流感病毒介导的抗肿瘤研究进展

随着反向遗传技术的不断完善,流感病毒的改造和利用成为可能.流感病毒具有强传染性,将其改造成携带外源基因的流感病毒载体,有利于转染到目的细胞,特别是肿瘤细胞,为肿瘤基因治疗提供新的手段.同时,由于流感病毒对肿瘤细胞具有凋亡作用,有望将其开发成为肿瘤疫苗及具有基因递送作用的病毒载体用于肿瘤基因治疗.本文就流感病毒的溶瘤作用,流感病毒载体的抗肿瘤及其肿瘤靶向性这几方面的研究做一综述.     

甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.     

人感染禽流感病毒的传播

禽流感病毒属于A型流感病毒,其感染导致的传染病一般只在禽类间传播,然而1997年以来,存在于家禽中的一些禽流感病毒已经突破了动物种间屏障,能够直接从禽类传播给人类,导致亚洲及全球范围内很多感染病例的死亡,存在潜在大流行的威胁。此文对1997年以来禽流感病毒感染人类的状况进行分析,为今后新型禽流感暴发的预防和控制提供参考。     

杜仲补天素片对雄性动物促生育作用的研究

目的对杜仲补天素片药效进行二次开发,新增其治疗男性不育症的功效,为其临床用于治疗男性不育症提供实验基础。方法将雄性小鼠随机分为杜仲补天素片高、中、低剂量(0.72、0.36、0.18 g/kg)组,对照组,阳性药生精胶囊组,观察各组雄性小鼠免疫器官及性腺器官脏器指数、抗疲劳作用、生育力作用。将雄性SD大鼠随机分为杜仲补天素片高、中、低剂量(0.504、0.252、0.126 g/kg)组、对照组,模型组,阳性药生精胶囊组,观察各组雄性大鼠脏器指数、睾丸病理结构的变化,测定各组雄性大鼠血清性激素水平及血清氧化反应指标以及生育力;进行HE染色,观察各组雄性大鼠的睾丸形态学结构。结果杜仲补天素片通过提高幼龄雄性小鼠免疫功能和性腺器官脏器指数,延长游泳存活时间,具有抗疲劳作用,从而促使雌性小鼠受孕率上升。通过增加模型大鼠的体质量,提高性器官及肾脏指数,增加血清性激素促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)的量,降低血清丙二醛(MDA)量,提高血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,产生抗氧化损伤作用并改善睾丸病理形态损伤,从而促使雌性大鼠受孕率及平均产仔数上升,发挥抗腺嘌呤致大鼠生精功能障碍作用。结论杜仲补天素片对雄性动物具有促生育、改善生育及逆转受损生殖能力的作用,为杜仲补天素片的临床应用提供实验基础。     

燕窝对再生障碍性贫血小鼠血常规及继发流感病毒感染的影响

目的 探讨食用燕窝对再生障碍性贫血(再障)继发流感病毒感染的保护作用.方法 食用燕窝的药理测定.体外实验采用血液凝集抑制试验和细胞感染中和试验,体内实验采用再障小鼠动物模型和病毒感染模型,观察燕窝酶解物对再障小鼠血常规的影响,判断食用燕窝的生物药效.结果 经胰蛋白酶水解后的燕窝酶解物N 1-Pan和N2-Pan的血凝抑制活性分别为4μg/mL和125 μg/mL,具有较强的抑制血凝的活性.N1-Pan对流感病毒有很强的抑制作用(IC50为40μg/mL).小鼠喂养实验发现,无病毒燕窝喂养组第20天血常规比第10天有明显改善(提升10％～20％),组内比较差异有统计学意义(确切概率法,P＜0.05);燕窝喂养的接种流感病毒再障小鼠较未喂养燕窝的再障小鼠外周血常规和体重有明显改善(确切概率法,P＜0.05),存活率也显著高于后者(4/8∶7/8,确切概率法,P＜0.05).结论 N1-Pan能明显改善再障小鼠的外周血常规和体重,提高流感病毒感染再障小鼠的存活率.     

纳米化蒙脱石衍生物对甲型流感病毒的吸附研究

目的 研究纳米化蒙脱石衍生物对甲型流感病毒的吸附作用,了解其能否阻止病毒侵入细胞.方法 将梯度稀释的纳米化蒙脱石衍生物PTK-RY00101001分别与PR8、Memphis 、Aichi 3种病毒结合后感染MDCK细胞,利用细胞感染免疫染色方法测定PTK-RY00101001对病毒感染细胞的作用,并通过测定MTT观察PTK-RY00101001对正常细胞的损伤影响.此外,将不同浓度PTK-RY00101001固定的纱布与流感病毒作用,对纱布和剩余病毒液分别进行免疫实验和细胞感染免疫实验,判定PTK-RY00101001对病毒的吸附作用.结果 PTK-RY00101001在25 μg/mL以下,对正常细胞几乎无损伤.细胞感染免疫染色试验显示,PTK-RY00101001对流感病毒感染细胞的能力有较强减弱作用.不同浓度PTK-RY00101001固定的纱布与病毒作用后,纱布染色结果显示无明显差异,通过剩余病毒液感染细胞免疫实验,1 000和200μg/mL浓度的FTK-RY00101001与纱布固定后,PTK-RY00101001对病毒有一定的吸附作用.结论 纳米化蒙脱石衍生物在不损伤正常细胞的浓度下,具有通过吸附甲型流感病毒,从而阻断病毒感染细胞的能力,因此推断其能通过吸附作用而阻止流感病毒入侵细胞.     

