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目的 通过结核分支杆菌Ag85B蛋白编码基因在大肠杆菌中稳定表达,以获得大量纯化的Ag85B蛋白。方法 采用DNA重组技术构建结核分支杆菌Ag85B基因的表达载体,双酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定重组子,阳性重组子转化大肠杆菌,并诱导表达外源蛋白。十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中的表达,对染色的凝胶扫描,以测定目的蛋白表达水平。结果 菌体蛋白经SDSPAGE,含阳性重组质粒的菌体蛋白中出现一条新蛋白带,表达量占菌体总蛋白的33%~38%。Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中表达方式主要是包涵体形式。结论 构建的大肠杆菌重组体能高效表达结核分支杆菌Ag85B蛋白抗原。 相似文献
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[目的] 克隆并构建编码结核分枝杆菌MPT64分泌蛋白的重组表达质粒。[方法] 采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出MPT64基因(687bp),并克隆到T载体,然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pGEX-4T-2连接,转化大肠杆菌E.coil DH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。[结果] 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致,证实符合表达框架。[结论] 成功地克隆并构建了MPT64基因的重组表达质粒pGEX-MPT64。 相似文献
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目的 克隆并构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因 (978bp) ,并克隆到T载体 ,然后用双内切酶消化后 ,与同样酶消化的pGEX 4T 2连接 ,转入大肠杆菌E .coliDH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符 ,测序结果与文献报道一致 ,证实符合表达框架。结论 成功地克隆并构建了Ag85B基因的重组表达质粒 pGEX Ag85BV。 相似文献
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结核分枝杆菌Ag85B基因克隆及表达质粒构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 克隆并构建编码结棱分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒。方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法从结棱分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B基因(978bp),并克隆到T栽体,然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pGEX-4T-2连接,转入大肠杆菌E.coli DH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致,证实符合表达框架。结论成功地克隆并构建了Ag85B基因的重组表达质粒pGEX-Ag85BV。 相似文献
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