乌梢蛇Ⅱ型胶原对关节炎大鼠免疫功能的影响

目的 研究乌梢蛇Ⅱ型胶原对关节炎大鼠的免疫调节作用,以了解乌梢蛇治疗类风湿关节炎(RA)的机制.方法 关节炎大鼠随机分成3组,即乌梢蛇Ⅱ型胶原组、牛Ⅱ型胶原组和关节炎对照组,另设健康埘照组,每组7只,乌梢蛇Ⅱ型胶原组和牛Ⅱ型胶原组分别灌胃乌梢蛇Ⅱ型胶溶液1 ml(Ⅱ型胶原15 mg/kg)和牛Ⅱ型胶溶液1 ml(Ⅱ型胶原15 mg/kg),另两组灌胃不含胶原的胶原稀释液1 ml,每日1次,连续15 d后,取大鼠外周血测抗Ⅱ型胶原抗体、淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子(TNF)-a、白细胞介素(IL)-10、IL-1和IL-4水平.结果 关节炎埘照组:抗Ⅱ型胶原抗体、TNF-a水平和CD4+T/CD8+比值与健康对照组相比明显升高(P＜0.05),IL-10水平明显下降(P＜0.01);乌梢蛇Ⅱ型胶原组和牛Ⅱ型胶原组:TNF-a水平和CD4+T/CD8+比值与关节炎对照组相比明显下降(P＜0.05),与健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),抗Ⅱ型胶原机体滴度较关节炎对照组下降(P＜0.05),与健康埘照组差异有统计学意义(P＜0.01),IL-10水平较关节炎对照组升高(P＜0.01),与健康对照组差异有统计学意义(P＜0.05),口服Ⅱ型胶原两组间各项免疫指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05);外周血IL-1和IL-4水平,4组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乌梢蛇Ⅱ型胶原与牛Ⅱ型胶原具有相同的免疫调节作用,两者能减低关节炎大鼠外周血TNF-a水平、抗Ⅱ型胶原抗体滴度和CD4+T/CD8+比值,提高IL-10水平的作用,推测乌梢蛇Ⅱ型胶原可能是乌梢蛇治疗RA的活性药理成分.     

氨甲喋呤(MTX)治疗类风湿性关节炎的免疫调节机制

目的：探讨MTX治疗类风湿性关节炎（RA）的免疫学机制，为临床MTX治疗RA提供理论依据。方法：在建立佐剂型关节炎（AA）动物模型基础上，通过关节炎指数评价，血清中细胞因子测定和关节切片的病理学检查，观察MTX对促炎症细胞因子如IL－1β、TNF－α和抗炎症细胞因子IL－4、IL-10的调控作用。结果：MTX预防组和对照组关节炎指数和发病率的变化均无显著差异（P＞0.05)。MTX肌肉注射治疗或外用治疗后，关节炎指数发生较显著的变化与对照组相比有显著性差异（P＜0.05)。对照组与MTX预防组、MTX肌肉注射组、MTX外用组血清中细胞因子水平相比，对照组与各组TNF－α和IL－10的水平有明显差异，P＜0.05，MTX肌肉注射组与MTX外用组的TNF－α水平相差很大，P＜0.05。而IL－1β、IL－4的水平各组之间没有明显差异，P＞0.05。病理组织学变化中炎症程度：对照组＞MTX预防组＞MTX肌肉注射组＞MTX外用组。结论：本研究结果表明，MTX治疗（肌肉注射和外用）可以降低AA大鼠血清中TNF－α浓度，提高IL－10的浓度，从而抑制或控制RA的发生发展。但MTX治疗对IL－1β和IL－4没有明显作用，这方面的机制尚需进一步研究。     

