霍乱弧菌O1群与O139群产毒株多酶恒温快速扩增检测方法的建立

目的 建立一种霍乱弧菌O1群与O139群产毒株快速准确的检测方法。方法 基于多酶恒温快速扩增技术,根据霍乱弧菌溶血素编码基因、霍乱毒素编码基因、O1群与O139群O抗原编码基因设计引物与探针,初步建立检测方法。以不同血清型霍乱弧菌及其它细菌DNA为模板,验证检测方法的特异性与灵敏度。结果 配制反应体系时,按试剂盒说明书推荐加入量0.6μL加入探针时可成功扩增溶血素编码基因、霍乱毒素编码基因及O1群与O139群O抗原编码基因4个目的基因,针对上述4个基因分别优化探针加入量为1.0μL、1.0μL、1.0μL、0.8μL时扩增效率更高。对优化探针加入量的检测方法进行方法特异性验证时,各引物探针组合不与非目标菌DNA产生交叉反应。进行检测方法的灵敏度分析时,不同目的基因的基因组检测灵敏度为70 fg或290 fg。上述实验结果证明检测方法的灵敏度及特异性满足设计要求。结论 建立了一种霍乱弧菌O1群与O139群产毒株检测的新方法,该方法特异性强、灵敏度高、检测时间短,可适用于霍乱弧菌的常规检测及快检,对霍乱的预防具有一定的积极作用。