分子生物学技术在肾综合征出血热诊断中的应用

肾综合征出血热（ＨｅｍｏｒｈａｇｉｃＦｅｖｅｒｗｉｔｈＲｅｎａｌＳｙｎｄｒｏｍ．ＨＦＲＳ）是一种在我国广泛流行、病死率较高的疾病。自１９７８年Ｈ．Ｗ．Ｌｅｅ分离出出血热病毒以来各国学者先后在不同的宿主中分离出不同的病毒毒株,使出血热的研究从病毒学角度...     

梅毒螺旋体低分子量多肽基因的克隆表达及临床应用

梅毒是由苍白螺旋体(Ｔ)感染引起的一种严重危害人类健康的性传染性疾病。血清学非特异性试验是目前诊断梅毒的主要方法,例如快速血浆反应素试验(ＲＰＲ)、不加热血清反应素试验(ＵＳＲ);应用梅毒螺旋体抗原检测梅毒患者体内的特异性抗体,已被用于确诊梅毒感染,例如荧光螺旋体抗体吸收试验(ＦＡＴＡＢＳ)、梅毒螺旋体血凝试验(ＴＰＨＡ)等,但使用的均为全抗原,由于可能存在的非特异性交叉反应,使上述方法受到一定的限制。因此,研制一种先进且实用的梅毒诊断及普查的方法已成为当务之急。近年来,由于分子生物学技术的普及,几种梅毒螺旋体的主…     

乙型肝炎病毒X基因克隆及表达的研究

目的克隆、表达并纯化乙型肝炎病毒Ｘ抗原,应用 ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析该抗原与乙型肝炎患者体内抗Ｘ抗体的特异性反应。方法应用基因扩增技术分离此蛋白的结构基因,采用基因工程的方法,应用融和表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ,重组、克隆得到带有ＨＢＸ特异抗原基因的重组菌株,并应用ｗｅｓｔｅｒｎ印迹的方法检测乙型肝炎患者体内的抗Ｘ抗体。结果ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明,该表达产物可与ＨＢＶ感染患者体内的抗Ｘ抗体特异性结合。结论纯化后的ＨＢＸ抗原可作为检测乙型肝炎患者抗Ｘ抗体的特异性抗原。     

单纯疱疹病毒DNA部分BamHI酶切片段在大肠杆菌内克隆的研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)标准株SM_(44)DNA部分BamH Ⅰ酶切片段用T_4DNA连接酶在体外与pBR_(322)重组,转入大肠杆菌内,共获得重组菌58株。用质粒快速抽提方法,检测重组菌有无质粒及质粒的大小,从中选出H_(919)菌株做鉴定。经纯化质粒、酶切和核酸杂交试验,证明该菌株的质粒插有分子量近似1.51×10~6 daltons,约含2322bp的SM_(44)DNA片段。     

乙型肝炎病毒的亚克隆及其应用

目的 应用酶切pBP322-HBV，回收HBV DNA，将其克隆到高拷贝载体，获得亚克隆株pUC19-HBV，再酶切、HBV DNA标记探针，核酸杂交检测临床血清标本72份，与定量PCR，定性PCR方法对比。方法 由此获得了亚克隆株pUC19-HBV，用地高辛标记的HBV DNA探针杂交、定量PCR、定性PCR方法同时检测临床血清标本72份。结果 阳性标本份数分别为40、51、49份，阳性率分别为55．6％、70．8％、68．1％。阳性符合率分别为88．9％、84．6％、80．8％。结论 3种HBV核酸检测方法的比较，以定量PCR法最为敏感，地高辛标记HBV DNA探针检测法为特异。     

肾综合征出血热病毒核酸的免疫研究

目的编码NP的S基因进行病毒核酸的免疫研究.方法进行实验动物的DNA免疫,细胞因子的测定,淋巴细胞增殖反应测定,免疫鼠血清的抗核蛋白NP抗体的测定.结果蛋白在Vero-E6细胞中的瞬时表达.免疫鼠细胞因子：接种pcDNA3.1＋S的鼠IL-4的产生和IFN-γ的产生均较对照组要高.细胞增殖反应：阳性对照刀豆蛋白A（ConA）刺激组的增殖指数为2.1,对照空载体增殖指数较低为0.797,而实验组pcDNA3.1＋S接种组和pcDNA3.1＋S（ISS）接种组的增殖指数分别为1.43和1.67.免疫鼠血清特异性抗体的检测：接种pcDNA3.1＋S（ISS）免疫鼠的血清抗体水平较接种pcDNA3.1＋S免疫鼠的血清抗体水平升高明显.而空载体pcDNA3.1＋接种组的小鼠血清抗体水平低.结论肾综合征出血热（HFRS）病毒编码NP的S基因作为病原体的抗原基因进行的核酸免疫,可以起到免疫保护作用.     

梅毒螺旋体基因重组抗原酶联免疫吸附实验的探讨

梅毒是由苍白螺旋体(Ｔ.ｐａｌｌｉｄｕｍ)感染引起的一种严重危害人类健康的性传染性疾病。血清学非特异性试验是目前诊断梅毒的主要方法,例如快速血浆反应素实验(ＲＰＲ),不加热血清反应素实验(ＵＳＲ);应用梅毒螺旋体抗原检测梅毒患者体内的特异性抗体,已被用于确诊梅?..     

单纯疱疹病毒性脑炎的基因诊断

单纯疱疹病毒性脑炎的基因诊断吴一迪，鲁润铭，陈誉华，刘军，侯晓刚，宋艾芝单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＥ）在散发性病毒性脑炎中占有较重要的地位。单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型（ＨＳＶ－１与ＨＳＶ－２）均可导致ＨＳＥ，尤其在婴幼儿，若不及时治疗病死率高达７０％。ＨＳＥ...     

单纯疱疹病毒型共同生物素基因探针对单纯疱疹病毒性脑炎早期诊断的研究

应用生物素标记ＨＳＶＤＮＡ型共同性基因片段制成探针，以斑点杂交方法检测了１１份脑脊液标本，２例呈阳性反应，而病毒分离全部阴性。本实验为ＨＳＥ的早期病原学诊断做了初步的探讨。     

汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达

目的 将编码汉坦病毒76-118株核蛋白的S基因片段克隆到真核表达载体DTARGET TM，构建含汉坦病毒核蛋白S基因的重组真核表达质粒pTARGET-hans，并在体外进行瞬间表达。方法 采用PCR产物直接克隆方法，将核蛋白S基因插入到真核表达载体pTARGE TM中；酶切鉴定；用电穿孔法将重组质粒转染入Vero-E6细胞；用间接免疫荧光法检测其表达产物。结果 酶切鉴定证实S基因已被正确地插入pTARGET TM中；在部分转染重组质粒的Vem-E6细胞胞质内观察到中等强度的特异性荧光。结论 重组的真核表达载体pTARGET-hans已被成功地构建并可在体外表达．为下一步基因免疫打下基础。