肿瘤抑制基因RECK在骨肉瘤组织及细胞系中表达的初步研究

目的 通过检测RECK 基因在人骨肉瘤组织及人骨肉瘤细胞MG-63的高低转移亚系中的表达,探讨RECK基因在骨肉瘤发生及转移过程中的作用.方法 采用免疫组化法检测18例骨肉瘤组织标本中RECK 蛋白的表达,再分别应用RT-PCR 方法检测细胞亚系中RECK mRNA的表达、明胶酶谱检测细胞MMP-2的活化水平、Matrigel侵袭实验检测肿瘤细胞侵袭能力.结果 骨肉瘤组织中RECK蛋白的吸光度值为(0.31±0.07),明显低于正常骨组织(P<0.01),RECK的表达与肺转移、生存率有关(均P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级无关;高转移细胞组RECK mRNA 的含量明显低于低转移组(P<0.01),而MMP-2 活化水平、细胞侵袭力则明显升高(均P<0.05).结论 RECK基因异常低表达可能参与骨肉瘤侵袭、转移机制,RECK 基因可能成为判断骨肉瘤患者预后新的分子标志物及肿瘤治疗的新靶点.     

调控RECK基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2活化及细胞侵袭力的影响

目的观察RECK基因过表达对人早孕绒毛外滋养细胞系TEV-1的MMP-2活化比例及细胞侵袭力的影响。方法以脂质体Lipofectamine^TM 2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入TEV-1细胞，以获得稳定转染目的基因的TEV-1细胞株。RT-PCR、流式细胞术检测目的基因的表达；明胶酶谱法、Transwell侵袭小室实验分别检测TEV-1细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和细胞生长曲线法观察质粒DNA转染的细胞毒性情况。结果目的基因RECK在TEV-1细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达；明胶酶谱显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组活化的MMP-2比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.05），Transwell侵袭实验显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.01）；MTT法测重组质粒pcDNA3-RECK转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异。结论RECK过表达可显著减少绒毛外滋养细胞的MMP-2活化及其侵袭能力，可能参与了早孕绒毛外滋养细胞侵蚀机制。     

RECK基因与基质金属蛋白酶-2相关性在早孕滋养细胞侵袭调控中的作用

目的：探讨RECK基因与基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）相关性在早孕滋养细胞浸润调控中的作用。方法：分别采用免疫组化、Western blot法、明胶酶谱法检测52例正常妊娠（早孕组27例、足月妊娠组25例）胎盘组织中RECK表达定位、蛋白含量及MMP-2的活化比例。结果：免疫组化提示早孕、足月妊娠均有RECK蛋白表达，其主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞的胞膜和胞质。RECK表达随孕周增加而增强．早孕组RECK表达明显低于足月妊娠组（P〈0．05），且在具有侵袭力的早孕锚定绒毛的细胞柱上RECK表达呈弱阳性；Western blot检测亦显示早期妊娠RECK蛋白质含量显著低于足月妊娠（P〈0．05））；明胶酶谱示MMP．2的活化比例则相反，早孕组MMP-2活化比例明显高于足月妊娠组（P〈0．05）。结论：MMP-2活性的表达变化与滋养细胞浸润活性呈正相关，而肿瘤抑制基因RECK的表达变化与之呈负相关．MMP-2与RECK基因相互作用在滋养细胞浸润活性调控中可能起重要作用。     

AQP1、bFGF在宫颈癌的表达及意义

目的:探讨AQP1、bFGF在宫颈癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测31例宫颈癌组织中AQP1、bFGF的分布和表达情况,并选择41例CIN、30例正常宫颈作对照。结果:AQP1、bFGF在正常组织中的阳性表达率分别为20.0%、13.3%,在CIN组织中的阳性表达率分别为51.2%、75.6%,在宫颈癌组织中的阳性表达率分别为87.1%、93.3%。从正常组织到CIN再到宫颈癌,AQP1、bFGF阳性表达率显著升高(P<0.05);AQP1和bFGF与宫颈癌的临床分期、组织学分级显著相关(P<0.05),AQP1与宫颈癌有无淋巴结转移显著相关(P<0.05),而bFGF与有无淋巴结转移无关(P>0.05),AQP1和bFGF与宫颈癌瘤体直径显著相关(P<0.05)。AQP1和bFGF与宫颈癌患者年龄无关(P>0.05)。癌组织中AQP1和bFGF的表达程度呈正相关(P<0.05)。结论:AQP1和bFGF的异常表达在宫颈癌的发生和发展中可能发挥一定作用,二者的联合检测可作为宫颈癌的诊断及预后评估的参考指标。     

肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子-Ⅰ、基质金属蛋白酶-2在卵巢上皮性癌组织中的表达及其相关性

