沙门氏菌质控样的研制及其在能力验证中的应用

目的：研制均一性和稳定性符合能力验证要求的质控样品,并将质控样品用于沙门氏菌的能力验证。方法（1）通过对沙门氏菌质控样品的储藏稳定性、运输稳定性及均一性的检验,对沙门氏菌质控样品进行评价。（2）实验室能力验证中考核方案的设计：一套考核样品包括18份沙门氏菌的质控样品,设置3个浓度水平,阴性空白对照、阳性对照、101 CFU水平和100 CFU水平。（3）防止数据串通措施：将参试实验室随机分成2组,每组实验室获得的质控样品不同;低浓度样品的结果是双盲。结果沙门氏菌的质控样品在均一性、储藏稳定性和运输稳定性均能满足质控样品使用的要求;在考核中,76家实验室有7家实验室不合格,35家实验室优秀,34家实验室合格。结论沙门氏菌的质控考核样品可以满足能力验证的需求,本次能力验证可以真实地反映参试单位的检测水平。     

核糖体分型和脉冲场凝胶电泳在霍乱疫情中的应用

[目的]分析同起霍乱疫情、不同来源的霍乱分离菌遗传相关性,追溯菌株来源,为有效控制疫情提供依据. [方法]霍乱疫情分离的39株霍乱菌在常规病原学的基础上,PCR测CT与ZOT毒素后,用核糖体分型(RT)技术进行分子分型,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析DNA片段并对其结果聚类. [结果]两起霍乱暴发疫情中,同起疫情菌株的血清学和噬菌体-生物分型结果不完全一致,CT与ZOT均阴性;同起疫情菌株的PFGE和RT的图谱结果基本相同,而与散发疫情菌株的PFGE和RT的图谱结果不同. [结论]PFGE和RT有助于判断不同来源霍乱菌株的亲缘关系,及时溯源,从而有效地控制疫情的蔓延.     

霍乱弧菌2种核糖体分型方法比较

目前分子杂交技术已广泛用于霍乱弧菌检测中，是霍乱疫情中追踪传染源的主要检测方法之一。本以16S-23S-5SrRNA为探针，对霍乱疫情中分离的霍乱弧菌进行Southem杂交后，使用2种限制性内切酶普通变形杆菌Ⅱ型酶（PvuⅡ）和大肠埃希菌RI型酶（ECORI），对2种核糖体分型（RT）方法的图谱进行分析比较。现将结果报告如下。     

铜绿假单胞菌能力验证样品的研制及应用研究

目的：研制符合能力验证要求的铜绿假单胞菌质控样品,并将该质控样品用于铜绿假单胞菌的能力验证。方法：通过对冻干工艺和冻干保护剂的研究,研制出均一性、储藏稳定性和运输稳定性均符合要求的能力验证样品。本次能力验证样品为2瓶以粉底膏为基质的铜绿假单胞菌样品,通过产生随机数字的方式对样品进行编码,然后随机分配给参试实验室。结果：铜绿假单胞菌的质控样品的均一性、储藏和运输稳定性均符合能力验证中质控样品的要求;全国65家实验室中62家结果评定为满意,满意率为 95.38%。3家不满意的实验室中2家为省级检验机构,1家为地市级检验机构。省级检验机构的满意率为 94.28%,地市级检验机构的满意率为95.65%。结论：研制的铜绿假单胞菌质控考核样品可以满足能力验证的需求,本次能力验证真实地反映了参试单位的检测水平。     

应用二重PCR对沙门菌属和肠炎沙门菌检测

[目的]建立快速检测肠炎沙门菌的检测方法。[方法]以属特异性引物ST11、ST15和肠炎沙门菌的特异性引物Sefl167、Sef478构建二重PCR反应体系，对样本进行沙门菌属的鉴定同时对肠炎沙门菌进行检测。[结果]实验证明本方法可以准确的对沙门菌属进行鉴定，同时也能比较准确的对肠炎沙门菌进行鉴定。[结论]为沙门菌食物中毒的鉴定提供更加快捷的检测方法。     

北京市市售海产品中副溶血性弧菌的监测

副溶血性弧菌是一种嗜盐性海洋微生物,广泛分布于近岸海水、海底沉积物和海产品中,是引起我国细菌性食物中毒危害的首要食源性致病菌,特别是在一些沿海城市由该菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒总数的比例高达60%以上[1]。该菌也是北京市食物中毒主要病原菌之一,为了解北京市海产品中副溶血性弧菌的污染状况,2006年7~8月对市场出售的不同类型的海产品共52件进行了副溶血性弧菌的污染调查,结果报道如下。1材料与方法1.1样品来源北京市各大商场、超市及农贸市场的随机抽检样品。包括鲜活和冷冻的虾、鱼、贝等海产品共计52件。1.2材料3.5%NaC…     

应用PCR方法对生鸡肉中分离到的空肠弯曲菌进行鉴定

目的：对北京市市场销售的肉制品的空肠弯曲菌污染的状况进行调查,并建立快速的弯曲菌PCR鉴定的方法。方法：采用中国疾病预防控制中心下发的监测方法对北京市超市和集贸市场销售的鸡肉采集100件并进行检测,生化鉴定采用API Campy系统进行鉴定,同时采用针对空肠弯曲菌h ipO设计的引物对分离的弯曲菌进行鉴定。结果：共有4件检出空肠弯曲菌,采用PCR方法进行鉴定的结果与生化方法鉴定的结果一致。结论：在北京销售的鸡肉中存在空肠弯曲菌的污染,带菌率为4%,针对h ipO设计的引物可以对空肠弯曲菌进行快速鉴定。     

北京市食品中五种食源性致病菌污染状况调查研究

[目的]了解北京市食品中沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157：H7、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的分布状况、动物储存宿主的种类、菌株生物学特点，初步确定可能污染上述致病菌的高危食品，为食物中毒监测提供科学依据。[方法]依据国标方法，采用进口显色培养基，对样本分别进行沙门菌、单增李斯特菌、EHEC O157：H7、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌分离、生化及血清学鉴定。[结果]检测生肉(牛、猪、鸡)、熟肉、生牛奶、冰激凌、酸奶各生食水产品六类样品共927件，共检出致病菌197株，总检出率21．3％；其中分离沙门菌33株，检出率3．2％；单增李斯特菌99株，检出率9．6％；金黄色葡萄球菌65株，检出率6．3％。EHEC O157：H7和副溶血性弧菌均未检出。6类食品中致病菌阳性率最高的为生肉(37．7％)，其次为生奶(24．7％)，酸奶中未检出致病菌。[结论]北京市居民主要消费食品存在食源性致病菌污染，其中生肉和生奶是主要污染食品品种，单增李斯特菌在肉与肉制品中污染率较高(17．1％)，生肉(鸡肉)中沙门菌带菌率较高(19．4％)，主要血清型为肠炎沙门菌，生牛奶中金黄色葡萄球菌带菌率高(24．7％)，生食水产品未检出副溶血性弧菌，但存在金黄色葡萄球菌的间接污染，酸奶中未检出致病菌。