miR-221/222在肝癌细胞抵抗内质网应激凋亡中的作用

目的 研究内质网应激对miR-221/222的调控及其在肝癌细胞抵抗内质网应激诱导细胞凋亡中作用.方法 采用miR-221/222抑制物和miR-221/222类似物分别阻断或模拟内源性miR221/222的功能,并利用Western blot和流式细胞技术分析内质网应激条件下miR-221/222对肝癌细胞周期和凋亡的调控作用.结果 内质网应激诱导miR-221/222表达下调,miR-221/222类似物和抑制物分别抑制和促进内质网应激诱导的p27Kip1表达上调,干扰p27Kip1不仅抑制了内质网应激诱导的肝癌细胞G0/G1期阻滞,也促进了内质网应激介导的肝癌细胞凋亡.结论 内质网应激诱导miR-221/222下调能够通过促进p27Kipl表达对内质网应激条件下肝癌细胞周期和凋亡起重要调控作用.

Abstract：

Objective To investigate the role of miR-221/222 in inhibiting endoplasmic reticulum stress-induced human hepatocarcinoma cells apoptosis. Method miR-221/222 mimics and inhibitors were used to mimic or block the function of endogenous miR-221/222 respectively. Western blot and flow cytometry were used to test the effects of miR-221/222 on cell cycle and apoptosis under endoplasmic reticulum stress in human hepatocellular carcinoma cells. Results Endoplasmic reticulum stress resulted in miR-221/222down-regulation in human hepatocellular carcinoma cells. miR-221/222 mimics and inhibitors inhibited and promoted respectively endoplasmic reticulum stress-mediated p27Kip1 induction. Moreover, p27Kip1 suppression not only resulted in reduction in the fraction of G1 phase cells, but also promoted the endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells. Conclusions miR-221/222 were downregulated by endoplasmic reticulum stress in human hepatocellular carcinoma cells, which subsequently protected human hepatocellular carcinoma cells against endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis through p27KiP1 regulation.     

多元化考核体系在医学生物化学教学改革中的实践初探

改革五年制临床医学生物化学考试内容、形式以及评价体系,以"形成性考试+实验考核+终结性考试"的多元化考核方式代替现有的传统的"一张试卷、一次考试定成绩"的考试制度,从知识掌握、自觉学习、技能培训、团队协作等多方面提高学生的综合学习能力。以此建立并完善相应的评价体系,为适应以"胜任能力"培养为核心目标的第三代临床医学生培养目标的改革,为推动高等学校本科教学质量与教学改革工程提供一个较好的借鉴。     

转铁蛋白对Cu2+,Fe2+介导的LDL氧化修饰的影响研究

目的 :观察转铁蛋白 (transferrin ,Tf)对Cu2 + 、Fe2 + 介导的体外人血浆低密度脂蛋白 (LDL)氧化修饰的影响。方法 :采用一次性密度梯度超离心法分离正常人血浆LDL并与CuSO4 及FeSO4 在 37℃温育不同时间 ,使LDL在体外氧化修饰。抗氧化组在温育前加入不同浓度的Tf。检测各组LDL中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA) ,维生素E(VitE)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :①LDL与Cu2 + 或Fe2 + 温育后 ,MDA含量显著升高 (P <0 .0 0 1) ,并呈明显的时间效应。②在Cu2 + 或Fe2 + 修饰前加入不同浓度 (10 0、2 0 0、4 0 0 μg ml)的Tf能使LDL中MDA生成明显减少 ,VitE含量下降明显减缓 ,并显著提高SOD活性 ,呈现一定的浓度依赖性。当Tf浓度为 4 0 0 μg ml时 ,MDA生成抑制率分别为 71.6 5 % ,79.86 % ;SOD活性提高率分别为 14 1.5 5 % ,14 6 .6 9% ;VitE降低减缓率分别为 6 9.5 2 % ,85 .10 %。结论 :Tf对Cu2 + 或Fe2 + 介导的LDL氧化修饰具有明显的抑制作用 ,因而可能参与机体对AS的防治。其作用途径可能与阻断Cu2 + 或Fe2 + 诱导的自由基生成 ,保护内源性抗氧化物质SOD、VitE的活性有关     

