Nurr-1对小胶质细胞微环境的影响

目的:探讨Nurr-1基因对小胶质细胞活化状态及其微环境的影响。方法:分离培养新生SD大鼠小胶质细胞,纯化、鉴定并分别用脂多糖(LPS)刺激活化和过表达Nurr1基因。实验随机分为小胶质细胞组、Nurr1过表达组、LPS处理组、Nurr1过表达+LPS处理组。ELISA分析过表达Nurr1基因对不同状态小胶质细胞分泌TNF-α、IL-1等炎症相关因子和BDNF、GDNF和PDNF等神经营养因子的影响。结果:(1)小胶质细胞混合培养、纯化、CD11b/c免疫细胞化学鉴定为阳性,纯度在95%;(2)Nurr1基因过表达小胶质细胞转染阳性率90%;(3)ELISA法检测结果显示:过表达Nurr1基因的小胶质细胞显著降低了TNF-α、IL-1的分泌,并促使了BDNF、GDNF和PDNF等神经营养因子的分泌。结论:Nurr1基因可抑制小胶质细胞的活化和减少炎症相关因子的产生,同时可促进GDNF、BDNF、PDNF等与DA能神经元存活和成熟等相关的神经营养因子的分泌。     

瑞安市26734例孕中期产前筛查分析

目的:对我院门诊26 734例孕中期产前筛查各年龄段高风险率分布情况进行分析,确定最佳怀孕年龄,降低出生缺陷发生率。方法:应用时间分辨荧光免疫法对孕15～20周孕妇血清甲胎蛋白(AFP)和游离绒毛膜促腺激素(F-βhCG)进行检测。结果:筛查高风险孕妇1 262例,阳性率为4.7%。在不同年龄段的高风险分组中,≥35岁孕妇跟<35岁孕妇两组作统计比较,风险率差异有统计学意义(P<0.01),21-三体综合征(Ds)风险率在21～25岁最低且有统计学意义(P<0.01),18-三体综合征(Es)在18～30岁风险率无明显差异(P>0.05),神经管畸形(NTDs)在各年龄段均无显著差异(P>0.05)。结论:最佳怀孕年龄在21～25岁,大于30岁孕妇Ds、Es风险率显著升高,但NTDs风险率与年龄无关。     

GFP-Nurr1基因修饰神经干细胞的建立及过表达Nurr1对神经干细胞向多巴胺神经元分化的影响

目的利用慢病毒载体建立GFP-Nurr1基因修饰的原代神经干细胞(NSCs)模型并观察Nurr1过表达后NSCs向多巴胺神经元的分化影响。方法利用基因重组构建pLenO-DCE-Nurr1慢病毒载体,用慢病毒转染第三代NSCs,转染72 h后荧光检测转染效果;设置空白对照组、空载体组及DCE-Nurr1组,分别用Western blot及PCR检测Nurr1的表达差异;并将转染后的NSCs分化培养7 d后分别用免疫细胞化学检测、Western blot及PCR检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果慢病毒转染NSCs 72 h后,转染率可达90%,与对照组相比DCE-Nurr1组高表达Nurr1。经慢病毒载体感染后的NSCs仍具备分化潜能,分化培养后发现DCE-Nurr1组分化的神经细胞中TH阳性细胞分化率90.60%,对照组为21.2%。结论慢病毒载体可高效转染NSCs过表达Nurr1;Nurr1基因过表达可以促进中脑腹侧来源NSCs向TH阳性多巴胺能神经元方向分化。     

一种原代小胶质细胞培养与纯化方法的改良

目的建立一种简易高效的新生大鼠小胶质细胞的原代培养和纯化方法,提高小胶质细胞的产量以及纯度。方法在传统Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上通过改良操作,混合培养小胶质细胞,并分别采用手拍法、摇床法以及温和胰酶消化法,纯化小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化细胞。荧光显微镜下标记小胶质细胞的特异性标记物Iba1、CD11b/c进行鉴定。结果 (1)分离培养第1天小胶质细胞呈不规则圆形,折光不均匀,继续培养3~5 d,小胶质细胞逐渐出现单极或多极突起,7 d时部分细胞转为静止状态,呈分枝状;(2)纯化后小胶质细胞多呈静息状态,细胞免疫荧光CD11b/c、Iba1双阳性;(3)不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示:手拍法纯化小胶质细胞,细胞阳性率(96%)明显高于胰酶消化法(90%,P0.05),前者细胞产量明显高于摇床法(P0.05)。结论通过改良传统Miriam Mecha的混合小胶质细胞的培养和纯化方法,可以提高小胶质细胞产量以及纯度。     

