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1.
抗百日咳毒素单克隆抗体的纯化及应用研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的纯化抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(M cAb),并建立特异、准确的PT定量检测方法。方法采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化杂交瘤细胞腹水,并经阻断抑制试验筛选识别不同表位的M cAb,用于建立定量检测PT的ELISA方法。结果经SDS-PAGE分析,纯化M cAb的纯度均在90%以上,选择二株识别不同抗原位点M cAbs,应用于检测PT的双抗夹心ELISA方法,灵敏度为2.14μg/L,批内变异系数5.85%,批间变异系数9.27%,平均回收率为108.12%,应用该法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中PT含量。结论获得了纯度高的抗PT M cAb,建立了一种特异、准确的定量检测PT的ELISA方法,并用于无细胞百日咳疫苗原液中PT含量的检测,为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段。 相似文献
2.
雷殿良 《国际生物制品学杂志》1990,(2)
普通ELISA在测试样品多于1块板时,操作繁琐,需要多孔加样器并浪费试剂.本文作者改进了原ELISA法,建立了简便灵活和准确的快速ELISA法,并用此法测定了200多人份对两种细菌抗原的抗体应答.快速ELISA法应用改良的Falcon快速分析监测系统,它由1个与96孔板相对应的带有96个珠的盖子、1个槽和96孔平底3部分组成.Falcon96孔圆底板用来稀释抗体.具体方法是将抗原放入槽中,吸附到盖子上 相似文献
3.
吸附全细胞百白破乙肝四联疫苗效果观察 总被引:3,自引:2,他引:1
目的 考察武汉生物制品研究所研制的全细胞百日咳、白喉、破伤风、乙肝联合疫苗的安全性和免疫原性,探讨联合疫苗的免疫程序。方法 进行2期临床观察。将研究对象随机分为3组,第1组按照2、4、6月龄接种吸附百白破乙肝(CHO)联合疫苗;第2组按照3、4、5月龄接种吸附百白破乙肝(CHO)联合疫苗;第3组按照3、4、5月龄接种吸附百白破联合疫苗。2期研究也随机分为3组,第1组按照2、4、6月龄接种“百白破乙肝联合疫苗”;第2组按照2、4、6月龄左侧上臂接种乙肝对照疫苗,右侧上臂接种百白破三联对照疫苗。结果 一期安全性试验观察对象91名,其中接种四联疫苗的两组各有1名体温有较弱升高,分别占接种例数的3.3%。二期共接种365例,完成全程免疫共319例。其中四联疫苗2,4,6月龄接种组有4例出现副反应,发生率为3.1%;按2,4,6月龄左臂接种乙肝疫苗、右臂接种白百破三联疫苗组有5例发生副反应,发生率4.2%;第3组0、1、6月龄接种乙肝对照疫苗,3、4、5月龄接种百白破三联对照疫苗。共有14例发生副反应。发生率为12.2%。1、2期临床观察均未发现严重副反应。接种四联疫苗后,接种对象血清白喉、破伤风、乙肝抗体阳转率均达100%,百日咳抗体阳转率大于85%,免疫前后抗体水平具有显性差异。结论 吸附全细胞百白破乙肝四联疫苗具有较好的安全性和有效性,可用于免疫接种;采用2、4、6月龄接种程序可有效诱导产生百日咳、白喉、破伤风、乙肝的保护性抗体反应. 相似文献
4.
雷殿良 《国际生物制品学杂志》1991,(1)
本文应用不同pH和离子强度的包被缓冲液测定抗原在微孔板中的吸附情况,并用单克隆和多克隆抗体分别测定了牛瘟病毒(RPV)和口蹄疫病毒(FMDV)在ELISA中的包被率。作者测定了pH5.0~8.0的0.01M磷酸缓冲液和不同离子强度(0~3M)时的包被情况。当用多克隆抗体测定包被RPV抗原时,最大OD值依赖于包被缓冲液的离子强度,当增 相似文献
5.
百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法的建立和应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立快速、准确、特异的定量检测百日咳杆菌的方法,并进行临床应用研究.方法 根据百日咳杆菌IS481基因序列,设计并合成引物和荧光探针,建立百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法,并对方法的特异度、重复性和灵敏度进行评价,检测百日咳疑似患者咽拭子225份和健康者咽拭子30份.结果 该方法的标准曲线显示模板浓度在102~108拷贝/μl线性范围与其循环阈值(Ct)具有较好的线性关系,相关系数(r)为0.998,最小检出量为102拷贝.特异度较好,灵敏度较高,重复性实验结果显示在同一时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μ1)10次,连续检测5次,变异系数(CV)为5.78%~16.7%.在不同时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μl),连续7次,CV为8.25%~14.9%.经检测,疑似患者的咽拭子有41份样本为阳性,30份健康人咽拭子均为阴性.结论 由于本实验建立的荧光定量PCR方法快速、灵敏度高、特异度好,适合临床实验室进行临床标本的百日咳杆菌的定量检测,有较大的应用前景. 相似文献
6.