基于炎症标志物的Nomogram模型预测非小细胞肺癌患者术后生存率

目的 探讨建立基于炎症标志物的列线图模型用于预测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者在行根治性切除术后的预后价值。方法 回顾性分析2010年1月—2015年10月在浙江省台州医院行非小细胞肺癌根治术治疗的817例患者的临床资料,通过X-Tile软件确定外周血淋巴细胞与单核细胞比值(lymphocyte-to-monocyte ratio, LMR)以及中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-lymphocyte ratio, NLR)、血小板与淋巴细胞比值(platelet-lymphocyte ratio, PLR)、血小板分布宽度(platelet distribution width,PDW)和红细胞分布宽度(red blood cell distribution width, RDW)的最佳临界值。对影响患者预后的临床因素进行单因素和多因素Cox分析,建立炎症标志物的列线图模型预测非小细胞肺癌患者术后的总体生存率(OS)。结果 多因素Cox分析显示,较高的NLR和RDW、年龄、T分期、N分期、神经侵犯是NSCLC患者OS...     

流感病毒M1单克隆抗体的制备及其生物学特征

目的 制备针对流感病毒基质蛋白M1的单克隆抗体(mAb),为研究流感病毒检测试剂盒提供实验材料.方法 以纯化的M1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗M1 mAb的杂交瘤细胞,注射小鼠腹腔获得M1 mAb,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记M1 mAb.通过Western印迹法、ELISA、细胞感染免疫染色实验检测所获M1 mAb的作用和特性.结果 获得能稳定分泌抗流感病毒基质蛋白M1的杂交瘤细胞系,纯化腹水得到M1 mAb和HRP-M1 mAb.Western印迹法结果显示,M1 mAb和HRP-M1 mAb能与M1抗原及H1N1、H3N2亚型流感病毒的M1蛋白反应,是针对M1蛋白的mAb;利用ELISA方法研究M1 mAb和HRP-M1 mAb对M1抗原及流感病毒的检测作用,结果显示它们能检测H1N1和H3N2亚型的甲型流感病毒,而HRP-M1 mAb的检测能力比M1 mAb强;细胞免疫染色实验显示,M1 mAb能结合H1N1和H3N2亚型病毒感染的细胞.结论 针对M1蛋白的M1 mAb和HRP-M1 mAb已制备成功.它们能检测H1N1和H3N2亚型甲型流感病毒,有望应用于流感病毒诊断以及鉴别诊断试剂盒的研发.     

红细胞分布宽度与自身免疫性肝炎严重程度的相关性分析

目的探讨红细胞分布宽度(RDW)与自身免疫性肝炎(AIH)严重程度的关系。方法选择浙江省台州医院2011年1月至2015年11月61例AIH患者,检测其RDW,随访AIH患者复发情况并进行生存分析。结果 AIH患者RDW水平(14.10±1.51)%高于健康人对照组(12.90±0.72)%,差异有统计学意义(P<0.01),也高于相关疾病对照组(13.56±1.23)%,差异有统计学意义(P=0.027)。AIH患者进行Child-pugh分级,B、C级组共25例,RDW水平为(15.07±1.69)%,高于A级组36例(13.44±0.98)%,差异有统计学意义(P<0.01)。随访25例,缓解组13例,RDW水平(13.57±0.97)%,复发组12例,RDW水平(15.48±1.43)%,P=0.01。用Kaplan-meier法,RDW>15%有10例,缓解时间是(510±120)d,RDW≤15%为15例,缓解时间是(1 483±243)d,P=0.019。COX回归分析表明RDW是AIH患者复发的危险因素,HR=3.938,95%CI为1.166～13.296。结论RDW可用于评估AIH患者疾病严重程度。     

血小板计数/总胆红素与类风湿性关节炎疾病活动度的相关性

目的 分析血小板计数/总胆红素与类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）疾病活动度的相关性。方法 收集222例2016年1月—2020年12月在本院确诊为RA患者的临床资料,收集222例同期骨关节炎（osteoarthritis,OA）患者及222例对照组,回顾性分析血小板计数/总胆红素与RA疾病活动度的相关性。结果 RA患者血小板计数/总胆红素水平显著高于OA患者及对照组（P<0.001）。高疾病活动度组血小板计数/总胆红素显著高于低疾病活动组及中疾病活动组（P<0.001）。高血小板计数/总胆红素组具有更高DAS28评分（OR=1.808,P<0.001）、C-反应蛋白（OR=1.028,P<0.001）及血沉水平（OR=1.035,P<0.001）。相关性分析结果显示,血小板计数/总胆红素与DAS28评分、C-反应蛋白及血沉均呈正相关（r值分别为0.351、0.300、0.463,P<0.01）。结论 RA患者中血小板计数/总胆红素水平高于OA患者及对照组,血小板计数/总胆红素与RA疾病活动度呈正相关。