胎膜早破待产妇下生殖道支原体和衣原体感染及支原体耐药性分析

目的了解瑞安市胎膜早破患者生殖道的支原体、衣原体的感染状况及支原体的耐药状况。方法对626例胎膜早破晚孕患者的宫颈分泌物进行支原体培养及药敏和衣原体快速检测。结果626例胎膜早破病例中，支原体培养阳性为516例，总感染率为82．4％；其中单独解脲支原体（Uu）阳性348例（55．6％），对交沙霉素、米诺环素、强力霉素、阿奇霉素、红霉素、罗红霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、林可霉素耐药率分别为1.1％、6．3％、6．6％、10．6％、14.7％、17．8％、27．3％、63．1％、94．6％；Uu与人型支原体（Mh）混合感染158例（25.2%），对上述药物耐药率分别为4．4％、8．6％、9．2％、90．0％、94．8％、95．6％、42．5%、69，9％、95．1％；单独Mh感染10例（1．6％），对交沙霉素、强力霉素、米诺环素高敏感，耐药率均为0，对林可霉素耐药率为10．0％；衣原体阳性34例（5．43％）。结论胎膜早破患者中支原体的高检出率提示其与胎膜早破密切相关；支原体体外药敏试验对交沙霉素、米诺环素、强力霉素敏感率较高。     

Nurr1对小胶质细胞联合神经干细胞共培养促进神经干细胞向多巴胺神经元分化作用研究

目的探讨联合过表达核受体相关因子1(Nurr1)基因的小胶质细胞(MG)和神经干细胞(NSC)共培养对神经干细胞向多巴胺神经元分化的影响。方法原代培养SD大鼠神经干细胞和小胶质细胞,并过表达Nurr1基因。CCK-8法检测Nurr1过表达对神经干细胞以及小胶质细胞活率的影响。Transwell系统共培养神经干细胞和小胶质细胞,实验分为NSC组、NSC+MG组和N(NSC+MG)组。ELISA检测共培养后第3天、第6天和第9天各组脑源性神经营养因子(BDNF)、血小板源性神经营养因子(PDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达变化;RT-PCR和Western Blot检测各组第9天酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运蛋白(DAT)DAT和Nurr1的表达变化;细胞免疫荧光鉴定神经干细胞的分化,并对TH和DAT阳性细胞计数,计算各组神经干细胞向多巴胺神经元的分化效率。结果原代培养小胶质细胞以及神经干细胞并成功过表达Nurr1基因。CCK-8法检测结果表明,Nurr1过表达对神经干细胞以及小胶质细胞活率无明显影响。ELISA检测结果表明,N(NSC+MG)组在不同时间点神经营养因子(BDNF、PDNF和GDNF)表达量明显高于其他各组(P0.05)。RT-PCR和Westen Blot检测结果表明,N(NSC+MG)组TH、DAT和Nurr1的表达水平明显高于其他各组(P0.05)。细胞免疫荧光鉴定结果表明,N(NSC+MG)组TH阳性细胞率明显高于其他各组(P0.05)。结论Nurr1基因可促进神经干细胞和小胶质细胞共培养系统神经营养因子的分泌。过表达Nurr1基因的神经干细胞和小胶质细胞共培养可促进神经干细胞向多巴胺神经元的分化。     