汉、蒙古族人MBL基因ExonⅠ54位密码子点突变频率及其血浆含量相关性研究 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 调查健康汉、蒙古族人甘露 (聚 )糖结合凝集素 (MBL)基因 5 4位密码子点突变的情况 ,测定健康汉、蒙古族人血浆MBL含量 ,并对健康汉、蒙古族人MBL基因 5 4位密码子点突变频率与其血浆MBL含量进行相关性分析。方法 PCR扩增 ,测定序列并建立MBL基因点突变检测方法 ,即PCR RFLP方法 (BanⅠ酶切 ) ;用ELISA法测血浆MBL含量。结果 (1)建立了MBLPCR方法 ,该方法特异性高 ,重复性好 ,最低检出量为 16 0pgDNA。 (2 )MBL的限制性内切酶BanⅠ酶切结果 :通过酶切电泳分析结果显示 ,所扩增标本出现下列 3种情况 :①MBL 5 4位密码子野生型纯合子为 2条带 ,对应的相对分子质量为 2 32bp和 93bp ;② 5 4位密码子突变体纯合子只显示 1条约 32 5bp带 ;③ 5 4位密码子野生型突变体杂合子显示 32 5bp、2 32bp和 93bp 3条带。 (3)通过简单数基因计算MBL基因5 4位密码子点突变的频率 ,健康汉、蒙古族人基因突变频率分别为 0 .2 32 1和 0 .175 7。 (4 )血浆MBL含量的测定 :5 6例健康汉族人血浆MBL含量的平均值为 1998.75 0 μg L ,标准差为 15 0 5 .15 2 ;37例健康蒙古族人血浆MBL含量的平均值为 2 5 2 5 .6 76 μg L ,标准差为 195 5 .188。 (5 )健康汉族人血浆MBL含量与其编码基因ExonⅠ 5 4位密码子的点突变频率 , 相似文献
7.
破伤风毒素C片段的基因克隆、表达、纯化及免疫原性分析 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析。方法 应用PCR技术直接从破伤风梭状芽孢杆菌的质粒DNA中扩增出 1370bp的破伤风毒素C片段(简称TTC)基因 ,将此基因片段插入到表达载体pET 2 2b( )中 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达。用阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析方法进行蛋白纯化后 ,参照《中国生物制品规程 2 0 0 0年版》的免疫攻击实验方法测定其效价。结果 经SDS PAGE分析 ,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的15 %。免疫印迹实验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。纯化得到纯度为 96 .5 %的重组蛋白 ,纯化回收率达 4 0 %。免疫攻击实验测定其效价为 18.70 6IU/mg,ED50 为 2 0 μg。经加强免疫 ,1μg免疫剂量即能产生足够的抗体保护动物免受破伤风毒素的攻击。结论 所获得的重组蛋白具有良好的免疫原性 ,为开发基因工程疫苗奠定了基础 相似文献
8.
20 0 1年 2月 2 8日人大常委会通过的《药品管理法》中明确加强了生物制品的国家管理。随着科学技术日新月异的发展 ,生物技术在医药领域已经占有了相当重要的地位 ,代表着当今医药发展的潮流。新的生物技术医药产品不断问世 ,而我国传统的管理模式已经显现出不适应。无论是实施新的《药品管理法》 ,还是我国加入世界贸易组织以后面对的形势 ,都给生物制品的管理提出了更高的要求。由于生物制品本身的生物变异性和特殊性 ,WHO对生物制品的管理也提出了相应的管理要求。为了配合新修订的《药品管理法》的实施和配套法规的制订 ,国家药品监… 相似文献
9.
中国百日咳疫苗生产株S1和Prn蛋白基因序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的了解我国百日咳疫苗生产株百日咳毒素S1和外膜蛋白(Prm)的基因特征。方法分别克隆疫苗株的S1和Prn基因至PGEM-Teasy载体、进行测序,并与GenBank中收录的百日咳杆菌S1和Prn蛋白基因序列进行比较、分析。结果完成了3株疫苗生产株S1和Prn基因的扩增、克隆和序列测定。序列分析显示3疫苗株间的S1和Prn基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均在99%以上,基因进化树显示与其他菌株的同源性也较高。结论对我国3株疫苗生产株S1和Prn基因序列进行了详细地分析,为我国百日咳流行病学的研究和疫苗的质量控制、研制奠定了基础。 相似文献
10.
雷殿良 《国际生物制品学杂志》1997,(5)
作者采用联合毒素结合抑制(ToBI)试验在越南现场试验中测定儿童接种DTP后血清中抗破伤风及白喉毒素的抗体滴度.ToBI是将指尖血采于两张1×1.5cm的滤纸上,纸片吸收50μl血液(约25μl血清)后,室温干燥封闭于塑料袋中.检测前,纸片用250μl磷酸盐缓冲液浸泡1小时以获得1:10稀释的血清样本,然后进行ToBI试验.作者用指尖采血法和静脉采血法同时收集49名志愿者的血清样本.并对血清中的抗破伤风和白喉抗体滴度进行测定比较.结果表明,两种采血法所得结果高度相关,表明两种采血法对血清抗体的测定没有影响.此外,作者还用此法对儿童接种DTP后的血清抗体进行测定,两组各30名儿童分别接种两种DTP,分别于每次接种前及3针接种后1个 相似文献