共轭亚油酸对小鼠乳腺脂肪合成相关基因表达的作用研究

目的研究共轭亚油酸(CLA)对小鼠乳腺脂肪合成相关基因表达的影响。方法选取32只泌乳昆明鼠,随机分为对照组(2%花生油);0.5%CLA组(0.5%CLA+1.5%花生油);1.0%CLA组(1%CLA+1%花生油);1.5%CLA组(1.5%CLA+0.5%花生油),每组8只小鼠,从泌乳第4日饲喂至第14日,每日检测母鼠采食量、体重和仔鼠窝重,分析乳成分,采用荧光定量PCR检测对照组和1.5%CLA组母鼠乳腺组织脂肪合成相关基因的表达。结果在饲喂期间各组母鼠体重没有差异,饲料添加1.5%CLA显著减少了母鼠的采食量、仔鼠窝重和乳脂肪含量(P<0.05)。与对照组相比,1.5%CLA组母鼠乳腺组织的脂蛋白脂酶(LPL)、乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)和脂肪酸合成酶(FASN)的基因表达显著降低(P<0.05),并且转录因子固醇调节元件结合蛋白(SREBF)和过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)的基因表达也显著下调(P<0.01)。结论饲料中加入1.5%CLA能够减少泌乳母鼠乳脂肪含量,抑制乳腺脂肪合成相关基因的表达。     

普通高等农业院校生物化学教学如何面对硕士研究生入学考试命题改革

继2007年教育部将心理学、教育学、历史学等科目纳入全国统考范围后,2008年又新增农学为全国统考科目.从2008年起.农学门类的初试科目为4门,即政治理论、外语、农学门类公共基础和农学学科基础综合,除了外语之外的其他3门课程实行联合命题.     

共轭亚油酸对泌乳鼠肝脏脂类代谢相关基因mRNA表达的影响

目的研究共轭亚油酸(CLA)对泌乳鼠肝脏脂类代谢相关基因mRNA表达的影响。方法选取16只泌乳昆明鼠,随机分为对照组(1.5%亚油酸)和CLA组(1.5%共轭亚油酸),每组8只,从泌乳D日喂至D18,检测母鼠胰岛素耐受,采集血液和肝脏组织,分析血液指标和肝脏脂类代谢相关基因mRNA的表达。结果 CLA组泌乳鼠肝脏重量和甘油三酯含量与对照组比没有显著差异(P>0.05),CLA组泌乳鼠血液中的胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和谷氨酰转肽酶的含量均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),CLA组泌乳鼠血液中胰岛素的含量也显著升高,形成胰岛素抵抗。与对照组比,CLA组泌乳鼠肝脏中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)基因的mRNA表达显著上调(P 0.05),而脂肪酸合成酶(FASN)、脂肪酸转位酶(CD36)、载脂蛋白B100(APOB100)及调控因子固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1-c)和过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因的mRNA表达均没有显著差异。结论饲料中加入1.5%CLA能够升高泌乳鼠血液中胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、谷氨酰转肽酶和胰岛素含量,上调肝脏硬脂酰辅酶A去饱和酶基因mRNA的表达。[营养学报,2012,34(6):531-535]     

O型口蹄疫病毒VP1蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及纳米样结构观察

目的本实验旨在高效表达可溶性的O型口蹄疫病毒VP1蛋白,并形成纳米样颗粒。方法根据O型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV O/MYA/7/98株的VP1蛋白基因,并进行截短和优化,共73个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonella enterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Fn)基因片段,将O型口蹄疫病毒VP1蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒VP1蛋白-铁蛋白基因片段,命名为Se Fnt16798。构建了Se Fnt16798融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、Ars C、Ppi B、Ce HSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选高效可溶性表达的Se Fnt16798融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测。结果实验成功构建9个Se Fnt16798表达载体;9个标签中,MBP与Se Fnt16798蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-Se Fnt16798重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-Se Fnt16798形成了纳米样颗粒。结论本实验建立了稳定获得Se Fnt16798重组蛋白质的方法。     

新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白的可溶性超表达与免疫活性检测

目的检测新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,及其免疫活性。方法采用融合表达的方法将HN蛋白基因分别与Grifin、谷胱甘肽S移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、Nus A、小泛素样相关修饰物(SUMO)、硫氧还蛋白(thioredoxin)、蛋白G(protein G)、γ-晶状体蛋白(γ-crystallin)、Ars C、Ppi B 10种融合标签基因采用柔性接头进行连接,构建10个重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,将这10个重组质粒分别转入大肠杆菌BL21中,用不同条件进行诱导表达,经SDS-PAGE检测并选出最佳诱导蛋白表达的条件,筛选出能够显著促进HN蛋白可溶性表达的标签,并用Western blotting对所表达蛋白的含量进行定性分析,同时纯化的重组蛋白用Western blotting和间接ELISA验证其免疫原性。结果成功构建了10个不同融合标签的HN融合蛋白表达载体,筛选出融合标签麦芽糖结合蛋白(MBP)能够显著促进HN蛋白可溶性表达,且Western blotting显示所表达重组蛋白的表达量是最多的。经Western blotting和间接ELISA验证重组HN蛋白具有良好的免疫原性。结论融合标签MBP可以显著提高HN蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。     

A型口蹄疫病毒1D蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及电子显微镜检测

目的 本实验旨在表达出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白,并通过电子显微镜检测,以期望形成纳米样颗粒。 方法 根据A型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因,并进行截短和优化,共132个氨基酸;同时,从结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli）中分离得到135个氨基酸的铁蛋白(Fn)基因片段,将A型口蹄疫病毒1D蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-铁蛋白片段,命名为CcFnt166AS。构建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的CcFnt166AS融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测。 结果 成功构建9种CcFnt166AS表达载体;9个标签中,MBP与CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-CcFnt166AS重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-CcFnt166AS形成了纳米样颗粒。 结论 本实验建立了稳定获得CcFnt166AS重组蛋白质的方法。     

斑褐孔菌不同发酵物中黄酮含量的比较研究

对利用不同碳源、氮源发酵培养得到的斑褐孔菌菌丝体和野生型斑褐孔菌的子实体进行了黄酮含量的测定.结果表明:以米酒为碳源进行发酵有利于斑褐孔菌菌丝体中黄酮类成分的积累,葡萄糖次之,黄酮含量分别是2.01%,1.64%.黄豆粉为氮源有利于黄酮类成分的积累,酵母浸膏,蛋白胨次之,黄酮含量分别为2.01%,1.82%,1.64%.