布鲁菌脉冲场凝胶电泳图谱分型研究

我们挑选国内不同年分、不同地点分离的95株布鲁菌（包括19株标准菌株），进行脉冲场凝胶电泳图谱分型的分析研究。     

应用NASBA定量检测HCV RNA的研究进展

NASBA（nucleic acid sequence-based amplification)即核酸序列依赖性扩增法，是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增的RNA新技术。反应在42℃进行，可在2h内将RNA模板扩增约10^9倍。本文综述NASBA在HCV RNA定量检测中的应用。     

义务兵服役期间生理生化指标的变化

目的探讨义务兵在部队2年服役期间血压、体质指数(BMI)、血脂等生理生化指标的变化,为维护官兵健康提供参考。方法选择某部2010年入伍、2012年退伍的义务兵208人,于入伍1周、入伍3个月和退伍前1周检测其血压、体质指数、血脂和血清酶学等指标。结果义务兵退伍前1周血压、BMI、血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白较入伍1周时明显升高,差异有统计学意义(P0.01);高密度脂蛋白下降,无统计学意义(P0.05)。义务兵在新兵训练3月时,ALT、CK、CK-MB较入伍1周明显升高,在退伍前1周CK、CK-MB明显低于入伍1周和入伍3月时,退伍前1周ALT高于入伍1周时但低于入伍3个月时,差异均有显著性。结论应注意加强义务兵服役期间饮食管理,防止代谢综合征的发生;同时应注意加强义务兵训练时生化酶学指标的监控。     

乙型肝炎病毒治疗性多表位基因疫苗在小鼠中的免疫应答研究

目的:分析乙型肝炎病毒(HBV)重组多表位抗原基因在大肠杆菌中非融合表达的蛋白B-BPT的免疫原性,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pBAD/BPT,并在大肠杆菌中诱导表达。以纯化的蛋白B-BPT免疫BALB/c小鼠,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测该融合蛋白诱导的小鼠细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答。用流式细胞术(FCM)检测小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的比例,用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效应。结果:B-BPT蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导特异性CTL应答(P<0.05,与空白对照组比较);B-BPT蛋白免疫后,可显著刺激小鼠脾淋巴细胞增值(P<0.05,与空白对照组比较)。结论:该非融合表达的蛋白B-BPT可有效地诱导小鼠特异性CTL免疫应答,为进一步研制乙肝预防治疗性疫苗奠定了基础。     

原发性胆汁性肝硬化-自身免疫性肝炎重叠综合征临床病理研究

目的探讨并比较自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)及原发性胆汁性肝硬化-自身免疫性肝炎重叠综合征(AIH-PBC重叠综合征)的临床、生化及病理特征。方法对具有肝穿刺标本的14例AIH-PBC重叠综合征、26例Ⅰ型AIH和29例PBC(Scheuer分期Ⅰ、Ⅱ期)患者进行比较,重点分析AIH-PBC重叠综合征的临床表现、生化特点及病理特点。结果 3组患者的性别、年龄及临床特点无显著差异;AIH-PBC重叠综合征血清碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、抗线粒体抗体(AMA)、AMA-M2阳性率明显高于AIH组(P<0.05);而丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-球蛋白、免疫球蛋白IgG以及抗核抗体(ANA)或抗平滑肌抗体(SMA)阳性率明显高于PBC(P<0.05或P<0.01)。肝组织学示界面炎/碎屑样坏死、小叶内炎症及胆管病变。结论 AIH-PBC重叠综合征临床、血清学及组织病理学表现出AIH和PBC双重特征,不同于单纯的PBC和AIH。     

布鲁氏菌PFGE分子分型的条件优化

[目的]将PFGE方法应用于布鲁氏菌分型研究,探索建立布鲁氏菌PFGE分型的最优化方法。[方法]在用PFGE方法进行布鲁氏菌基因分型的研究中,针对不同内切酶、酶切的浓度和时间、脉冲时间等影响PFGE分型结果的因素进行优化,利用优化后的条件对布鲁氏菌19株标准菌株进行分型研究。[结果]在布鲁氏菌的PFGE分型研究中,选择XbaI为内切酶、酶切浓度为96u/200μl、酶切时间为4h、脉冲时间为2～25s为PFGE电泳的优化条件,在分析的19株布鲁氏菌标准菌株中,6种布菌的PFGE图谱各不相同,但PFGE不能将种内不同生物型布菌完全区分开来。[结论]PFGE方法可用于布鲁氏菌的基因分型的研究,是对传统分型方法一种较好的补充。     

