量比,共培养诱导分为4:1组、2:1组以及1:1组。每6孔作为1个诱导组,每孔兔骨髓间充质干细胞终浓度为1&;#215;10^8L^-1,阴茎海绵体平滑肌细胞相应终浓度分别为0.25&;#215;10^8L^-1、0.5&;#215;10^8L^-1及1&;#215;10^8L^-1)进行共培养两种方法诱导干细胞分化为阴茎海绵体平滑肌细胞。培养2d后的细胞爬片进行荧光免疫细胞化学染色测定抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达,全程避光进行。完成染色后,立即进行激光共聚焦显微镜镜检。每孔爬片随机取5个视野,计算出每孔中Hoechst33342与FITC(或Cy3)双阳性细胞数及Hoechst33342单阳性的细胞数的比值以计算每孔的诱导率,应用SPSS软件进行完全随机设计的方差分析。结果:①阴茎海绵体平滑肌细胞的生长特性、形态及鉴定:组织块贴壁后细胞渐游出,呈梭形或长条形,原代细胞汇合90%约需16~19d,传代后生长加快,90%汇合时1:2传代后约3d可再次传代。细胞融合时呈现典型的“峰-谷”样形态。传至10代之后细胞生长放缓,胞体渐变宽大,胞内颗粒增多。荧光免疫细胞化学检测特异性抗α平滑肌肌动蛋白抗体见绝大部分细胞呈阳性。②直接诱导以及共培养诱导的初步分析结果:骨髓间充质干细胞之细胞核标记良好,诱导后见胞浆表达多量抗α平滑肌肌动蛋白抗体,与阳性对照组相似;高倍镜下可清晰见平滑肌肌动蛋白肌丝,而阴性对照组只有核显色,无抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达。③不同组别诱导率方差分析S-N-K检验得各组总体均数差异性检验的(F=44.83l,P〈0.05),表明统计学上有显著性差异;共培养1:1组效率最高,依次是共培养2:1组、共培养4:1组,血管内皮生长因子组、血管内皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子组最低,后两者间诱导效果在统计学上无差别。结论:骨髓间充质干细胞可通过添加生长因子和共培养的方法诱导分化为阴茎海绵体平滑肌细胞,其中以共培养的方法效率较高。 相似文献
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目的 探讨不同伤口负压治疗模式联合自体脂肪微粒移植在糖尿病足足部创面修复中的应用效果。方法 选取72例糖尿病足患者,将患者随机分为观察组和对照组,每组36例。常规手术清创后,两组患者均行自体脂肪微粒移植,在此基础上,对照组行负压封闭引流治疗,观察组行负压辅助闭合治疗,均持续治疗至出院,并于治疗结束后随访3个月。比较两组患者的临床疗效、换药次数、创面愈合时间和住院时间。结果 观察组的治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。观察组的换药次数少于对照组,创面愈合时间和住院时间均短于对照组(均P<0.05)。结论 负压辅助闭合联合自体脂肪微粒移植在糖尿病足足部创面修复中的疗效确切,可缩短患者住院时间,减少换药次数,有利于创面的快速愈合,并促进患者恢复。 相似文献
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目的探讨反鼓取皮筛状移植治疗大面积皮肤软组织挫裂伤的临床效果。方法将13例大面积皮肤软组织挫裂伤患者的皮肤组织瓣用鼓式取皮机反鼓切取制成筛状中厚自体皮,立即封闭创面,观察术后恢复情况并进行随访。结果13例患者中11例Ⅰ期愈合,1例有少量点状皮肤坏死,换药2周后愈合,1例少量补充(0.5%)植皮愈合。移植皮肤质地2~3个月后柔软,功能基本恢复。结论大面积皮肤软组织挫裂伤的皮瓣反鼓取皮筛状移植操作相对方便,省时省力,节省皮源,成活率高,功能与外形恢复较满意。 相似文献
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肌源性干细胞分离培养及诱导分化为平滑肌细胞的研究 总被引:2,自引:11,他引:2