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子*Ⅰ(IGF-Ⅰ)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在卵巢上皮性癌组织中的表达及其相关性.方法:分别收集正常卵巢组织20例(正常对照组),卵巢良性上皮性肿瘤组织30例(良性肿瘤组),卵巢上皮性癌组织70例(卵巢癌组).采用免疫组织化学SP法检测3组卵巢组织中HGF、IGF-Ⅰ及MMP-2的表达,分析3个因子与卵巢上皮性癌临床病理因素间的关系,采用Spearman相关性检验分析3个因子间的相关性.结果:①HGF、IGF-Ⅰ和MMP-2在正常对照组、良性肿瘤组、卵巢癌组中的表达呈上升趋势,且组间两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05).②卵巢癌组中,HGF、IGF-Ⅰ及MMP-2的阳性表达在临床分期Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期及有无淋巴结转移中比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).③在卵巢癌组中,HGF、IGF-Ⅰ及MMP-2的阳性表达三者间均呈正相关(P＜0.01).结论:HGF、IGF-Ⅰ及MMP-2在卵巢上皮性癌组织中高表达,可能共同参与卵巢上皮性癌的发生发展,与癌细胞的增殖、浸润和转移有关,且存在协同作用.     

宫颈鳞状细胞癌组织中AngⅡ和AQP1的表达

目的:探讨宫颈鳞癌中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、水通道蛋白1(AQP1)的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测46例宫颈浸润癌患者、11例原位癌患者和20例正常妇女宫颈组织中AngⅡ、AQP1蛋白的表达。结果:AngⅡ、AQP1蛋白在宫颈浸润癌组织中的阳性表达率分别为73.9%、71.7%,与正常宫颈组织和原位癌组织相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。AngⅡ和AQP1的表达量与宫颈浸润癌的FIGO分期、盆腔淋巴结转移有关(P<0.05),而与组织学分级、患者年龄无关(P>0.05);癌组织中AngⅡ与AQP1的表达具有正相关性(P<0.05)。结论:AngⅡ和AQP1可能与宫颈鳞癌的发生发展有关;AngⅡ和AQP1在宫颈鳞癌的发生发展中可能具有某种协同作用。     

无应激试验联合彩色多普勒监测围产儿预后

目的:探讨应用无应激试验(NST)联合彩色多普勒预测围产儿结局的临床价值.方法:选取我院妊娠晚期NST2次或2次以上异常孕妇206例,随后进行彩色多普勒胎儿脐动脉和大脑中动脉血流阻力指标检测(S/D、PI、RI),将检测异常的孕妇设为高危妊娠组,共67例;余下139例,设为对照组.结果:高危妊娠组围产儿预后不良发生率明显高于对照组;胎儿脐动脉舒张末期血流阻滞、逆流5例,其胎儿先天性畸形4例、脑瘫1例,提示预后不良的发病率高达100%.结论:NST检测应用于高危妊娠的筛查,方便、简洁,但需联合彩色多普勒等检测手段,对围产儿的预后进行产前预测、诊断;NST检测反复异常,同时彩色多普勒异常的孕妇需加强产前优生检查,对胎儿及时干预,尽早终止妊娠.     

RECK基因在子痫前期患者胎盘的表达及其与MMP-2活化的关系

目的 通过检测RECK基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与MMP-2活化的关系,探讨RECK基因在胎盘滋养细胞浸润机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、Western blot检测正常妊娠孕妇(正常妊娠组,22例)、子痫前期孕妇(其中轻度22例,重度20例)胎盘组织中RECK mRNA和蛋白的表达;采用明胶酶谱法检测3组孕妇胎盘组织中MMP-2的活化比例.结果 轻度、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于正常妊娠组,且重度子痫前期组RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而轻度、重度子痫前期组MMP-2的活化比例均明显低于正常妊娠组,且重度子痫前期组MMP-2的活化比例明显低于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01).正常妊娠组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA及其蛋白表达与MMP-2的活化比例均呈负相关关系(均P<0.01).结论 子痫前期孕妇胎盘组织中RECK表达异常升高,MMP-2活性受到抑制,可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程.     

Correlation of RECK with Matrix Metalloproteinase-2 in Regulation of Trophoblast Invasion of Early Pregnancy

Trophoblast invasion into maternal decidualized endometrium and the proximal one third of the myo-metrium is one of the keys of successful human preg-nancy. At present, the mechanisms of trophoblast inva-sion regulation are still not fully understood. Many re-searches showed that matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was closely correlated with trophoblastic inva-sion[1]. RECK gene is a newly discovered endogeneous inhibitor of MMPs in recent years[2]. Researches found that RECK is one of n…     

转染RECK基因对人骨肉瘤MG-63细胞MMP-2活化及侵袭能力的影响

目的 观察转染RECK基因对人骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及细胞侵袭力的影响.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入MG-63细胞,RT-PCR、流式细胞术检测目的 基因的表达,明胶酶谱法、Matrigel侵袭实验分别检测MG-63细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞生长曲线法观察转染质粒DNA对细胞的毒性作用.结果 转染后RECK基因在MG-63细胞Mrna和蛋白水平分别有稳定高表达;明胶酶谱显示重组质粒转染组MMP一2的活化比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.01),Matrigel侵袭实验显示重组质粒转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.05);而MTT法测重组质粒转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异(均P>0.05).结论 RECK基因过表达可显著减少骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及其侵袭能力,RECK基因可能成为肿瘤治疗的新靶点.