AFP、AFU、GPDA对原发性肝癌的联合检测

对４７ 例原发性肝癌病人,３５ 例肝良性病病人,５１ 例正常对照进行了血清甲胎蛋白（ Ａ Ｆ Ｐ） 、α－ Ｌ 岩藻糖苷酶（ Ａ Ｆ Ｕ） 、甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（ Ｇ Ｐ Ｄ Ａ） 的检测。结果显示单独检测 Ａ Ｆ Ｐ 阳性检出率最高,其次为 Ａ Ｆ Ｕ, Ｇ Ｐ Ｄ Ａ 最低;联合检测可明显提高阳性检出率,但特异性降低。对三者分别进行相关性分析,结果说明三者无相关性;肝癌病人３ 种指标在有无肝外转移间无统计学差异。     

IL-12协同B7-1诱导机体抗肿瘤免疫的实验研究

目的研究白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)协同共刺激分子B7-1,联合诱导机体抗肿瘤免疫对大鼠卵巢上皮癌的治疗作用并探讨其机理.方法用携带有小鼠IL-12和B7-1的逆转录病毒表达载体感染大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19,建立高表达细胞株NuTu-19/IL-12、NuTu-19/B7-1及双基因共表达细胞株NuTu-19/IL-12-B7-1,并以转染空载体pLXSN的细胞NuTu-19/Neo为对照.用经丝裂霉素C处理的各种基因修饰的肿瘤细胞免疫动物,观察卵巢癌腹腔转移模型动物生存期,及其诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)杀伤活性的作用.结果经各种基因修饰的肿瘤细胞免疫后,大鼠脾淋巴细胞增殖能力有不同程度的提高,CTL杀伤同源肿瘤细胞的活性明显增强,IL-12和B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞免疫动物对模型动物生存期的延长具有显著意义(P＜0.05).结论IL-12和B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞可以刺激机体CTL增殖、成熟,增强CTL对肿瘤细胞的识别和杀伤活性等,两者联合具有明显的协同效应.联合免疫基因治疗作为一种新的卵巢癌治疗方法,值得深入研究.     

IL-1促进子宫内膜异位症在位基质细胞增殖作用的研究

目的：研究白细胞介素 1β（interlukin 1β,L 1β）对子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）在位内膜基质细胞生长的影响，探讨IL 1β在EMs发病中的作用。方法：培养EMs在位内膜基质细胞作为研究EMs的体外实验模型，加入不同浓度的IL 1β后采用四唑盐比色法（MTT）观察细胞增殖情况、流式细胞计量仪（flow cytometry,FCM）检测细胞生长周期。结果：依据MTT结果所绘得的细胞生长曲线及FCM检测的细胞周期结果显示：IL 1β作用后细胞生长旺盛，G0/G1期细胞所占比例明显低于G2/M期及S期，当IL 1β的浓度为 1.0?ng/ml且作用12?h此作用最为显著。结论：IL 1β可促进EMs在位内膜基质细胞由G0/G1期进入G2/M期及S期，对子宫内膜细胞生长具有促增殖作用。     

Th17、Tc1细胞在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:研究宫颈鳞癌组织中Th17及Tc1细胞表达,探讨Th17及Tc1细胞在宫颈鳞癌发生发展中的作用及相互关系。方法:以早期宫颈鳞癌患者为实验组,以良性病变行子宫切除的慢性宫颈炎患者为对照组,制备宫颈组织淋巴细胞单细胞悬液后,用流式细胞术检测组织中Th17及Tc1细胞的表达。结果:实验组和对照组中Th17细胞比例分别为(3.89±1.26)%和(1.51±0.46)%,Tc1细胞比例分别为(1.45±0.71)%和(5.37±2.95)%。与对照组比较,实验组中Th17细胞比例显著升高(P0.01),Tc1细胞比例显著降低(P0.01)。实验组中盆腔淋巴结阳性者较阴性者Th17细胞表达降低(P=0.038);临床分期II期患者较I期患者Tc1细胞表达增高(P=0.046)。宫颈鳞癌组织中Th17与Tc1细胞表达呈负相关(r=-0.445,P=0.014)。结论:Th17及Tc1细胞在宫颈鳞癌患者肿瘤局部免疫调节反应中均起着重要作用,且Th17细胞可能通过抑制Tc1细胞的功能发挥免疫调节作用。     

特发性血小板减少性紫癜患者脾脏CD5+和CD5-B细胞共同参与血小板自身抗体的产生

目的：研究慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者脾脏CD5^ B细胞水平的变化及CD5^ 和CD5^-B细胞与血小板膜糖蛋白（GP）特异性自身抗体产生的关系，以识别致病B细胞亚群。方法：应用双色流式细胞仪检测8例慢性ITP患者脾脏CD5^ B细胞水平。选择4例血浆抗GPⅡb/Ⅲa和抗GP Ⅰb/Ⅸ抗体双阳性ITP切脾患者，应用Ficoll密度梯度离心及花环形成分离法分离脾脏B淋巴细胞，继而采用镝产珠分选法分选、纯化CD5^ B细胞和CD5^-B细胞，并分别进行体外培养，应用改良MAIPA法检测血浆和细胞培养上清液的血小板特异性抗体。结果：ITP患者脾脏CD5^ B细胞水平圈晨自身免疫性疾病患者略有增高，二者之间差异无统计学意义。CD5^ B细胞水平与患者血小板计数无相关性。4例血浆抗GPⅡb/Ⅲa抗体和抗GPⅠb/Ⅸ抗体双阳性。另外1例CD5^ B细胞培养液抗GPⅡb/Ⅲa抗体阴性，抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性;CD5^-B细胞培养液抗GPⅡb/Ⅲa抗体和抗GPⅠb/Ⅸ抗体双阳性。结论：脾脏CD5^ 和CD5^-B细胞 均可产生血小板GP特异性自身抗体，抗体产生种类和滴度无明显差异。提示二者共同参与了ITP的发病过程。     

