蓖麻蚕蛹生物反应器生产重组人表皮生长因子的研究

重组人表皮生长因子(rhEGF)已经广泛应用于医疗和化妆品。以杆状病毒AnpeNPV为基因表达载体,昆虫为生物反应器而建立的蛋白表达系统已获得成功。本文以人表皮生长因子(hEGF)基因替代柞蚕AnpeNPV中的核多角体基因而获得的AnpehEGF病毒为载体、蓖麻蚕蛹为生物反应器表达的rhEGF蛋白质,采用PCR、West-ern blot和ELISA等实验方法对其进行检测,硫酸铵沉淀和Ni-NTA Agrose亲和层析法对其进行分离纯化。实验结果显示,无论是在基因或是蛋白水平上都可检测到rhEGF的表达。AnpehEGF感染蚕蛹后第6d开始检测到rhEGF的表达量快速上升,第12d达到高峰,第3、6、9、12d的表达量分别为19.77、24.90、618.59、1 952.46ng/g,而到了病毒感染后期(第15d)出现了蛋白降解现象。表达的rhEGF通过分离纯化获得了较纯的产品。结果表明蓖麻蚕蛹作为生物反应器生产外源蛋白rhEGF是可行的,说明利用AnpeNPV和蓖麻蚕蛹可开发更加低成本而又高效的rhEGF生产新途径。     

广西巴马地区80岁以上成功老龄的生物学指标结果及影响因素分析

目的 了解广西巴马地区≥80岁成功老龄的生物学指标及其与长寿相关的生物学因素. 方法 根据2004年3月12～28日调查的≥80岁267例老年人中符合成功老龄标准的样本,按年龄(83～89岁、90～99岁、≥100岁)分层抽样,共取73例成功老龄为研究对象.对其体质量、血常规、电解质、血脂、血糖进行测量,计算出体质量指数(BMI),按体质量、年龄、性别分组对血常规、电解质、血脂、血糖进行比较,并对影响长寿的相关生物学指标进行多因素回归分析. 结果 73例成功老龄无人达肥胖标准;体质量51～60 kg组三酰甘油(TG)高于＜40 kg组,女性总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于男性,血红蛋白(HGB)各组随体质量升高而升高,男性红细胞(RBC)、HGB高于女性,≥100岁组血小板计数(PLT)高于83～89岁组,以上差异均有统计学意义(P<0.05),其余各项生物学指标在各体质量、性别、年龄组间差异无统计学意义(P>0.05);多因素回归分析显示年龄与BMI、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈负相关. 结论 本组成功老龄健康长寿的关键在于具有正常稳定的生物学基础,而保持正常稳定的生物学基础是以保持正常体质量为基准,以科学行为方式和良好生态环境为前提.     

曲古抑菌素A对CNE2鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究曲古抑菌素A（TSA）在体外对人鼻咽癌细胞的影响,为鼻咽癌的药物治疗提供依据。方法将鼻咽癌CNE2细胞经0.125%胰酶处理制成细胞悬液,培养24 h。试验设TSA1～TSA5组及对照组,TSA1～TSA5组分别加入TSA200、300、400、500、600 nmol/L,对照组加入等量生理盐水;6、12、24、36 h后MTT法计算细胞抑制率。将CNE2细胞接种于25 ml培养瓶中,分为TSA1～TSA3组及对照组,TSA1～TSA3组分别加入300、400、500nmol/L TSA处理24 h;对照组加入等量生理盐水;流式细胞仪检测分析细胞周期及细胞凋亡率。结果 TSA可明显抑制CNE2细胞生长,同时点细胞抑制率对照组〈TSA1组〈TSA2组〈TSA3组〈TSA4组〈TSA5组,并呈剂量时间效应关系,P均〈0.05。TSA干预后CNE2细胞G2/M期细胞明显增多,出现G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显升高,且呈浓度依赖性。结论 TSA能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有G2/M期阻滞效应,是治疗鼻咽癌的潜在药物。     

携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

目的 构建携带绿色荧光基因的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法 从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的ＥＢＶ潜伏膜蛋白2A（latent membrane protein 2A,LMP2A）序列,并定向克隆入pIRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞（实验组）,同时另设转染pIRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果 双酶切及测序鉴定证实真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论 成功构建了pIRES2-Zs-Green1- LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。     

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。     

血浆EBV DNA水平与EBVCA-IGA抗体滴度对鼻咽癌诊断作用的对比研究

目的 比较研究血浆EBV DNA水平与EBVCA-IGA抗体滴度对鼻咽癌的诊断作用.方法 73例初治鼻咽癌患者经病理确诊,按福州会议"1992鼻咽癌分期"进行TNM分期,检测患者空腹血浆EBV DNA水平和EBVCA-IGA抗体滴度.采用SPSS 13.0统计软件对资料进行比较,结合临床资料对结果 进行分析.结果 血浆EBV DNA水平与EBVCA-IGA抗体滴度对鼻咽癌的诊断作用比较,差异有统计学意义,血浆EBVDNA的诊断特异性明显高于后者;血浆EBV DNA水平在有、无淋巴结转移组间的比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 与EBVCA-IGA抗体滴度相比,血浆EBV DNA对NPC诊断有较高特异性;血浆EBV DNA水平可能预示鼻咽癌淋巴结转移.     

