感染性心内膜炎血培养病原菌的分布及耐药性分析

目的 对感染性心内膜炎患者血培养分离菌的分布及对常用抗菌药物的耐药性进行分析,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法 采用VITEK-2-Compact系统鉴定细菌,药敏试验采用纸片扩散法,万古霉素对葡萄球菌的药敏试验采用E-Test方法,数据分析应用WHONET 5.6 软件.结果 共分离141株病原菌,草绿色链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为最常见病原菌,分别为53株、34株和18株.草绿色链球菌对红霉素、克林霉素的耐药率均为50%,对青霉素、头孢曲松、头孢噻肟和左氧氟沙星的耐药率均低于10%.凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素类、头孢菌素类及红霉素的耐药率均大于80%.金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率最高为94.4%,对左氧氟沙星和红霉素的耐药率分别为27.8%和22.2%,对其他抗菌药物的耐药率均小于20%.耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌和耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的发生率分别为85.3%和11.1%.结论 临床医生要密切关注分离菌的变迁及耐药性情况,合理使用抗菌药物.     

重型肝炎小鼠模型肝组织凋亡相关蛋白的表达及其促肝细胞凋亡的研究

目的研究肝凋亡相关蛋白在重型肝炎小鼠模型肝组织中的表达及其促肝细胞凋亡的作用。方法100PFU鼠3型肝炎病毒（MHV-3）分别感染敏感鼠BALB／cJ系和耐受鼠A／J系，感染后24、48、72h取小鼠肝组织，固定后石蜡包埋并切片，常规HE染色病理诊断计算肝组织炎症活动度积分（HAI）；采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肝细胞凋亡；免疫组化SP法检测mfg12、Fas、TNFR1蛋白的表达及纤维素的沉积；Western blot法检测小鼠肝组织Bcl-2类蛋白的表达，并计算Bax／Bcl-2的值。结果MHV-3感染后BALB／cJ鼠肝组织出现大量炎性细胞浸润和肝细胞凋亡和坏死，而A／J鼠肝组织炎性反应轻微，且仅有少量肝细胞凋亡和坏死，两者差异有统计学意义（P〈0．01）；感染后24h BALB／cJ鼠肝组织出现大量mfg12、Fas、TNFR1阳性细胞，并有大量纤维素沉积出现，而A／J鼠无阳性细胞和纤维素的沉积；感染后24h BALB／cJ鼠肝组织Bax蛋白的相对表达水平要远高于A／J鼠（P〈0．01），Bcl-2蛋白的相对表达水平差异无统计学意义，BALB／cJ鼠肝组织Bax／Bcl-2值要远高于A／J鼠（P〈0．01）。结论肝组织凋亡相关蛋白的表达及其促肝细胞凋亡在重型肝炎的发病机理中具有重要作用。     

门诊与住院患者伤口分泌物病原菌分布及耐药性比较

目的 分析门诊与住院患者伤口分泌物466株分离菌的分布以及对常用抗菌药物的耐药性,为临床医师合理选择抗菌药物提供依据.方法 采用VITEK-2 Compact系统鉴定细菌,药敏采用纸片扩散法,应用WHONET 5.6软件数据分析.结果 门诊组分离病原菌144株,革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌分别占43.7％、50.7％和5.6％,以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和凝固酶阴性葡萄球菌为主,分别占21.5％、16.6％和15.2％;住院组分离病原菌322株,革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌分别占46.6％、50.6％和2.8％,以金黄色葡萄球菌、鲍氏不动杆菌和凝固酶阴性葡萄球菌为主,分别占19.6％、15.2％和13.0％;住院组与门诊组MRSA检出率分别为84.1％和29.0％;住院组金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌对头孢菌素类抗菌药物的耐药率显著高于门诊组(P＜0.05);住院组鲍氏不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低为10.2％,对其他抗菌药物的耐药率均＞70.0％.结论 临床医师要密切关注分离菌的变迁及耐药性,合理使用抗菌药物.     

