高灵敏orexin A放免法的建立及其对大鼠缺血再灌注的应用

建立高灵敏orexinA放射免疫分析方法 (RIA) ,探讨肠缺血再灌注损伤对血浆及下丘脑orexinA水平的影响。采用氯胺T法制备碘标记orexinA ,抗原抗体反应采用平衡一步法 ,4℃温育 2 4h后 ,经PR试剂分离结合和游离的标记抗原 ,并用该方法测量正常人、高血脂患者血浆orexinA水平及大鼠肠缺血再灌注损伤后血浆及下丘脑组织中orexinA浓度的变化。结果表明 ,本方法测定orexinA标准曲线范围为 2 1 - 2 0 0 0 pg/mL ,最低检出量为 2 1 pg/mL ,批内和批间变异系数均小于 1 0 %。 30名正常人血浆orexinA水平为 338.4 8± 2 0 .2 4 pg/mL ,30例高血脂患者为 343.5 1± 1 5 .4 9pg/mL ;大鼠肠缺血再灌注损伤前后及不同损伤时间点orexinA的变化差异亦无显著性。本文提示orexinARIA方法灵敏度和特异性较高 ,可用于人血浆、大鼠血浆和下丘脑组织orexinA的检测     

传染性非典型肺炎患者白细胞介素1β含量变化及意义

目的:观察传染性非典型肺炎患者血清白介素 1β(IL 1β)含量变化。方法:用放射免疫法检测了6 6例SARS患者血清IL 1β含量,与正常对照组作比较。结果:进展期SARS患者血清IL 1β含量为0 2 9±0 2 0ng/ml,明显高于对照组;重型SARS患者血清IL 1β含量为0 76±0 37ng/ml,显著高于普通型SARS患者;重型SARS患者恢复期血清IL 1β含量变化多样。结论:SARS患者存在免疫反应异常,血清IL 1β含量变化可能是SARS发病机制中的一个重要环节     

正常血钾型周期性麻痹SCN4A基因R675Q新突变细胞模型的建立及初步研究

目的 建立一个正常血钾型周期性麻痹(normokalemic periodic paralysis,normoKPP)R675Q新突变的细胞模型并对其通道电流进行初步研究.方法 用编码野生型人骨骼肌钠离子通道a亚单位基因(skeletal muscle Na channel type 4 alpha subunit gene,SCN4A)的cDNA为模板,PCR技术定点突变后磷酸钙沉淀法瞬时转染突变质粒至293细胞,逆转录PCR和Western印迹验证目的 基因和蛋白的表达;膜片钳技术全细胞记录野牛和突变型钠通道电流.结果 突变经测序得以证实;转染后24 h和48h,突变通道的基因及蛋白表达量显著增高;相同的测试电压下R675Q钠通道相对电流在到达峰值前小于野生型钠通道,到达峰值后大于野生型钠通道;R675Q和野生型钠通道均在0 mV测试电压刺激下到达峰值.结论 成功建立了正常血钾型周期性麻痹R675Q新突变的细胞模型;R675Q突变同时提高了通道的激活和失活,其所在的S4区域可能和患者发作性力弱的症状密切相关.     

转染反义磷脂酶A2寡核苷酸抑制LPS诱导Hela细胞分泌IL-1β和IL-6

目的：研究脑浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2,85—kD PLA2)在脂多糖诱导Hela细胞释放细胞因子IL-1β、IL-6的信号机制中的作用。方法：①利用脂质体将cPLA2的反义寡核苷酸转染入Hela细胞，通过聚合酶链式反应(RT—PCR)及Western杂交印迹分析检验胞浆中cPLA2人水平的变化；②用放免方法检测不同时间培养上清中的IL-1β、IL-6浓度。结果：①转染后cPLA2的蛋白表达明显减少，但mRNA水平未见显著改变；②Hela细胞释放IL-1β、IL-6随cPLA2人反义寡核苷酸浓度的增加而减少。结论：cPLA2人LPS刺激的Hela细胞释放炎性细胞因子IL-1β、IL-6的过程中可能发挥重要的信号传递作用。     

免疫脂质体与临床

将特异性抗体粘附于脂质体上形成免疫脂质体,它能特异性识别表达具有某种抗原的细胞或组织.由它携带药物具有靶向性强,毒副作用小,半衰期长等优点.针对其特点,临床应用免疫脂质体开展了对多种疾病的治疗.根据免疫脂质体携带药物对疾病治疗的优缺点,本文综述了近几年的临床观察和研究的进展.     

