A型H3579亚型流感多表位核酸疫苗小鼠实验免疫研究

目的为了应对流感流行多亚型并存的局面,进行了多表位核酸疫苗设计,并观察其免疫小鼠的细胞和体液免疫应答反应。方法设计并合成了含有H3、H9的HA和H5N1NA中和表位,M、NP基因保守序列CTL表位的多表位基因盒(Epi)。采用pVAX载体对H5HA、H7HA及Epi进行融合表达。经肌肉注射免疫6～8周龄雌性Balb/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中的针对H3579亚型流感抗体。三免后2周,分离脾淋巴细胞,进行T淋巴细胞转化试验和T淋巴细胞亚类数量检测。结果免疫小鼠获得了针对H3579亚型流感的体液和细胞免疫反应。结论完整HA抗原结合多表位的DNA疫苗模式的成功,预示了该DNA疫苗可能可以有效应对当前多种亚型流感并存的局面,并为其他种类流感疫苗的研究奠定了基础。     

H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究

目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗，并研究其在幼仓鼠肾细胞（BHK细胞）内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原（HA、NA、NP、M）表位基因，以生物信息学软件优化其排列结构，合成流感通用的复合多表位基因（Epi），以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架，将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒，定向克隆至pVAX1，构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞，提取细胞总RNA，以RT-PCR方法检测目的基因；以间接免疫荧光试验（IFA）初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因；IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-EpiH5HA，在真核细胞内均获了有效地转录和表达；而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合，证明了其具有一定的生物学活性和抗原性，有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。     

H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒构建

目的 构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株.方法 筛选流感病毒主要抗原(HA NA NP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7 HA融合表达基因为骨架,将多表位基因插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至鸡痘病毒表达载体pUTA-2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA.应用脂质体介导的转染法,将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压筛选挑斑纯化后传代,并对重组以鸡痘病毒进行PCR和IFA检测和Western blot分析.结果 成功构建了重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA,PCR、IFA和Western blot检测阳性.结论 筛选出稳定共表达H5H7HA基因和通用多表位基因的重组鸡痘病毒vUTA2-H7HA-Epi-H5HA株,该重组鸡痘病毒的构建为跨种通用型流感病毒活载体疫苗的研究奠定了物质基础.