目的探讨兔肌源性干细胞分离、鉴定及诱导分化为平滑肌细胞的方法。方法取1.5个月龄新西兰兔大腿肌肉,采用Preplate技术分离培养肌源性细胞,并进行流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学、Western blot等确定细胞表型。采用添加血管内皮生长因子(VEGF)和与兔阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)共培养的方法诱导分离而得的细胞分化为平滑肌细胞并运用免疫细胞化学和Western blot检测特异性α-平滑肌肌动蛋白(α—SMA)的表达。结果经过连续6d的差速贴壁分离得小圆形或短梭形的小体积细胞,FCM结果显示这些细胞〉80%为desmin+,〉70%为bcl-2^+,〉95%为CD45^-。免疫细胞化学定性结果显示desmin+。高汇合度(〉50%)或低血清培养时容易融合形成肌管或肌细胞核链。诱导处理后分离的细胞表达α—SMA。结论采用Preplate技术能很好地分离出肌源性干细胞,并能在体外诱导分化为平滑肌细胞,为组织工程提供种子细胞。 相似文献
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组织工程尿道在裸鼠皮下的埋置 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:由于创伤、先天畸形、肿瘤或手术继发的尿道缺损、狭窄、憩室等病理状况下,需要采用自体组织修复其缺损。
目的:验证构建组织工程化尿道的可行性。
设计、时间及地点:观察性实验,于2005-01/2006-01在中山大学林百欣医学研究中心完成。
材料:雄性新西兰兔10只,体质量3.0~3.5 kg,用于制备脱细胞尿道;4~6周龄BALB/cA-nude裸鼠20只,体质量18~20 g,与细胞外基质材料复合体进行体内培育。
方法:取新西兰兔完整尿道,脱细胞后形成细胞外基质材料,切取成体新西兰兔阴茎头约1/2大小,组织块法培养扩增兔平滑肌细胞;之后将尿道海绵体平滑肌细胞种植到脱细胞尿道基质上,将其植入裸鼠背部皮下进行培育。实验分为2组,实验组埋置细胞材料复合体,对照组埋置未接种细胞的单纯脱细胞尿道基质。
主要观察指标:植入后1,2,4,6,8周取材,行大体和组织学及电镜观察细胞材料复合体的生长情况,免疫组织化学鉴定平滑肌细胞的表达。
结果:①大体观察裸鼠背部切口愈合良好,饮食活动正常。植入后1,2周实验组脱细胞基质表面已有少量的组织膜形成; 4周组织膜逐渐增厚,有小血管长入;6,8周脱细胞基质材料逐渐被新的细胞替代。②苏木精-伊红染色可见,随着时间延长,脱细胞材料逐渐被吸收,被各种细胞代替。其中平滑肌细胞最多,并可见大小不等的血管长入基质,部分有形成血窦的倾向;提示复合材料在裸鼠体内逐渐形成类似正常尿道的组织结构。③电镜观察从第4周有血管长入基质,可见较多的平滑肌细胞和内皮细胞及少量的成纤维细胞和巨噬细胞,并有部分平滑肌细胞凋亡。④α-平滑肌肌动蛋白抗体进行免疫组织化学染色后可见有平滑肌细胞生长。
结论:采用组织工程技术可再造出类似于正常尿道的海绵体组织。 相似文献
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家庭对儿童心理卫生发育的影响因素调查 总被引:2,自引:0,他引:2
调查300名儿童心理卫生发育的影响因素,结果表明:独生与非独生儿童的心理卫生状况无显著差异,家庭环境、父母文化程度、职业及对子女的管教方式等对儿童的心理卫生发育有一定影响。 相似文献
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目的:对MEEK植皮在大面积烧伤肉芽创面中的应用进行分析和探讨。方法整群选取该院2013年5月—2015年3月收治的34例大面积烧伤患者,随机分为观察组和对照组,观察组患者接受MEEK植皮技术的治疗,对照组患者接受微粒皮移植技术的治疗,对比应用效果。结果观察组患者植皮存活率为94.12%,高于对照组患者的76.47%,平均手术时间、愈合时间、住院天数均显著优于对照组患者,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论MEEK植皮在大面积烧伤肉芽创面中的应用效果显著,可有效抓住早期结痂机会、缩短愈合时间。 相似文献