广西巴马地区与南宁市80岁及以上健康老年人的血清蛋白质谱比较

目的 了解广西巴马地区与城市(南宁市)80岁以上健康老年人的血清蛋白质谱状况,为探索巴马地区长寿的奥秘提供新的线索. 方法 运用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,采用弱阳离子交换(CM10)、金属离子螯合(IMAC30-Cu)、强阴离子交换(Q10)、疏水(H50)4种芯片分别检测巴马地区与城市80及岁以上健康老年人的血清蛋白质谱.结果 巴马地区与城市健康老年人血清中共检测到蛋白质(或多肽)峰:CM10 71个,IMAC30-Cu 46个,Q10 81个,H50 52个;巴马地区与城市健康老年人的血清蛋白质谱峰比较(P＜0.05且各蛋白质峰值的均数＞标准差),CM10芯片共检出8个差异蛋白质谱峰,其中2个表达上调、6个表达下调;IMAC-Cu芯片共检出7个差异蛋白质谱峰,其中1个表达上调,6个表达下调;Q10芯片共检出5个差异蛋白质谱峰,均为表达下调;H50芯片共检出6个差异蛋白质谱峰,其中3个表达上调,3个表达下调. 结论 巴马地区与城市健康老年人的血清蛋白质谱存在一定的差异,且表达下调者居多.     

细胞实验检测蓖麻蚕蛹生物反应器表达的重组人表皮生长因子的生物学活性

目的探讨蓖麻蚕蛹生物反应器中分离纯化获得的重组人表皮生长因子(rhEGF)蛋白质的生物学活性。方法采用Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)鉴定rhEGF,通过MTT和台盼蓝法检测rhEGF的细胞活性。结果 Tricine-SDS-PAGE、Western blot结果显示,蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF具有正确的分子量和免疫原性;MTT法显示,纯化的rhEGF具有酶促活性,且酶促活性优于rhEGF标准蛋白(P<0.05),其最高活性浓度为1.0μg/L,在0.0625～1.0μg/L浓度范围内具有剂量依赖性;rhEGF能够促进Balb/c3T3细胞的分裂增殖,效果优于rhEGF标准蛋白(P<0.05)。结论 AnpehEGF感染的蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF,具有类似天然hEGF的生物学活性,且效果优于rhEGF标准蛋白;rhEGF的细胞实验为进一步的动物实验提供了基础。     

鼻咽癌患者血清和鼻咽组织中8-羟基脱氧鸟苷含量的变化

目的： 8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）是DNA损伤性生物标志物。通过检测鼻咽癌患者血清和鼻咽组织中8-OHdG的水平,初步探究鼻咽癌的发生和发展是否与DNA损伤有关。方法： 利用抗8-OHdG单克隆抗体,通过ELISA和免疫荧光组织化学方法分别检测鼻咽癌患者血清和鼻咽组织中8-OHdG的水平。结果：8-OHdG在鼻咽癌患者血清和组织中表达水平较高,与正常人血清和慢性咽炎组织比较差异显著（P<0.05）。结论： 结果提示鼻咽癌的发生和发展可能与8-OHdG的水平有关。8-OHdG有望成为辅助鼻咽癌诊断的一个生物标志物。     

农村与城市80岁以上成功老龄人群生物学指标的比较

目的 了解农村与城市80岁以上成功老龄生物学指标状况.方法 2007年11月随机抽取广西巴马瑶族自治县80岁以上成功老龄73例,同期抽取广西南宁市80岁以上成功老龄31例.测量二组老人的身高、体重、血常规、电解质、血脂、血糖,计算体重指数(BMI),并对影响长寿的相关生物学指标进行多因素回归分析.结果 成功老龄血脂、血糖、血常规、电解质均在正常范围,城市成功老龄的平均年龄小于农村成功老龄,平均体重、身高大于农村成功老龄,超重人数明显多于农村成功老龄,在高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低的比例、空腹血糖值、平均血红蛋白量、平均血红蛋白浓度、钠、氯、镁高于农村成功老龄,载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)、淋巴细胞、中性粒细胞、红细胞、红细胞容积低于农村成功老龄;多因素回归分析,结果显示城市成功老龄的年龄与甘油三酯(TG)呈负相关,农村成功老龄的年龄与BMI、HDL-C呈负相关.结论 城市和农村成功老龄的部分生物学指标存在差异,但成功老龄生物学指标具有正常稳定的特征,而保持正常稳定的生物学基础是以保持正常体重为基准,以科学行为方式和良好生态环境为前提.