人重型肝炎相关基因Fas、TNFR1真核表达载体和microRNA表达载体的构建及其体外干预效应的初步研究

目的 构建人Fas(hFas)和人TNFR1(hTNFR1)基因的真核表达质粒pcDNA3.0-hFas、pcDNA3.0-hTNFR1和microRNA(miRNA)干扰质粒p-hFasmiRNA、 p-hTNFR1miRNA,初步验证其在体外细胞系对Fas和TNFR1基因表达的干预效应.方法 从人肝癌细胞HepG2细胞中获得模板cDNA,通过PCR扩增出hFas和hTNFR1全长片段,将目的 片段通过T载体过渡克隆至表达载体pcDNA3.0,得到重组质粒pcDNA3.0-hFas和pcDNA3.0-hTNFR1.利用miRNA设计软件,针对Fas和TNFR1基因分别设计3对pre-microRNA(pre-miRNA)序列,通过T4连接酶将pre-miRNA克隆至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体,同时构建非相关干扰质粒.构建成功的p-hFasmiRNA1、p-hFasmiRNA2、p-hFasmiRNA3和p-hTNFR1miRNA1、p-hTNFR1miRNA2、p-hTNFR1miRNA3分别与pcDNA3.0-hFas和pcDNA3.0-hTNFR1共转染至人293T细胞,通过Real-time PCR和Western blot检测转染48 h后对基因表达的干预效应.结果通过测序鉴定表明Fas和TNFR1基因的真核表达载体和miRNA干扰质粒均构建成功. Real-time PCR结果显示干预组的Fas和TNFR1基因的表达与对照组比较明显减少,抑制效率分别可达到87%和80%.Western blot结果也同样证实干预组的Fas和TNFR1基因的蛋白表达量与对照组比较明显减少.结论 成功构建了hFas和hTNFR1的真核表达载体和microRNA干扰质粒,并初步证实构建的microRNA干扰质粒在细胞水平对hFas和hTNFR1的表达具有特异性的抑制效应.     

hfgl2凝血酶原酶短干扰RNA表达质粒的构建及其效应

目的 探索人fg12凝血酶原酶(hfg12)短干扰RNA(siRNA)在体外对hfg12凝血酶原酶基因表达的干预效应.方法 构建产生hfg12短发夹状RNA(shRNA)的载体p-hfg12shRNA,将其与hfg12-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒pEGFP-hfg12共转染到中国仓鼠卵母细胞(CHO细胞),转染48 h后,倒置荧光显微镜下观察EGFP在CHO细胞中的表达,并通过流式细胞仪检测荧光细胞阳性率.将P-hfg12shRNA和hfg12表达质粒pcDNA3.1-hfg12共转染到CHO细胞,通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测hfg12基因转录和蛋白表达水平的变化.分为4组:共转染p-hfg12shRNA和pcDNA3.1-hfg12为干预组,共转染无关序列shRNA表达质粒和pcDNA3.1-hfg12为非相关干预组,仅转染pcDNA3.1-hfgl2为未干预组,不转染任何质粒为空白组.结果 在CHO细胞中,含p-hfg12shRNA的干预组较未干预组和非相关干预组的绿色荧光强度明显减弱,荧光细胞数明显减少;荧光表达阳性细胞率:干预组α为6.5%±0.2%,未干预组0t为40.1%±1.8%,两组比较,x<,2>=8.056,P<0.01,差异有统计学意义.抑制效率达85.5%.hfg12shRNA显著抑制了hfg12 mRNA和蛋白质的表达,干预组hfg12 mRNA水平为0.11±0.01,未干预组为0.84±0.06,两组比较,F=10.7,P<0.01,差异有统计学意义.结论 p-hfg12shRNA可在体外高效特异地抑制hfg12基因转录和蛋白的表达,为进一步的体内干扰实验奠定了基础.     

某院流感嗜血杆菌耐药性及其对氨苄西林耐药机制

目的了解流感嗜血杆菌对常用抗菌药物的耐药性及其对氨苄西林的耐药机制。方法采用纸片扩散法和头孢硝噻吩纸片法,对2012年1月1日—12月31日某院住院及门诊患者送检标本分离的流感嗜血杆菌耐药性和β-内酰胺酶进行检测,聚合酶链反应(PCR)法对耐氨苄西林菌株进行TEM型和ROB型β-内酰胺酶基因扩增。结果 100例流感嗜血杆菌感染患者,年龄段分布主要为1~10岁,占61.00%。流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药率为35.00%(35株),对复方磺胺甲口恶唑耐药率高,达64.65%;对左氧氟沙星和阿奇霉素敏感率最高,分别为97.96%、96.84%,对环丙沙星、头孢噻肟、氯霉素、头孢呋辛和氨苄西林/舒巴坦敏感率均较高,依次为96.91%、92.78%、85.71%、77.89%和74.75%。100株流感嗜血杆菌中,21株β-内酰胺酶阳性,且均为氨苄西林耐药株。对35株耐氨苄西林菌株进行TEM和ROB基因检测,结果 22株TEM型阳性,未检出ROB阳性株。结论流感嗜血杆菌对复方磺胺甲口恶唑敏感率低,对其他常用抗菌药物敏感率高;流感嗜血杆菌对氨苄西林的主要耐药机制为产TEM型β-内酰胺酶。