琼脂糖自组装膜基底型免疫芯片载体制备及抗体固定研究

目的:建立具有三维水凝胶结构的琼脂糖自组装膜载体的制备方法,提高免疫芯片对抗体的固定效率。方 法:以玻片为载体,采用琼脂糖、高碘酸钠对玻片表面进行修饰,制备琼脂糖自组装膜载体。利用SEM、AFM 和FTIR 对载体进 行表征,获得最佳制备条件。利用荧光显微成像及Image J 软件,研究该载体对2 种不同种属来源抗体的固定效率,比较琼脂 糖自组装膜载体和普通醛基修饰载体对抗体的固定效果。结果:制备的琼脂糖自组装膜载体表面均匀、致密,这种结构比表 面积大、抗体固定效率高。制备载体的最佳琼脂糖浓度为1.0%,其固定抗体的最佳浓度为0.3 ~0.4 mg/ ml,琼脂糖自组装膜 载体的荧光强度是普通醛基载体的3.94 倍。结论:琼脂糖自组装膜是一种理想的固定抗体分子的表面修饰方法,有望用于免 疫芯片载体的制备。     

2种食源性微生物胶体金银染技术的检测方法研究

目的建立一种可视化快速检测食源性微生物的新方法。方法设计与沙门菌Inva基因,大肠杆菌uid A基因5'端和3'端互补的巯基化探针和氨基化探针以及靶探针。氨基化探针连接醛基化玻片,并与提取的靶DNA或靶探针互补连接,靶DNA或靶探针另一端再与巯基化探针连接形成复合结构;利用胶体金生物亲和性好的特点,让胶体金和巯基化探针连接,银染放大信号,检测微生物。结果靶探针和靶DNA与两种探针杂交时分别选择1 mmol/L、100 nmol/L、1 nmol/L、100 pmol/L、1 pmol/L 5种浓度,并用不同靶DNA作对照;探针最低浓度为1 pmol/L,细菌靶DNA最低浓度为1 pmol/L,银染结果肉眼清晰可见。进一步验证实验结果,扩增Inva基因和uid A基因,分别得到400 kb和300 kb PCR产物,并与探针杂交银染,也得到了肉眼可见的清晰结果。结论该方法可以快速、简便的检测食源性微生物,市场前景广阔。