布鲁氏菌猪种标准株外膜蛋白OMP25的原核表达

目的克隆布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因并构建基因的原核表达系统。方法用聚合酶链反应技术扩增得到布鲁氏菌基因组，得Omp25基因片段，T—A克隆后测定核苷酸序列，将目的基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，经双酶切和DNA测序测定，将构建的重组质粒转化大肠杆菌（E．coli HB101，TOP10），经IPTG诱导后，用SDS—PAGE检测重组蛋白rOrap25表达情况。结果经DNA测序显示Omp25DNA序列和插入位点正确，成功构建了重组质粒DGEX-4T-1-Omp25，经IPTG诱导，特异性表达出以包涵体形式存在48kDa的Omp25融合蛋白。结论制备、克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因片段，并在大肠杆菌中表达出Omp25融合蛋白。     

IFN-γ/IL-4对呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞TLR3和TSLP mR-NA表达的影响

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞16HBE对Toll样受体3(TLR3)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)mRNA表达的影响,并探索Th1/Th2细胞因子IFN-γ/IL-4对RSV感染16HBE细胞TLR3和TSLPmRNA表达的作用.方法:利用Hep-2细胞扩增病毒,并进行病毒毒力鉴定;不同浓度人工合成双链RNA(dsRNA)聚肌胞加入细胞培养基中,实时荧光定量RT-PCR检测16HBE细胞TLR3mRNA和TSLP mRNA表达水平变化;RSV感染16 HBE细胞试验分组:对照组、RSV感染组(MOI为2的RSV病毒感染16HBE6h)、RSV/IFN-γ组(RSV病毒感染,同时重组人IFN-γ 100μg/L加入培养基)、RSV/IL-4组(RSV病毒感染,同时重组人IL-4 100μg/L加入培养基),实时荧光定量RT-PCR检测TLR3mRNA和TSLPm RNA表达水平变化.结果:经Hep-2细胞培养扩增获得足量Long株RSV病毒;聚肌胞能有效刺激16HBE细胞TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),并随聚肌胞浓度增加提高;RSV感染16HBE细胞6 h,TLR3和TSLPmRNA表达水平均升高(P<0.01);Th2细胞因子IL-4可以加强RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),而Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLP mRNA表达水平升高(P<0.01).结论:TLR3刺激物聚肌胞能有效刺激人呼吸道上皮细胞TLR3 mR-NA和TSLPmRNA表达水平升高;RSV感染16HBE细胞引起TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高;Th2细胞因子IL-4能协同病毒感染增加TSLPmRNA表达水平;Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高.     

布鲁氏菌AP-PCR最优反应体系的建立

目的建立布鲁氏菌的随机扩增DNA多态性的优化反应体系，用于布鲁氏菌分子流行病学研究。方法利用几种随机引物及其组合(Pl、P2、P3、P4、P5、OPLO4、P3／5、P4／5)进行随机引物PCR的反应(AP—PCR，又称RAPD)，及重复片断引物ERICIR／ERIC2的随机扩增多态性；另外针对优选引物P5和OPLO4，分别对Mg^2 浓度、dNTPs浓度、模板DNA浓度、引物的浓度及扩增过程中的退火温度等影响反应结果的因素，进行了一系列优化组合方案的试验及系统分析。结果引物Ps、OPLO4和引物组合P4，5可以得到布鲁氏菌的高分辨率的分型带谱，并建立相应的优化反应体系。结论在严格的优化反应条件下。建立简单、快捷、灵敏度高的RAPD方法，用于布鲁氏菌的DNA多态性研究，为布鲁氏菌分子流行病学的深入研究提供资料。     

孕期青蒿琥酯和乙胺嘧啶-磺胺多辛联合用药的安全性评价

作为一项双盲的、以安慰剂为对照的、将村庄随机分组的疟疾传播控制实验的一部分,作者选择冈比亚郊区的14 017位自愿的村民,以安慰剂为对照,进行青蒿琥酯和乙胺嘧啶-磺胺多辛联合单剂量给药的安全性评价实验,根据封闭程度和规模大小,在42个村庄中选择18个村庄在给药后予以密切观察,在疟疾传播季节到来前一个月,在18个