PKCα/β通过调控紧密连接蛋白参与百草枯致脑微血管内皮细胞的通透性异常

目的 探讨经典型蛋白激酶C(cPKC:PKC α、PKC β)是否通过调控紧密连接蛋白(tight Junction,TJ)的表达,引起百草枯(paraquat,PQ)致小鼠脑微血管内皮细胞通透性的异常。 方法 体外培养小鼠脑组织来源的血管内皮细胞株(bEnd.3)作为单层血脑屏障模型,通过Millicell-ERS细胞电阻仪测定跨内皮细胞电阻(TEER)、荧光素钠(Na-FLU)通透性测定以评价体外血脑屏障模型的功能。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞相对存活率:终浓度0、50、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,确定剂量-效应关系;终浓度200 μmol/L PQ分别处理细胞6、12、24、48、72 h,确定时间-效应关系。终浓度0、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,免疫荧光(IF)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-5)和基因的表达水平,免疫印迹法(Western blot)测定PKC α、PKC β、p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平;经典PKC抑制剂(Go 6983)1 μmol/L预处理细胞1 h后,200 μmol/L PQ染毒细胞24 h,Western blot法测定ZO-1、Occludin、Claudin-5及p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平。 结果 bEnd. 3细胞的TEER随培养时间延长逐渐升高,于第6 d达到峰值[(114.3±6.9)Ω· cm^2],荧光素钠通透性检测显示,细胞通透性随培养时间延长逐渐降低,于第6天降至(1.7±0.2)cm/min,说明细胞屏障功能良好。与对照组比较,100、200、300 μmol/L PQ染毒组细胞存活率明显降低,200 μmol/L PQ染毒细胞12、24、48、72 h,细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖和时间依赖关系。IF和qRT-PCR显示,随着PQ浓度的升高,ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白和基因表达量明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测显示,与对照组比较,PQ染毒组的p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平明显升高,ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);Go 6983干预组的ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平较染毒组明显升高,p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 PQ通过激活cPKC(PKC α、PKC β)导致紧密连接蛋白/基因表达降低,引起小鼠脑微血管内皮细胞通透性升高。     

右美托咪定通过调节BDNF/NLRP3通路减轻氧糖剥夺诱导的人脑星形胶质细胞炎症和焦亡

目的本研究采用体外氧糖剥夺(OGD)模型探讨右美托咪定(Dex)在缺血性脑卒中(IS)对人脑星形胶质细胞(HA)中的作用, 并揭示其潜在机制。方法以HA为研究对象, 按照随机数字表法分为10组(每组3孔):对照组(Control组), OGD组, 分别使用0.5、1.0、2.0 μmol/L Dex处理OGD模型组(0.5 μmol/L Dex+OGD组、1.0 μmol/L Dex+OGD组、2.0 μmol/L Dex+OGD组), 在OGD模型细胞中添加200 nmol/L K-252a[脑源性神经营养因子(BDNF)抑制剂]组(OGD+K-252a组), 在OGD模型细胞中添加1.0 μmol/L Dex组(OGD+Dex组), 在OGD模型细胞中联合使用1.0 μmol/L的Dex和200 nmol/L K-252a组(OGD+Dex+K-252a组), 在正常细胞中添加200 nmol/L K-252a组(K-252a组), 正常细胞中联合使用200 nmol/L K-252a和5 μmol/L的BAY11-7082[NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)抑制剂]...     

右美托咪定对脑膜瘤患者血浆中脑源性神经生长因子和认知功能障碍的影响

目的探讨右美托咪定对脑膜瘤患者血浆中脑源性神经生长因子(BDNF)水平及认知功能障碍的影响。方法将120例脑膜瘤患者随机分为对照组(生理盐水)和观察组(右美托咪定),每组60例。比较2组拔管12 h(T₃)、拔管48 h(T 4)、拔管第3天(T₅)、拔管第7天(T₆)时的平均动脉压(MAP)、血氧饱和度(SpO₂)、心率(HR)、呼吸频率。统计2组插管30 min(T₂)、T₃、T₄、T₅、T₆时的BDNF变化情况。评估2组术前(T₁)、拔管第8天(T₇)、拔管第14天(T₈)、拔管第20天(T₉)、拔管第24天(T₁₀)、拔管1个月(T₁₁)时的认知功能变化。结果观察组T₃、T₄、T₅、T₆时MAP、HR低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);与T 2比较,2组T₄、T₅时BDNF水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组T₆时BDNF水平升高,且高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与T₁时比较,对照组T₇~T₁₁简易精神状态量表(MMSE)评分、蒙特利尔认知量表(MoCA)评分下降(P<0.05);观察组T₇~T₉时MMSE和MoCA评分下降,T₁₀、T₁₁时MMSE和MoCA评分上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组T₁₀、T₁₁时MMSE和MoCA评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定应用于神经外科镇静效果佳,可显著改善患者认知功能。     

右美托咪定对脑膜瘤患者术后血浆中脑源性神经生长因子水平的影响

目的 探讨右美托咪定对脑膜瘤患者术后血浆中脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotro-phic factor,BDNF)水平的影响.方法 选择2017年7月-2019年6月120例脑膜瘤患者展开研究,将患者随机分为对照(生理盐水)组和右美(右美托咪定)组,每组各60例;记录2组患者拔管时间,比较2...     

肝缺血再灌注损伤与NF-κB

核转录因子-κB(Nuclear Factor-Kappa B,NF-κB)是一种重要的转录因子,近年来的研究表明,在炎症反应、免疫反应及细胞凋亡中起重要作用,在肝缺血再灌注损伤过程中亦至关重要。现就NF-κB及其在肝缺血再灌注损伤过程中的作用机制作一综述。