转化生长因子β1的小干扰RNA对肝纤维化大鼠Smad蛋白表达的影响

目的 研究转化生长因子(TGF) β1的小干扰RNA (siRNA)对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响.方法 以前期研究的TGFβ1siRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象,分为正常组、模型组、TGF β 1 siRNA 0.125 mg/kg组、TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组和阴性对照组(0.25 mg/kg非特异性靶序列).用免疫组织化学和Western blot检测Smad2、3、4、7的蛋白表达;Real-time PCR法检测Smad2、3、4、7的mRNA表达.多组间数据比较用方差分析,两两比较采用q检验. 结果 免疫组织化学结果显示TGF-β1 siRNA 0.25mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad2/3、4的蛋白表达量较模型组、阴性对照组明显减少(F值分别为115.538,117.178,P＜ 0.01),TGFβ 1 siRNA 0.25 mg/kg组表达量较0.125 mg/kg组少(P＜0.05).TGFβ 1 siRNA 0.25 mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad7的蛋白表达量较模型组、阴性对照组增加(F=125.34,P＜ 0.01),TGFβ 1 siRNA 0.25mg/kg组表达量较0.125 mg/kg组多(P＜0.05).Western blot结果与之相似.Real-time PCR结果显示,与模型组和阴性对照组比较,TGFβ1 siRNA可以明显抑制Smad 2、3、4基因的表达,且TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组Smad2、3、4的mRNA表达量(相对表达量分别为2.870±0.705、2.904±0.414、2.667±0.466)较TGF β1siRNA 0.125 mg/kg组(相对表达量分别为5.998±0.329、5.827±0.781、5.102±0.102)明显减少(P＜0.05).TGFβ1 siRNA 0.25mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad7的mRNA表达量较模型组、阴性对照组增加(F=29.615,P＜0.01),TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组表达量较0.125mg/kg组多(P＜0.05).结论 TGFβ1 siRNA干扰大鼠TGFβ1表达后,Smad2、3、4表达量明显降低,而Smad7表达仍维持在较高水平,这利于肝纤维化的改善.     

肝再生增强因子,细胞色素P450与人肝癌细胞在体外耐药的关系

目的:研究肝癌顺铂耐药细胞HepG2/cDDP中人肝再生增强因子(Human augmenter of liver regeneration,hALR)对细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)表达的影响,观察ALR是否通过作用CYP450与肝癌细胞耐药的形成有关.方法:建立体外肝癌顺铂耐药细胞...     

呼吸重症监护室患者感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌和死亡危险因素分析

目的 探究呼吸重症监护室患者感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant klebsiella pneumoniae,CRKP）的感染和死亡危险因素。方法 选择某三甲医院2021年10月至2022年4月呼吸重症监护室住院患者93例,分为CRKP组43例和对照组50例,根据出院情况将CRKP组分为生存组12例和死亡组31例进一步分析。将对照研究中有意义的因素纳入Logistic回归模型进行多因素分析,探究CRKP感染危险因素和死亡危险因素。结果 性别、慢性肾脏疾病、中心静脉置管时间、机械通气时间、留置导尿管时间、谷丙转氨酶（alanine transaminase,ALT）、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和C反应蛋白（c-reactive protein,CRP）均与CRKP感染相关（P <0.05）;CRP、IL-6和脓毒血症与CRKP感染后死亡相关（P <0.05）。多因素分析结果显示,机械通气时间、ALT是CRKP感染的独立危险因素;脓毒血症是CRKP感染后死亡的独立危险因素。结论 CRKP感染患者死亡率较高;正确识别CRK...     

