O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法。方法以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条。在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据。结果用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3．5×10^4CFU／mL。用自制试纸条和标准法同时检测77份样品（均为水产品）,两种方法的总符合率为85．7％。结论O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展,具有广阔的应用前景。     

E.coli O157：H7 LAMP检测方法的建立

目的建立检测E.coli O157：H7环介导的等温扩增方法（LAMP）。方法选取E.coli O157：H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的E.coli O157：H7 LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coli O157：H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coli O157：H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101CFU/mL。样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小。对76份样品进行了检测,E.coli O157：H7 LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测。结论本研究建立的E.coli O157：H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用。     

生果、蔬中大肠杆菌O157∶H7荧光定量PCR检测方法的评估及改进

目的:评估污染风险较高的6种生果、蔬中E.coli.O157:H7的PCR检测情况,以及初步探讨其机理和改善措施。方法:采用添加标准菌株,比较荧光定量PCR检测方法和传统分离培养法的检出情况,然后在PCR反应体系中分别添加PVPP、脱脂奶粉、BSA等物质,比较检出灵敏度的改善情况。结果:除绿豆芽和青椒外,PCR检测方法和传统分离培养法均能在1 cfu/10g、10 cfu/10g、100 cfu/10g的接种浓度上检出阳性,对于绿豆芽和青椒,荧光定量PCR检测方法在1 cfu/10g接种浓度上未检出,分离培养法在10 cfu/10g、100 cfu/10g两个接种浓度上均未检出。添加脱脂奶粉和BSA后,绿豆芽和青椒样品在1 cfu/10g的接种浓度上检出阳性,且在该浓度上其他样品的检出频率均有一定提高。PVPP对PCR体系改善不明显。结论:在生果、蔬中E.coli.O157∶H7检测中,荧光定量PCR检测方法比传统分离培养法灵敏度更高。脱脂奶粉和BSA可以用于改善生果、蔬中E.coli.O157:H7的荧光定量PCR检测体系,提高检出率和检测灵敏度。     

肉食品中3种食源性致病菌多重荧光PCR检测

沙门菌、单增李斯特菌和E. coli O157:H7是常见污染食品的致病菌,主要通过食品、饮水感染人类,严重侵害人类健康.目前,沙门菌、单增李斯特菌和E. coli O157:H7是我国进出口冻肉产品的主要检测项目,其常规方法需分离培养、生化和血清学鉴定等多个步骤,操作复杂,检测周期长.因此,探索建立快速、简便、准确、特异性好的检验方法,对冻肉产品的快速、高效通关具有重要意义.     

O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法。方法以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条。在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据。结果用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3.5×104CFU/mL。用自制试纸条和标准法同时检测77份样品(均为水产品),两种方法的总符合率为85.7%。结论O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展,具有广阔的应用前景。     

进口冻肉中小肠结肠炎耶尔森氏菌检出情况分析

目的：了解我国进口冻肉产品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出情况，为此类产品的风险分析和检验检疫工作提供依据。方法：通过采用小肠结肠炎耶尔森氏菌的国标检验方法和VITEK、API生化鉴定仪对247份进口冻肉产品进行检测。结果：247份样品中共检出耶尔森属菌33份，其中17份为小肠结肠炎耶尔森氏菌，检出率为6．88％，均属于生物1A型，其中3株为血清O：8型，其余均属非常见血清型。阳性样品中16份为冻鸡类样品，1份为冻猪肉类样品。94份海产样品无一份检出。结论：通过实验数据分析我国进口的冻肉产品中冻鸡类产品检出小肠结肠炎耶尔森氏菌比率较高，而海产品和冻猪肉产品中检出率相对较低，所以认为冻鸡类产品小肠结肠炎耶尔森氏菌污染风险较高，应加强此类产品检验监管力度。     

快速检测副溶血弧菌及其毒力株方法的建立

目的利用实时PCR技术，建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法。方法根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标（ROX标记），建立检测所有副溶血弧菌菌株的方法。通过与文献报道的检测直接耐热溶血素（TDH）基因的实时PCR体系合并，建立了同时检测副溶血弧菌及其毒力株的双重实时PCR方法。结果通过对9个属的101株菌株进行试验，所有的52株副溶血弧菌均产生ROX阳性信号（toxR’），其余菌株均检测为阴性，其中46．2％（24／52）的副溶血弧菌产生HEX阳性信号（tdh^＋）。检测toxR基因的实时PCR体系DNA灵敏度为10～100fg／PCR体系，菌液灵敏度为59．2～592CFU/ml或2．96～29．6CFU／PCR体系。另外成功构建了双重实时PCR体系，能同时对副溶血弧菌的toxR和tdh基因进行检测。结论建立的双重实时PCR体系能同时检测副溶血弧菌及其毒力株，从而为食品的安全检疫提供有效手段。     

生果、蔬中大肠杆菌O157:H7荧光定量PCR检测方法的评估及改进

目的：评估污染风险较高的6种生果、蔬中E．coli．O157：H7的PCR检测情况，以及初步探讨其机理和改善措施。方法：采用添加标准菌株，比较荧光定量PCR检测方法和传统分离培养法的检出情况，然后在PCR反应体系中分别添加PVPP、脱脂奶粉、BSA等物质，比较检出灵敏度的改善情况。结果：除绿豆芽和青椒外，PCR检测方法和传统分离培养法均能在1cfu／10g、10cfu／10g、100cfu／10g的接种浓度上检出阳性，对于绿豆芽和青椒，荧光定量PCR检测方法在1cfu／10g接种浓度上未检出，分离培养法在10cfu／10g、100cfu／10g两个接种浓度上均未检出。添加脱脂奶粉和BSA后，绿豆芽和青椒样品在1cfu／10g的接种浓度上检出阳性，且在该浓度上其他样品的检出频率均有一定提高。PVPP对PCR体系改善不明显。结论：在生果、蔬中E．coli．O157：H7检测中，荧光定量PCR检测方法比传统分离培养法灵敏度更高。脱脂奶粉和BSA可以用于改善生果、蔬中E．coli．O157：H7的荧光定量P（聚检测体系，提高检出率和检测灵敏度。