氨甲喋呤(MTX)治疗类风湿性关节炎的免疫调节机制

目的:探讨MTX治疗类风湿性关节炎(RA)的免疫学机制,为临床MTX治疗RA提供理论依据。方法:在建立佐剂型关节炎(AA)动物模型基础上,通过关节炎指数评价,血清中细胞因子测定和关节切片的病理学检查,观察MTX对促炎症细胞因子如IL^-1β、TNF-α和抗炎症细胞因子IL-4、IL-10的调控作用。结果:MTX预防组和对照组关节炎指数和发病率的变化均无显著差异(P>0.05)。MTX肌肉注射治疗或外用治疗后,关节炎指数发生较显著的变化与对照组相比有显著性差异(P>0.05)。对照组与MTX预防组、MTX肌肉注射组、MTX外用组血清中细胞因子水平相比,对照组与各组TNF-α和IL-10的水平有明显差异,P<0.05 ,MTX肌肉注射组与MTX外用组的TNF-α水平相差很大,P>0.05。而IL-1β、IL-4的水平各组之间没有明显差异,P>0.05。病理组织学变化中炎症程度:对照组>MTX预防组>MTX肌肉注射组>MTX外用组。结论:本研究结果表明,MTX治疗(肌肉注射和外用)可以降低AA大鼠血清中TNF-α浓度,提高IL-10的浓度,从而抑制或控制RA的发生发展。但MTX治疗对IL-1β和IL-4没有明显作用,这方面的机制尚需进一步研究。     

羊栖菜多糖免疫调节活性的实验研究

目的:观察羊栖菜多糖(SFPS)对离体小鼠脾细胞免疫调节活性的影响。方法:10、30、100mg/L浓度的SFPS分别作用离体培养的小鼠脾细胞24、48和72h,采用酶联免疫法测定其所分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ量。结果:SFPS可显著升高小鼠脾细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量,这些作用与时间、浓度相关。其中,各浓度组均使IL-2的分泌量明显升高,100mg/L浓度组效应最为显著,作用24、48、72h后分别使IL-2的分泌量达到7.08、39.04、20.30pg/mL;TNF-α的分泌的最高值则是由100mg/LSFPS作用48h引起;SFPS对IFN-γ分泌量的影响具有明显的量效关系,而不同时间组的差异不显著。结论:SFPS能明显增强离体小鼠脾细胞的免疫活性物质的分泌,具有明显的免疫调节活性。     

幽门螺杆菌感染致胃上皮8-羟-2-脱氧鸟苷增加

幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌、胃黏膜相关性淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的关系已成为国内外学者研究的热点之一。有报道认为，根治Hp后70％的MALT淋巴瘤可以治愈^[1]。我们以慢性浅表性胃炎患者的胃黏膜组织为研究对象，测定Hp菌感染时胃上皮DNA加成物8-羟-2-脱氧鸟苷(8-OhdG)水平，试图从Hp致胃上皮DNA氧化性损伤机制方面探讨Hp的致癌性。     

跨膜型超抗原SEA融合蛋白的表达及其对小鼠黑色素瘤的免疫治疗作用

目的 制备跨膜型超抗原融合蛋白，研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法 用已构建的重组跨膜型超抗原的表达载体pET-28a-TM-SEA转化E．coli BL21(DE3)pLys宿主菌，在IPTG诱导下产生目的蛋白；用Ni-NTA His Bind Resin纯化带有His-Tag的目的蛋白。采用免疫组化法、免疫荧光法和流式细胞术检测其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL／6小鼠的黑色素瘤模型，观察跨膜型超抗原SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果 跨膜型超抗原融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。结论 跨膜型超抗原融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用，有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。     

鼠白细胞介素-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达

目的：构建双亚基共表达鼠白细胞介素－12（mIL-12）真核表达质粒，并观察其在体内外的表达。方法：将mIL-12p35和p40全长编码cDNA构建在pcDNA3.1载体上，然后把p35表达单元（CMV－p35－BGHPA）插入pcDNA3.1/p40载体，使两个目的基因均受各自的启动子CMV控制，构建成mIL-12双亚基共表达质粒pCmIL-12，并进行体内外表达。结果：pCmIL-12在体外转染COS－7细胞后，经ELISA证实有mIL-12表达，其表达上清能在体外明显增强小鼠NK细胞活性。小鼠皮内注射pCmIL-12亦能增强小鼠NK细胞活性。结论：所构建的质粒在体内外均能表达有生物学活性的mIL-12。     

