甲状腺癌差异表达cDNA消减文库的构建

目的 应用抑制性消减杂交技术，构建人甲状腺癌与正常甲状腺差异表达的cDNA消减文库。方法 分别从甲状腺癌及正常甲状腺组织中提取总RNA，应用高效、灵敏的抑制性消减杂交技术，构建成功cDNA消减文库，再转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 构建成功具有高消减效率的人甲状腺癌组织cDNA消减文库，文库扩增得到了400个克隆，随机挑取50个制备质粒，酶切分析均得到50bp-400bp大小插入片段，这些片段可能就是载有高度特异性的目的片段。结论 人甲状腺癌组织cDNA消减文库的建立为进一步克隆甲状腺癌特异性表达的新基因奠定了基础。     

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因，构建真核表达载体，本研究拟探索该基因在肿瘤基因治疗中的应用基础。方法 根据GenBank数据库提供的CD基因核苷酸序列，设计并合成一对引物，采用PCR方法，从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因，并与pcDNA3．1定向连接，构建受控于人巨细胞病毒启动子的重组真核载体pcDNA3．1-CD，并用限制性内切酶、PCR和DNA测序进行鉴定。结果克隆了大肠杆菌CD基因，并构建了真核表达载体，经限制性内切酶酶切、PCR扩增和DNA测序证实了其正确性。结论 pcDNA3．1-CD真核表达载体构建成功。     

自杀基因联合放射对食管癌细胞株的实验研究

目的自杀基因具有能将无细胞毒性的前体药物转化为有细胞毒性作用的药物而使细胞死亡,通过观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因系统对食管癌EC109细胞杀伤效应及与放射联合应用对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法采用PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因;构建重组真核载体pcDNA3.1-CD;用脂质体转染法转染EC109细胞;观察CD/5-FC体系对EC109细胞的杀伤效应和旁观者效应及对放射的增敏效应。结果RT-PCR分析结果表明CD基因已转入EC109细胞并表达。离体实验证实5-FC对转CD基因后的食管癌细胞株有明显的细胞毒作用,含5%的转基因食管癌细胞加入5-FC后的细胞存活比率为41.8%±14.2%,低于对照组的94.6%±4.3%结果(t=3.14,P<0.05);加入10%的转基因细胞的存活比率为37.8%±4.4%,低于对照组的95.6%±5.4%结果(t=9.75,P<0.01)。CD/5-FC体系对肿瘤细胞放射增敏效果明显,加前药5-FC及放射组细胞存活曲线低于单纯加前药5-FC对照组或单纯放射对照组,重复测量数据方差分析结果显示F=11.50,P<0.01;治疗组分别与5-FC对照组及单纯放射对照组相比F值分别为4.11、10.53,P值分别<0.05、0.01。结论CD/5-FC体系的旁观者效应和放射增敏效果明显。     

人胃印戒细胞癌组织差异表达基因克隆的研究

目的:分离胃印戒细胞癌组织差异表达基因,探讨人胃印戒细胞癌发生的分子机制。方法:采用抑制性消减杂交技术(SSH),构建人胃印戒细胞癌组织cDNA 消减文库;随机挑选部分阳性克隆测序,与GenBank中的已知序列进行基因同源性分析,并进一步探讨基因功能。结果:成功构建高消减效率的人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库,并分离出多个差异表达基因片段:其中1 条与染色体序列相似,可能代表未知的新基因序列,已被GenBank 接收(注册号:CN446913);其他多为已知的肿瘤相关基因的部分片段。结论: 1 )SSH技术是分离差异表达基因的有效方法;2)胃印戒细胞癌的发生发展与多种基因表达异常有关;     

GM-CSF基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的：构建人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因的重组腺病毒载体，为进一步研究GM-CSF基因在肿瘤基因治疗中的应用提供实验基础。方法：采用PCR方法，从重组质粒pcDNA3．1-GM-CSF扩增出GM-CSF基因片段，通过穿梭质粒pShuttle，将带有CMV启动子的目的片段克隆入Adeno-X腺病毒DNA中，获得重组腺病毒DNA，通过脂质体转染HEK293细胞，经包装扩增后，获得重组腺病毒Adeno-X-GM-CSF，PCR鉴定，ELISA法检测表达产物。结果：含GM-CSF基因的重组腺病毒Adeno-X-GM-CSF构建成功，经PCR鉴定和DNA测序等证实了其正确性，重组腺病毒上清液中GM-CSF表达量达26ng／mL。结论：含GM-CSF基因的重组腺病毒构建成功。     