Nurr1基因修饰胚胎中脑神经干细胞移植治疗帕金森病

  目的  探讨移植Nurr1基因修饰胚胎中脑神经干细胞对帕金森大鼠的治疗效果。  方法  （1） 建立SD大鼠帕金森病模型；（2）原代培养SD大鼠胚胎中脑神经干细胞，并于神经干细胞过表达Nurr1；（3）移植治疗分组:假手术组（A组），移植神经干细胞组（B组），移植Nurr1修饰神经干细胞组（C组）；（4）在移植后3周、6周、9周和12周分别对各组大鼠进行行为学测试，观察各组症状改善情况；（5）移植12周后，分别检测各组中Nurr1、TH蛋白表达情况和Nurr1荧光情况。  结果  （1）原代培养大鼠胚胎中脑神经干细胞，并于神经干细胞成功过表达Nurr1基因。（2）免疫荧光、Western Blot证实过表达Nurr1可以促进神经干细胞向多巴胺能神经元转化（P < 0.05）。（3）移植Nurr1修饰神经干细胞可以有效的改善帕金森大鼠的症状（P < 0.05），Western Blot证实小胶质细胞可显著促进移植后的神经干细胞在分化为多巴胺能神经元（P < 0.05）。（4）移植后Nurr1能促进神经干细胞向多巴胺能神经元转化，提高移植神经干细胞的存活，达到更好治疗效果。  结论  Nurr1基因可以促进神经干细胞向多巴胺能神经元转化；移植修饰Nurr1神经干细胞可以有效治疗帕金森大鼠。     

糖化血红蛋白在妊娠期糖尿病中的应用

目的探讨糖化血红蛋白(HbA_(lc))在妊娠期糖尿病(GDM)诊断中的应用。方法回顾性选取24~28周孕妇451例进行空腹血糖,75g葡萄糖糖耐量试验(OGTT)及糖化血红蛋白的测定,根据ADA诊断标准将其分为正常组248例,GDM组203例。采用独立样本的t检验统计学方法分析2组的空腹血糖,餐后1h血糖,餐后2h血糖及糖化血红蛋白数据的差异性。再绘制诊断ROC曲线,分析HbA_(lc)在GDM筛查诊断中的作用。结果正常组与GDM组糖化血红蛋白水平有明显差异具有统计学意义(P0.05);以HbA_(lc)值绘制诊断ROC曲线,曲线下面积(area under curve,AUC)为0.63,95%置信区间0.584~0.675,取糖化血红蛋白诊断切点为4.6%。结论 HbA_(lc)≥4.6%不适合GDM早期诊断的标准,但HbA_(lc)≥5.5%在GDM诊断的特异性上有一定的意义。     

瑞安地区妇女宫颈人乳头瘤病毒感染现状的调查

宫颈癌的病死率在妇女癌症死亡率中已占第二位,现有研究已经证实宫颈高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是引起子宫颈癌及癌前病变的必要条件,大多数HPV感染者能够自愈,少数感染者迁延不愈或者反复感染最终发展为宫颈癌,因此早发现、早治疗非常重要,就目前而言HPV感染的检测是宫颈癌筛查的必要措施,分析HPV基因亚型分布的影响因素,为宫颈癌的防治提供一定实验依据。报道如下。     

高考生肝功能异常与其他生化指标的关系

目的探讨高考生肝功能异常与其他各生化指标间的关系。方法对参加2014年和2015年瑞安市高考体检的学生空腹检测肘静脉血ALT,并进一步检测AST、SUA、TC、TG、LDL、HDL、FPG。结果 ALT异常占总体检人数的1.07%(139/12 950),ALT异常组男女比率为7.33∶1(88/12),高于对照组1.27∶1(84/66),差异有统计学意义(P0.01);单变量分析显示,ALT异常组BMI、SUA、AST、TG、TC、LDL水平与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01),2组间FPG、HDL水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。多因素Logistic回归分析显示,TG、LDL、BMI、SUA为ALT异常的危险因素,OR值分别为8.804 0、3.029 9、1.415 2、1.015 0。多元线性回归分析显示,ALT水平与SUA、TG、LDL、TC水平呈正相关,相较于LDL与TC、UA和TG的关联性更高。结论高考生SUA、TC、TG、LDL升高与ALT呈正相关。