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鼠疫耶尔森氏菌荧光标记扩增片段长度多态性分型方法 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 建立荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)技术平台,探讨鼠疫菌基因分型。方法 用5种核酸限制性内切酶消化鼠疫菌基因组DNA,选择最佳内切酶组合,酶切片段经接头连接后,用荧光素标记的5条EcoRⅠ引物和9条MseⅠ引物组成的引物配对扩增,选择最佳引物组合,进行系列PCR条件的优化。扩增产物经ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(遗传分析仪)检测,GeneScan等软件进行分析。结果 成功建立FAFLP技术平台。结论 FAFLP具有快速、简便、廉价、分辨率高、重复性好和污染少的优点,可用于鼠疫菌的基因分型分析。 相似文献
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[目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法.[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌.[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增.[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法. 相似文献
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目的探讨应用单克隆抗体修饰玻璃表面制备蛋白质芯片的方法.方法用不同浓度的抗6X His单克隆抗体修饰玻璃表面,从蛋白质固定效率和固定蛋白质的反应活性两个方面,对修饰效果进行评价.结果初步观察到单克隆抗体修饰玻片对蛋白质的固定量较醛基化修饰的玻片没有明显增加,但其固定蛋白质中有反应活性的蛋白质的比例较高.结论单克隆抗体修饰的玻片也适合于制备蛋白质芯片. 相似文献
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目的 建立分析鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性的简便方法. 方法 采用DNAstarProtean和EMBOSS网络分析平台综合预测鼠疫耶尔森菌外膜蛋白YopE、YopH、YopT、YopJ、YopM的免疫原性,并通过蛋白质芯片技术对上述外膜蛋白的免疫原性进行验证. 结果 计算机综合预测分析显示外膜蛋白YopE抗原... 相似文献
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目的了解医院医务人员洗手方式和频率以及手消毒效果。方法采用问卷调查的方法对该医院医务人员手卫生方法及其消毒效果进行了调查。结果该医院门诊医务人员工作之前洗手执行率为47%,病房医务人员洗手执行率为46%,门诊和病房医务人员工作后洗手执行率均达到98%。有90%医务人员采用肥皂洗手和洗手液洗手,只有10%医务人员仅用流水洗手。用肥皂和洗手液洗手除菌率可达到90%以上,仅用流水洗手除菌率只有65%。结论该医院医务人员工作之前洗手执行率较低,仅用流水洗手除菌效果较差,该医院需要规范洗手方法和手卫生质量监测。 相似文献
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目的了解布病重点地区重点人群布鲁氏菌病(简称布病)的知晓率,实施并评价健康教育在提高知晓率和预防布病中的作用,为防控布病提供科学依据。方法选取张家口市怀安县5个村,对布病重点人群进行知晓率和发病率的基线调查,开展布病健康教育,然后对知晓率和行为形成的改变进行评价。结果基线调查重点人群545人,知晓率为58.5%,行为形成率为31.8%;共检查高危人群血清504份,阳性率为3.37%。新发病例检出率为1.42%。健康宣传与行为干预后知晓率和行为形成率分别为82.3%和64.1%,分别提高了23.8%(P〈0.01)和32.3%(P〈0.01)。干预后1年内,在干预地区未检测到新发病例。结论在布病重点人群中开展健康教育及行为干预能够起到提高知晓率和促进行为形成的效果。 相似文献
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副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法.方法 根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法.结果 以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒.利用阳性质粒建立了定量PCR方法,得到标准曲线y=-4.9197x+58.72,决定系数(R2)为0.9864.此方法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性.对粪便和食物模拟标本进行检测,敏感性均为102cfu/μl.此方法重复性较好,对4种浓度(105、104、103、102cfu/μl)的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct值的变异系数<2%.结论 建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检测食品和粪便中的沙门菌. 相似文献
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目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中进行检索。结果:共鉴定到67个蛋白点,主要外膜蛋白为Omp25和Omp31,其他外膜蛋白如Imp、Frp、GroEL等,功能涉及物质运输、能量代谢、应激等。结论:对主要外膜蛋白Omp25和Omp31的识别与分析不仅有助于对布鲁氏菌致病机制的研究,而且为布鲁氏菌病的疫苗研制提供靶标蛋白。 相似文献