头孢曲松钠致严重过敏性休克死亡1例

患者,女,51岁,主因喘息、胸闷,咳嗽、咳少量白痰3天就诊。查体：体温36．7℃,脉搏79次／min,血压127／75mmHg（1mmHg=0．133kPa）。双肺呼吸音稍粗,可闻及干性啰音,偶闻哮鸣音,未闻及水泡音。心音纯,节律齐,未闻及杂音。腹部未见异常。胸片见双肺透过度稍强,肺纹理增强、紊乱。血液分析无明显异常。诊断支气管哮喘合并感染。治疗：头孢曲松钠3g加入0．9％生理盐水250ml静脉滴注,     

中医辨证施护对慢性阻塞性肺疾病患者生存质量的影响研究

[目的]评价中医辨证施护对COPD患者生存质量的影响。[方法]选择60例稳定期COPD患者,随机分为治疗组对照组各30例,对照组给予基础治疗和常规护理,治疗组除基础治疗和常规护理外给予中医辨证施护,分别评定生活质量圣乔治呼吸问卷(SGRQ)和肺功能。[结果]治疗组治疗后活动受限、疾病影响和总分与对照组比较有显著下降(P≤0.01)。[结论]中医辨证施护可改善COPD患者生存质量。     

RNA干扰技术抑制乳腺癌SKBr3细胞HER2的表达

目的 构建含表皮生长因子受体2基因(HER2)的短发夹状双链RNA(shRNA)重组质粒,体外观察对人乳腺癌细胞SKBr3的HER2 mRNA及蛋白表达的影响. 方法 利用分子克隆技术,将含HER2的双链DNA,与经双酶切后的载体pSilencer连接,构建pSilencer-HER2重组质粒,在脂质体的介导下转染高表达HER2的乳腺癌细胞系SKBr3.RT-PCR分析HER2 mRNA的表达,Western blot检测蛋白的表达,MTT法测定细胞增殖情况. 结果 酶切鉴定证实重组质粒构建成功,转染后能明显抑制HER2 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的增殖. 结论 构建的pSilencer-HER2重组质粒能有效地降低人乳腺癌细胞HER2的表达,抑制细胞的增殖,为HER2高表达预后不良的乳腺癌基因治疗提供新策略.     

耳穴贴压预防输血发热反应的临床观察

自 190 1年Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ发现了人类第一个血型———红细胞ＡＢＯ血型以来 ,输血疗法就成为现代医学上的特殊治疗手段 ,但也有其局限性和危险性 ,容易发生各种副作用 ,其中以外源性或内源性致热源引起的发热反应最多见。我们在护理工作中用中药王不留行耳穴贴压预防输血发热反应 ,并与异丙嗪作比较 ,取得了较为理想的结果 ,兹报告如下。1　临床资料所有研究对象均来源于本院内科住院患者 ,随机分为实验组与对照组。其中实验组 4 0例 ,男 2 5例 ,女 15例 ;年龄2 1～ 75岁 ;输血 118例次 ,平均 2 95例次 ,其中输血 6 8次 ,输血浆 5…     

乳腺癌干细胞样细胞mRNA致敏的树突状细胞疫苗免疫治疗研究

目的观察乳腺癌干细胞样细胞核酸抗原致敏的树突状细胞疫苗体外诱导免疫反应作用。方法利用含有生长因子的无血清培养基悬浮培养法富集MCF-7乳腺癌干细胞样细胞,经单克隆形成、表面标记检测、NOD-SCID小鼠成瘤等实验鉴定后,采用T7mMessage mMACHINE试剂盒进行mRNA体外扩增并转染人外周血树突状细胞,MTT法体外检测转染后的树突状细胞诱导的细胞毒活性。结果无血清培养的方法能够富集乳腺癌干细胞样细胞,含CD44+/CD24-型的乳腺癌干细胞样细胞高达(90.17%);经鉴定在NOD/SCID小鼠体内具有强致瘤性;负载后DCs高表达树突状细胞特异性标志CD80/CD83/CD86及HLA-DR;与已分化贴壁乳腺癌细胞相比,悬浮培养的未分化状态的乳腺癌干细胞样细胞mRNA转染的树突状细胞靶向杀伤肿瘤干细胞样细胞的能力更强(P0.01)。结论乳腺癌干细胞样细胞mRNA致敏的树突状细胞疫苗在体外可诱导强的杀伤乳腺癌干细胞样细胞的CTL细胞能力,为乳腺癌临床免疫治疗提供了新的靶点。