紫贻贝粗多糖提取物对小鼠免疫相关因子的影响

目的研究紫贻贝多糖对免疫力低下小鼠的免疫相关因子的影响。方法 30只6～8周龄,体重20 g左右,雌雄随机的ICR小鼠,分成正常对照(Control)、环磷酰胺(CTX)处理的免疫抑制(CTX)、高、中、低不同剂量紫贻贝粗多糖提取物(H-MEP、M-MEP、L-MEP)5组,每组6只。H-MEP、M-MEP、L-MEP三组每天分别腹腔注射0.1 ml 16、8和2的紫贻贝粗多糖提取物1w后,与CTX组一起腹腔注射CTX,再注射相应浓度的紫贻贝粗多糖提取物5d后处死小鼠,测定小鼠脾脏NK细胞的杀伤力,小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO量以及血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量。结果 H-MEP、M-MEP、L-MEP组小鼠NK细胞的杀伤力显著强于CTX组(P﹤0.05),H-MEP、M-MEP组甚至超过正常对照组(P﹤0.05);H-MEP、M-MEP组小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO量明显超过CTX组(P<0.01),H-MEP组还显著超过正常对照组;高、中剂量多糖提取物组小鼠血清中IL-2显著高于CTX组,而IL-4与CTX组和正常对照组无差异;M-MEP组小鼠中血清IFN-γ显著高于免疫抑制组,H-MEP组TNF-α的含量显著高于免疫抑制组(P﹤0.05),与正常对照组,也明显增强(P﹤0.05)。结论紫贻贝多糖能上调免疫抑制小鼠的Th1细胞功能,纠正CTX引起的免疫抑制状态下的Th1向Th2形成的漂移,增强细胞免疫功能。     

新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体制备及其鉴定

目的：制备新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体（pAb）,并鉴定其免疫学特性。方法：以KLH偶联的GPR17多肽免疫家兔制备其pAb,用间接ELISA法测定抗体效价,阻断ELISA测定抗体敏感性及特异性,同时以新制备的抗体做Westernblot,检测GPR17的组织表达。结果：通过免疫家兔获得的抗GPR17pAb,ELISA测定显示其抗体效价最高可达到1／16364,并对CysLT1受体和CysLT2受体基本无交叉反应,具有较好的特异性。Westernblot结果显示,GPR17在大鼠脑和心脏组织中有较高的表达,其分子量在43kD左右。结论：制备的GPR17pAb具有较高的效价和较好的特异性,能满足Westernblot检测GPR17的要求。     

乌梢蛇Ⅱ型胶原提取及其诱导大鼠关节炎特性的研究

提取和纯化乌梢蛇Ⅱ型胶原,观察乌梢蛇Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎的特性,为研究乌梢蛇治疗类风湿关节炎的机制提供研究方向。离心提取乌梢蛇Ⅱ型胶原,经DEAE-52纤维素交换柱纯化,斑点免疫渗滤试验和免疫印迹试验进行成分鉴定。乌梢蛇Ⅱ型胶原不完全佐剂免疫大鼠,观察大鼠关节炎发生情况、抗Ⅱ型胶原抗体、CD 4/CD8亚群、血清中TNF-α、IL-10、IL-1β、IL-4的变化。乌梢蛇Ⅱ型胶原提纯品在SDS-PAGE凝胶电泳上呈一条区带,斑点免疫渗滤试验和免疫印迹试验为阳性反应。诱导大鼠关节炎发生率为86.67%,关节炎大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体明显增高(P<0.01),CD4 T细胞亚群和CD4~+/CD8~+增高(P<0.05),TNF-α含量增加(P<0.01),IL-10含量降低(P<0.01),血清中IL-1β和IL-4含量无变化。结果显示,乌梢蛇Ⅱ型胶原能通过免疫方法可以诱导大鼠产生多关节炎,并且体内有自身免疫反应的表现。