人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探

目的 探讨人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体（GR）mRNA减少的机制。方法 利用聚合酶链反应（PCR）从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC7721细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子3，4，5片段（与人GR跨外显子3，4，5片段同源性在89%以上）及人GR内含子E的DNA片段，构建转录质粒，并在体外进行转录，用地高辛标记反义RNA探针，进行细胞原位杂交，碱性磷酸酶底物NBT-BCIP显色。计算机图像分析系统进行扫描半定量分析。结果 人肝癌SMMC-7721细胞44℃培养1h后，用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低；加放线菌素D后热休克反应组，用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低，而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高；加放线菌酮后热休克反应组，用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高。结论 热休克反应时GRmRNA转录过程受抑，GRmRNA前体成熟过程存在剪接障碍，GRmRNA降解加快。     

浙江地区妇女生殖道人乳头瘤病毒感染亚型的检测及流行病学分析

人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈鳞癌和上皮内瘤病变等发生的必要因素~([1]).通常在性活跃期的最初几年,有75%以上的女性会在不同阶段感染HPV.而持续性的高危型HPV感染将会增加宫颈细胞癌变的危险性.因此,HPV基因分型检测成为筛查及预防宫颈癌的有效手段之一.本研究分析浙江地区生殖道标本的HPV基因分型检测结果,以了解HPV各亚型的感染及分布情况.     

焦磷酸测序法检测结直肠癌患者k-ras基因突变

研究证明,k-ras癌基因的激活在CRC发生发展过程中起重要作用[1].k-ras基因最常见的激活方式为点突变,其中90%以上的突变发生在1号外显子第12位密码子(野生型:GGT)和第13位密码子(野生型:GGC)[2],突变率约30%～49%[3].近年来,k-ras基因是否突变已成为西妥昔单抗能否用于CRC分子靶向治疗的用药评判标准[4].因此,如何快速准确检出k-ras 基因突变对这类药物的应用及疗效预测显得尤为重要.焦磷酸测序法是一种酶促级联测序技术,特别适用于SNP常规检测[5].     

基因直接测序分析HBV多聚酶区基因突变与基因分型

HBV是一种嗜肝DNA病毒,其基因组为3200bp的双链DNA分子,按照全基因序列的异质性,HBV可分为A-H等8个基因型。HBV的变异率极高,而且具有很高的复制率,在由共价闭合环状DNA反转录过程中因HBV聚合酶和反转录酶缺乏校正活性,因此不能去除错误掺入的碱基。HBV常引起慢性持续感染,在长期反复感染和复制中发生变异,并受人体免疫应答、抗病毒药物等环境因素的影响。核苷（酸）类似物拉米夫定和替比夫定等抗病毒药物的作用靶点均为HBV聚合酶和反转录酶,     

HLA-B7可诱导启动子调控TNF-α和IFN-β基因协同增强抗肿瘤效应

目的　将TNF α和IFN β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC 772 1,以增强其免疫原性。方法　以腺病毒为载体 ,以IRES连接TNF和IFN基因 ,选择HLA B7可诱导启动子调控其表达。分别用Southern Northernblot和MTT法检测TNF α和IFN β基因的整合、转录与表达。流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达。CTL细胞毒性实验检测T细胞对转染细胞的杀伤作用。细胞增殖实验检测目的基因的表达对肿瘤细胞的抑制作用。结果　TNF α和IFN β基因可整合入转染细胞 ,并被有效转录。转染细胞MHCⅠ类分子的表达比对照组高 3～ 4倍。TNF活性 :Liu6细胞为 3 .778ng ml,SMMC 772 1为2 .0 17pg ml;2 4hIFN最高活性分别为 397.8U 10 6 个细胞和 345 .8U 10 6 个细胞。对照组与实验组在效靶比分别为 5∶1,10∶1,15∶1时 ,CTL细胞毒性实验结果差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,表明T细胞杀伤作用明显增强。细胞增殖实验结果显示实验组与对照组差异有显著性 (P <0 .0 5 )。目的基因的表达对肿瘤细胞具有一定的抑制作用 ,抑制率分别为 5 .5 %(Liu6 ) ,3.7%(SMMC 772 1)。结论　人TNF α和IFN β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC 772 1可明显增加其对TNF、IFN和MHCⅠ类分子的表达 ,增强机体对转染瘤细胞的杀伤作用。     

焦磷酸测序法检测结直肠癌患者k-ras基因突变

研究证明,k-ras癌基因的激活在CRC发生发展过程中起重要作用[1].k-ras基因最常见的激活方式为点突变,其中90%以上的突变发生在1号外显子第12位密码子(野生型:GGT)和第13位密码子(野生型:GGC)[2],突变率约30%～49%[3].近年来,k-ras基因是否突变已成为西妥昔单抗能否用于CRC分子靶向治疗的用药评判标准[4].因此,如何快速准确检出k-ras 基因突变对这类药物的应用及疗效预测显得尤为重要.焦磷酸测序法是一种酶促级联测序技术,特别适用于SNP常规检测[5].     

人胃癌相关蛋白VRG107基因的扩增及组织表达初步研究

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾、乳腺等多种组织(包括肿瘤组织)中均有不同程度的表达。在肝癌组织中表达量明显少于癌旁组织(P<0.01),而在结肠癌组织中表达也少于癌旁组织。提示VRG107基因是一个组织分布广泛的基因,在部分肿瘤组织中表达量明显减少。     

焦磷酸测序法检测结直肠癌患者k-ras基因突变

研究证明,k-ras癌基因的激活在CRC发生发展过程中起重要作用[1].k-ras基因最常见的激活方式为点突变,其中90%以上的突变发生在1号外显子第12位密码子(野生型:GGT)和第13位密码子(野生型:GGC)[2],突变率约30%～49%[3].近年来,k-ras基因是否突变已成为西妥昔单抗能否用于CRC分子靶向治疗的用药评判标准[4].因此,如何快速准确检出k-ras 基因突变对这类药物的应用及疗效预测显得尤为重要.焦磷酸测序法是一种酶促级联测序技术,特别适用于SNP常规检测[5].