烫伤应激反应后大鼠血浆TNF与脑组织M受体的变化

将Wistar大鼠随机分成对照组、烫伤后24、48、72小时组。为开水烫伤,背部创面控制30%。各组采用双抗体夹心法测血浆中TNF含量,所用标准TNF和抗TNF单抗均由军事医学科学院、基础所、分子免疫室沈倍奋教授馈赠。对照组及烫伤后24、48、72小时血浆TNF分别为5.12±0.23(n=6),38.44±13.81(n=     

瘦素受体Gln223Arg基因多态性与不同葡萄糖耐量血清瘦素的相关性研究

目的 :研究瘦素受体基因Gln2 2 3Arg等位基因与不同葡萄糖耐量中血清瘦素及其它代谢指标的关系。方法 :运用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)方法测定无亲缘关系 ,不同葡萄糖耐量 198例北京地区汉族人的瘦素受体基因Gln2 2 3Arg等位基因 ,同时分析其与临床资料的相关性。结果 :不同等位基因型的瘦素水平无显著差异 ,而在葡萄糖耐量减低 (IGT)男性 ,Gln2 2 3Arg等位基因有较高的胆固醇水平 [(7 2 6±1 95 )和 (5 31± 1 31)mmol/L ,P =0 0 4]和较高的收缩压 [(18 8± 1 2 )和 (17 2± 1 6 )kPa ,P =0 0 3]。结论 :瘦素受体Gln2 2 3Arg基因多态性与不同葡萄糖耐量的血清瘦素无关 ,但与机体代谢有一定关系     

传染性非典型肺炎患者血清干扰素-2α含量测定及评价

目的 观察SARS患者血清干扰素-2α(IFN--2α)含量变化。方法用放射免疫法检测了66例SARS患者血清IFN-2α含量，并与正常对照组作比较。结果SARS组进展期患者IFN-2α含量明显高于对照组，重型SARS患者血清IFN-2α含量要么较高，要么较低。结论患者血清IFN-2α含量变化提示细胞免疫参与了机体的免疫反应，重症SARS患者IFN-2α含量变化反映了患者的免疫机能状况差异。     

体内外脓毒症损伤对Leptin表达水平的影响

目的：通过观察体内脓毒症时肺组织及脂多糖（或内毒素,LPS）诱导的体外炎症模型中leptin水平的变化,探讨leptin在脓毒症损伤情况下的作用及意义。方法：建立小鼠的脓毒症损伤模型和LPS诱导的ECV-304细胞炎症损伤模型,用高灵敏的leptin放射免疫分析检测肺组织及细胞上清中leptin水平。结果：脓毒症6h肺组织内leptin显著低于假手术组,而脓毒症12h恢复于假手术组水平之上;leptin保护组6h肺组织内lepin明显高于单纯的脓毒症组,而消炎痛保护组却没有此变化。LPS刺激使ECV-304细胞分泌leptin明显下降（P〈0．05）,且成时间依赖性。结论：lenin可能作为一种炎性因子在脓毒症损伤中发挥一定的保护作用。     

不同应激诱导对HELA细胞产生IL-6及leptin水平的影响

目的：研究高葡萄糖（HG）、脂多糖（LPS）及双氧水（H2O2）应激对HELA细胞上清中白细胞介素-6（IL-6）及leptin含量的影响。方法：分别给予以上三种炎症因子,建立HELA细胞炎症反应模型,采用放射免疫分析测定不同时间点细胞上清中IL-6及leptin含量的变化。结果：与空白对照组相比,三种刺激物作用6h与24h后,IL-6的含量显著升高,而leptin含量明显下降;且随着作用时间延长变化愈加明显,统计学上差异有显著性（P〈0.05）。结论：leptin可能作为一种炎性细胞因子在炎症反应中发挥一定的作用。