转化生长因子β1及基质金属蛋白酶抑制剂1、2siRNA真核表达载体的构建与鉴定

目的 用RNA干扰技术,分别以转化生长因子(TGF)β 1、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1和TIMP-2为靶基因,设计并构建针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,并在体外检测其对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)的TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因表达的抑制情况.方法 设计合成TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2的siRNA并与含绿色荧光蛋白的pGenesil-1载体连接,构建siRNA真核表达载体,并测序鉴定.体外转染HSC-T6细胞,观察转染效率,并用荧光定量PCR以及Western blot分析对目的 基因的抑制效率.组间比较用方差分析,两两比较用q检验.结果 成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体.体外成功转染HSC-T6细胞,转染后的细胞TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达分别下调63.4%±8.0%,64.5%±9.0%,55.0%±17.0%(F值分别为17.55、128.42、210.36,P值均＜0.01),TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2蛋白表达分别下降57.8%±3.0%,55.1%±5.0%,49.3%±1.0%(F值分别为130.75、159.09、35.72,P值均＜0.01).结论 成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体;将重组载体成功转染入体外培养的HSC-T6细胞,并显著抑制了目的 基因的表达;为进一步研究其在体抑制表达提供了实验工具.

Abstract：

Objective To construct the siRNA eukaryotic expression vectors targeting on TGF β1,TIMP-1 and TIMP-2 and to investigate the inhibitory efficiency of target genes expression on rat hepatic stellate cell in vitro. Methods The siRNA cDNA sequences ofTGF β 1, TIMP-1 and TIMP-2 were designed,synthesized and inserted into plasmid pGenesil-1 respectively to generate eukaryotic expression plasmids.The plasmids were transfected into HSC T6 cells in vitro and the inhibitory efficiency of target genes expression was observed with real-time PCR and Western blot. Results The eukaryotic expression vectors were constructed successfully. The expressions of TGF β1 mRNA, TIMP-1 mRNA and TIMP-2mRNA in siRNAtransfected groups were decreased by 63.4% ± 8.0%, 64.5% ± 9.0% and 55.0% ± 17.0% respectively and the expressions of TGF β1 protein, TIMP-1 protein and TIMP-2 protein were decreased by 57.8% ± 3.0%,55.1% ± 5.0%, 49.3% ± 1.0% respectively as compared to the control groups. Conclusions The siRNA eukaryotic expression vectors constructed targeting on TGF β1, TIMP-1 and TIMP-2 could reduce the expressions of target genes and they might be able to used for the exploration of new anti-fibrosis drugs genetically.     

基因敲除技术及其在肝病研究中的应用

基因敲除技术是研究基因功能的重要手段,是探讨基因在疾病中作用机制的一个非常有效的研究工具.近年来该技术在肝病研究领域得到普遍应用,尤其是条件性基因敲除技术及RNA干扰的出现,进一步深化了肝病的研究.此文介绍基因敲除的基本原理及其在肝病研究中的应用.     

方舱医院医务人员工作清单的构建

目的 ：构建方舱医院医务人员工作清单,为开展相关工作及质量控制提供理论指导及实践工具。方法 ：通过文献回顾,以马斯洛需求层次理论为理论框架,结合现场实践总结、小组讨论形成方舱医院医务人员工作清单初稿。采用德尔菲法对20名专家进行咨询,根据专家意见对工作清单进行修改完善。结果 ：两轮专家函询的专家积极系数均为100.0%,专家权威系数分别为0.920、0.930,协调系数分别为0.208、0.133(P<0.001)。方舱医院医务人员工作清单包括一级指标5项、二级指标30项。结论 ：本研究构建的方舱医院医务人员工作清单具有科学性、可靠性和实用性,为方舱医院医务人员安全有序地开展医疗工作提供有效的工具支持。     

血液灌流1次与2次治疗慢性肝炎高胆红素患者的疗效比较

目的:探讨利用血液灌流(Hemoperfusion,HP)1次和2次治疗慢性肝炎高胆红素患者的临床疗效.方法:采用回顾性分析方法,收集27例血液灌流1次和41例血液灌流2次的慢性肝炎高胆红素患者的临床资料,观察并对比分析组之间治疗前后肝功能、凝血酶原时间、生化等指标.结果:HP2组与HP1组对比分析得出,HP2组较HP1组患者胆红素和转氨酶有明显的降低(P＜0.05),但红细胞和血红蛋白也有显著降低(P＜0.05),其余各指标两组间无明显差异(P＞0.05);2组的血钾均有明显的升高.结论:2次HP更能有效吸附和降低慢性肝炎患者体内的胆红素和转氨酶,是治疗高胆红素血症患者的有效手段.