神经元的凋亡在癫痫的发生和发展中的作用

癫痫 (Ｅｐｉｌｏｐｓｙ ,ＥＰ)是神经系统常见的一种慢性临床综合征 ,发作时具有多种行为或运动方面的表现 ,其共同特征是反复突然发生的一种脑神经元的高度同步放电所导致的暂时性脑功能失调。因此 ,癫痫是一种以反复的分散的发作为特征的疾病 ,往往是原因不明的突然发作。国内发病率为0 .45‰～ 4.4‰ ,国外为 1.5‰～ 15‰ ,一般为 4～ 6‰[1 ] 。现在用分子生物学到心理学检查的方法研究癫痫 ,发现人类癫痫具有某种遗传性 ,包括家族性新生儿惊厥的致病基因被定位在染色体 2 0ｑ上 ;青少年肌阵挛癫痫等全身性癫痫的致病基因被定位在染色…     

内源性一氧化氮的研究进展

结构简单、高毒性的小分子化合物一氧化氮(nitric ox-ide)作为重要的细胞信使和效应分子,并介导调节多种生理功能。在心血管系统,神经系统等起着重要作用。一氧化氮的合成过多或不足或一氧化氮合酶(nitric oxide synthetase,NOS)异常与许多疾病的发生机制有关。本文就内源性一氧化氮的多种功能及与某些疾病的关系进行综述。     

急性缺血再灌注肾损伤过程中Mg2+及K+协同胰岛素的对抗效应

目的:在肾移植术后可能发生急性缺血再灌注性肾损伤.作者前期实验表明在肾缺血再灌注期间注射胰岛素可减轻缺血再灌注肾损伤,在此基础上,在胰岛素溶液中加入天冬氨酸钾镁,观察Mg2 ,K 协同胰岛素对家兔急性肾缺血再灌注损伤的影响,并分析其可能机制.方法:实验于2002-02/04在泸州医学院生理实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验材料及方法:选用健康成年日本大耳白兔27只,按随机数字表法分为3组(n=9),即缺血再灌注组、缺血再灌注胰岛素处理组及对照组,前两组采用钳夹肾动脉法建立急性肾缺血再灌注肾损伤模型,缺血再灌注胰岛素处理组再灌注的同时给予胰岛素溶液,含胰岛素3 U/kg,葡萄糖1.5 g/kg,K 4 mg/kg,Mg2 1.7 mg/kg.②实验评估:分别观察3组动物缺血再灌注2 h,48 h后,血清尿素氮、血糖、血清及肾组织中丙二醛含量以及肾组织超微结构变化.结果:23只动物进入结果分析.①肾缺血再灌注48 h后,缺血再灌注组血清尿素氮含量显著高于对照组(P＜0.01),缺血再灌注胰岛素处理组与对照组差异无显著性意义(P＞0.05).②缺血再灌注组血清及肾组织中丙二醛含量显著高于对照组(P＜0.05),缺血再灌注胰岛素处理组丙二醛含量显著低于缺血再灌注组(P＜0.05).③缺血再灌注2 h后,3组动物血糖均较术前增高,但以缺血再灌注组增高更为显著,与对照组比较差异具有显著性意义(P＜0.05),缺血再灌注胰岛素处理组与对照组差异无显著性意义(P＞0.05).④对照组肾组织超微结构正常,缺血再灌注组肾组织呈变性和坏死改变,缺血再灌注胰岛素处理组肾组织轻度变性.结论:Mg2 ,K 可协同胰岛素减轻家兔急性缺血再灌注性肾损伤,其作用途径可能和降低血糖、抗自由基损伤、改善能量代谢、减轻钙超载、防止低血钾等因素有关.     