特发性血小板减少性紫癜和骨髓增生异常综合征NRAS与FMS基因突变的研究

目的 探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制并探讨其与骨髓增生异常综合征(MDS)的鉴别诊断.方法 用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)方法检测MDS患者突变频率较高的NRAS基因12、13密码子及FMS基因301、969密码子点突变在中老年ITP患者及MDS患者中的出现频率.结果 25例ITP患者中有1例存在NRAS基因突变,1例存在FMS基因301密码子突变;8例MDS患者中有3例出现基因突变,其中2例为NRAS基因突变,1例为FMS基因突变.结论 PCR-SSCP方法检测NRAS基因12、13密码子,FMS基因301、969密码子突变有可能用于鉴别诊断ITP与MDS,ITP患者中出现NRAS基因、FMS基因突变者应归入MDS.     

联合应用双自杀基因对SW1990细胞的杀伤作用

目的:研究双自杀基因(胞嘧啶脱氨酶基因CD和胸苷激酶基因HSV-tk)的应用对 SW1990细胞的杀伤作用和旁观者效应.方法:脂质体法将CD和HSV-tk双自杀基因转染入PA317细胞,用其病毒上清转染胰腺癌细胞SW1990,G418筛选出阳性细胞SW1990/CD tk,然后加入不同浓度的5-Fc或/和GCV,MTT法观察其杀伤作用;将不同比例的SW1990/CD tk和SW1990细胞混合,联合应用5-Fc和GCV杀伤,观察其旁观者的效应.结果:单独应用5-Fc或GCV均能对转染阳性的胰腺癌细胞产生明显的杀伤效应,联合应用可以在较小的剂量下产生更大的杀伤作用;当阳性细胞比例达到20%时即可对半数细胞产生杀伤作用.结论:双自杀基因的应用对胰腺癌细胞具有明显的杀伤作用,其旁观者效应明显.     

宫颈癌及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性的研究

目的 :探讨Hela及HHUC细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法 :将hTERT核心启动子基因转入Hela、HHUC细胞系、人正常皮肤表皮细胞及子宫内膜上皮细胞中 ,检测细胞系hTERT启动子的活性、hTERTmRNA表达水平及端粒酶活性。分别以HEK2 93细胞系作为阳性对照 ,HELF细胞系作为阴性对照。结果 :细胞系Hela、HHUC、人正常皮肤表皮细胞及正常子宫内膜上皮细胞中的hTERT启动子活性分别为 2 0 1%、14 9%、0 3%和 0 5 % ;hTERTmRNA相对表达水平分别为 0 6 3、0 5 1、0和 0 ;端粒酶活性分别为 0 393、0 387、0 14 4和 0 15 2。结论 :宫颈癌细胞系及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高 ,而在正常角化细胞及子宫内膜上皮细胞中则被抑制或不表达。hTERT启动子活性水平与hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性之间有显著相关性     

HSV-TK/GCV体系对前列腺癌PC-3m细胞杀伤作用的实验研究

目的：探讨HSV－TK／GCV体系对前列腺癌PC-3m细胞的杀伤作用。方法：应用逆转录病毒载体将HSV－TK基因转染PC－3m细胞，经RT－PCR鉴定后，MTT、流式细胞仪、电镜等方法检测丙氧鸟苷（GCV）对转染后PC－3m细胞的杀伤作用，同时以未转染PC－3m细胞为对照。结果：GCV对正常PC－3m细胞毒性较低，而对转染后PC－3m细胞有较强的细胞毒作用，但旁观者效应不明显。结论：HSV－TK／GCV体系对前列腺癌细胞具有明显杀伤作用，有必要进一步研究。     

Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究

目的 构建人视网膜母细胞瘤基因(Rb94)真核表达载体,观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制.方法 构建重组表达质粒pIPES-Rb94,经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系.细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间;实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达;成克隆实验检测pIRES-Rb94对A549细胞放射敏感性影响,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪分析细胞周期.结果 成功构建pIRES-Rb94质粒,转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIRES-Rb94-A549.与A549细胞相比,pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长(31.5h:39.5 h;t=5.15,P<0.01);hTERT、Bcl-2 mRNA表达下降(0.02:1.00;t=18.99,P<0.01;0.01:1.00;t=13.73,P<0.01);G2+M期细胞增加(35.91%:4.53%;t=36.78,P=0.00),G0+G1期和S期细胞减少(47.02%:74.07%;t=11.71,P=0.00和17.07%:22.32%;t=2.30,P<0.05);由D0值计算的SER为1.30.结论 Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用,其机制可能是G2+M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2 mRNA表达,并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖.