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在PCR反应中,TaqDNA聚合酶是最关键的因素之一。临床使用中发现Taq酶必须和反应体系分开低温保存,否则很快失活;因此不利于运输和长期保存.如何解决以上问题,保证Taq酶的活性,一直是国内外学者关注的问题。我们根据参考文献[1,2]试验了多种方法来很高Taq酶的稳定性,结果均不理想。后来采用固体石蜡包理TaqDNA聚会酶,经过半年多的实验,结果表明以上问题均能获得满意的解决.1原理反应液按每人份的量分装于待扩增的反应管内,液化的石蜡和Taq酶按比例混合后滴加于分装管内;室温下石蜡迅速固化,固体状态下酶的活性极低,不易… 相似文献
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聚合酶链反应检测SEN病毒D亚型方法的建立 总被引:6,自引:2,他引:6
目的:研究建立SEN病毒D亚型(SENV-D)聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法:选择SENV-D开放读码框1高度保守序列,设计合成2对特异性引物,建立检测SENV-D感染的套式PCR方法。对327例无偿献血和职业献血者进行SENV感染的检测,并对部分PCR阳性产物进行克隆测序,结果:该方法特异性和灵敏度均较高,检测结果显示无偿献血人群SENV-D感染率为5.5%,职业献血人群为6.7%,两者无统计学差异,结论:我国广东部分地区无偿献血和职业献血人群中存在SENV-D亚型感染;建立的该方法适用于SENV感染的检测。 相似文献
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目的:了解国内献血人群中一种新的比血传播病毒(SENV)感染的流行状况,方法:以SENV ORF1区核苷酸序列设计引物建立套式聚合酶链反应(nPCR)方法。采用多重PCR法对596份严自3个不同地区无偿和/或有偿献血标本进行SENV DNA(D和H亚型)检测,并对PCR阳性产物进行克隆后测序分析。结果:在体检合格的献血中,SENVDNA检出率为13.5%-21.0%在抗-HCV,HBsAg,抗-HIV,梅毒抗体阳性和ALT异常升高的献血中,SENV DNA检出率分别为35.0%、14.0%,60.0%、28.6%和31.3%,献血中SENV-D亚型等高于SENV-H亚型,不同地域献血SENV DNA检出率的差异无显性(P>0.05),体检不合格献血(抗-HIV或抗-HCV阳性的SENV-D感染率显高于正常献血人群(P<0.05);6份严自不同个体和不同地域之间的SENV分离株部分基因组核苷酸的变异最高达11.9%,与标准标(AX025838)相比变异高达13.2%,结论:在国内献血人群中存在SENV感染。 相似文献
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阴道加德纳菌致病株的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
应用聚合酶链反应(PCR)法检测阴道加德纳菌(G.Vag)致病株,探讨其临床诊断价值。在ITS-23srRNA基因上设计一对特异性引物P1/P2,建立PCR反应体系,特异地扩增G.Vag致病株。结果G.Vag扩增片段433bp,141例有临床症状者检出36例阳性,阳性率255%,129例无症状对照组检出6例阳性,阳性率46%,两者比较差异有显著性。该PCR反应体系特异地检测G.Vag致病株,为临床诊断及其致病性的研究提供了新的检测方法 相似文献
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聚合酶链反应检测霍乱弧菌 总被引:7,自引:0,他引:7
为快速,准确地检测霍乱弧菌,控制霍乱流行,研究建立了一种聚合酶链反应(PCR)检测方法,根据霍乱弧菌肠毒素CT基因序列,自行设计一对特异引物,扩增片断为296bp,同时采用一种高效率,快速,简便的方法提取并纯化DNA,该法能成功地检测各种样品中的产CT肠毒素O1群霍乱弧菌,应用PCR技术和常规分离培养方法对909份腹泻患者粪例标本和18份环境水样标本进行平行检测。结果表明,两种方法的检测结果一致。 相似文献
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陈汝光 《现代检验医学杂志》1993,(4)
沿用了一个多世纪的伤寒诊断方法肥达氏试验,因敏感度不高、费时间,不能早期诊断,给伤寒的防治造成很大困难。自1991年10月以来我们使用了伤寒、副伤寒快速血凝诊断方法(LPS—PHA),该法特异性较强、灵敏度较高,简单快速,为伤寒、副伤寒早期诊断提供了可靠的依据。现报道如下: 相似文献