乙醛刺激大鼠肝星状细胞活化的动力学分析

目的:从动力学角度分析乙醛刺激大鼠肝星状细胞活化的时间变化,以确定大鼠肝星状细胞活化的最佳时间,从而为后续肝纤维化的相关研究提供实验数据。方法:培养大鼠肝星状细胞,同步化处理12h,随机分为乙醛刺激组和对照组。其中乙醛刺激组细胞加入乙醛(终浓度200μmol/L)分别刺激12h、24h和36h,每12h补加一次乙醛;对照组加入等量培养基。采用MTT法测定各组细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维黏连素;Western blotting检测α-SMA的表达。结果:加入乙醛后,细胞的增殖活性随时间的延长而增强,24h细胞增殖活性达最高峰;ELISA测定结果显示,乙醛刺激组较对照组有明显上调;Western blotting检测结果,乙醛刺激组明显促进α-SMA表达量上调,且在24h达高峰。结论:乙醛可激活大鼠肝星状细胞且活化的最佳作用时间为24h。     

转录因子ZEB1与乙醛刺激后大鼠肝星状细胞增殖的关系分析

目的:探讨转录因子ZEB1与乙醛刺激后大鼠肝星状细胞增殖的关系.方法:培养大鼠肝星状细胞并将其随机分为实验组(乙醛终浓度200μmol/L)和对照组(加入等量培养基),分别培养6h,12h,24h.利用MTT法检测各时间点的各组细胞增殖情况;ELISA试剂盒检测各组细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白含量变化;Western blotting检测细胞提取蛋白包括ZEB1、α-SMA的表达情况.结果:乙醛刺激大鼠肝星状细胞后,细胞增殖明显;Ⅰ型胶原蛋白、ZEB1及α-SMA等蛋白的表达上调,且细胞增殖程度与Ⅰ型胶原蛋白、ZEB1及α-SMA等蛋白的表达上调呈正相关.结论:乙醛刺激大鼠肝星状细胞后ZEB1通过参与大鼠肝星状细胞EMT过程,从而使细胞增殖,EMT与酒精性肝纤维化的发生发展有一定的关系.     

miR-26a mimics转染人肝癌细胞株HepG2的表达蛋白质组分析

目的: 通过分析microRNA-26a(miR-26a)mimics转染对人肝癌细胞株HepG2 表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性。方法: 常规培养人肝癌细胞株HepG2,经miR-26a mimics转染48 h后进行细胞周期分析,并裂解转染72 h的HepG2细胞提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定。结果: HepG2细胞经miR-26a mimics转染后细胞增殖受到抑制;其蛋白2-DE图谱与对照组比较,差异表达超过2倍的蛋白斑点有11个。其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有8个蛋白斑点为表达下调。质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C 氧化酶5a、细胞周期蛋白E2、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白。 结论: miR-26a可能通过影响上述蛋白分子的表达,直接或间接地调控HepG2肝癌细胞的增殖、分化和死亡,以发挥其抗癌作用。     

金双歧对创伤后大鼠肠道功能的影响

目的:探讨金双歧对创伤后大鼠肠道功能的影响.方法:将30只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(Control)、肠内免疫营养组(EIN)和金双歧组(EEN).通过胃造瘘术建立大鼠创伤模型,分别给予不同成分的肠内营养7 d,观察各组大鼠小肠黏膜形态,免疫组织化学染色SP法检测3组小肠黏膜中IgA+、CD4+、CD8+细胞的数量,并采用秩和检验方法分析其差异性.结果:肠内免疫营养组和金双歧组术后恢复良好(P<0.05);金双歧组的腹泻累计次数低于对照组、肠内免疫营养组(P<0.05);小肠绒毛高度、肠腺隐窝深度、黏膜厚度、绒毛表面积等测量值显示:各肠内营养组均优于对照组(P<0.05,P<0.01),各肠内营养组之间差异无显著性(P>0.05);对照组大鼠小肠黏膜IgA+、CD4+、CD8+细胞计数明显低于肠内免疫营养组和金双歧组(P<0.05,P<0.01).结论:应用肠内营养,特别是金双歧能使创伤后Wistar大鼠更好地恢复.