实时荧光PCR法检测DPYD*9等位基因的单核苷酸突变

目的:建立一种简便、特异的对二氢嘧啶脱氢酶基因DPYD*9进行等位基因分型的方法。方法:以DPYD基因为靶合成含突变位点的野生型引物WF、突变型引物TF和共同的下游引物R,用DNA荧光嵌入染料SYBRG reenⅠ进行荧光PCR扩增,对产物进行溶解曲线分析以确定基因型;同时优化了引物浓度,分析其灵敏度并与普通PCR进行了比较,对20份PCR产物进行了验证。结果与结论:以野生型基因组为模板时,WF和R组合有荧光响应,而TF和R组合无荧光响应;当以突变型基因组为模板时,TF和R组合有荧光响应,而WF和R组合无荧光响应。两者Ct值均为24,Tm值均为83oC。优化引物浓度为0.25μmol/L,荧光PCR可分出10个模板拷贝数的基因型,而普通PCR只能区分模板为8.0×102拷贝数的基因型。PCR产物测序证实荧光PCR法与直接测序结果一致。该方法能准确快速地区分DPYD*9的基因型,敏感性和特异性强。     

肝移植后胆道铸型综合征病人中HLA抗体检测的临床意义

目的 研究肝移植受者体内的HLA致敏状态与胆道铸型综合征的关系以及HLA抗体在预测免疫因素引起胆道铸型综合征中的作用.方法 收集52例肝移植病人术前术后8个时间点系列血清共416份,用ELISA法检测受者血清中HLA抗体,将52例病人分为两组,20例无胆道铸型综合征者为对照组,32例发生胆道铸型综合征者设为实验组,分析两组间HLA抗体水平有无显著性差异,及与主要生化指标变化的关系.结果 胆道铸型综合征组术后HLA抗体阳性率显著高于对照组(P<0.05),胆道铸型综合征临床症状恢复时间与HLA-Ⅱ类抗体的出现时间呈负相关性.结论 HLA-Ⅱ类抗体的动态监测可作为胆道铸型综合征发生的预警信号.     

结肠癌三维适形放射治疗和常规放射治疗的临床疗效观察

目的探讨术前三维适形放射辅助治疗(3DCRT)结肠癌和常规放射辅助治疗结肠癌的临床疗效及放射治疗反应。方法采用3DCRT方法辅助治疗结肠癌117例(3DCRT组,5～6Gy/次,隔日照射1次,共7～8次,总剂量40～42Gy,13～15天),与同期常规放射辅助治疗(CF组,2.0 Gy/次,5次/周,64～68Gy,44～48天)的102例结肠癌进行比较。结果 3DCRT组和CF组的1、2、3、4年局部控制率分别为75.3%、66.5%、52.7%、46.1%和55.3%、47.2%、36.5%、27.8%,差异有显著性(P=0.016)。3DCRT组和CF组的1、2、3、4年生存率分别为65.2%、55.1%、45.7%、40.5%和51.2%、42.5%、31.0%、24.6%,差异有显著性(P=0.026)。血液系统及全身反应3DCRT组较CF组比较,差异有显著性(P=0.009,0.023)。结论 3DCRT能明显改善结肠癌的局部控制率和生存率,近期放射反应及远期放射损伤均可耐受。     

住院患者医院感染病原菌分布与耐药性分析

目的调查住院患者医院感染病原菌的分布及耐药性,为控制医院感染提供依据。方法对2009年1-12月,培养分离出的2114株病原菌分布及耐药性进行统计分析。结果检出病原菌中,革兰阳性球菌占20.7%,革兰阴性杆菌占79.3%;革兰阳性球菌以金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌为主,检出率均为6.4%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率为66.0%;革兰阴性杆菌以铜绿假单胞菌占23.9%、鲍氏不动杆菌占17.3%、肺炎克雷伯菌占11.1%及大肠埃希菌占8.3%为主;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分离率为34.0%;医院感染病原菌的耐药率较高,其中革兰阴性杆菌中,鲍氏不动杆菌耐药率最高,除头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素外,对其他抗菌药物的耐药率均>80.0%,铜绿假单胞菌次之,其对美罗培南和亚胺培南的耐药率均>40.0%;革兰阳性球菌中除粪肠球菌外,其他3种主要病原菌对青霉素及红霉素高度耐药,耐药率分别>95.0%及>80.0%;屎肠球菌对头孢唑林的耐药率高达100.0%,对万古霉素与替考拉宁的耐药率均为3.1%。结论医院耐药菌感染比较严重,医院感染菌中革兰阴性杆菌感染率较高,检出主要病原菌对常用抗菌药物均耐药;临床应根据病情及时作病原学检测,结合药敏试验结果,正确合理使用抗菌药物,减少耐药菌的产生。     

黄芪与当归对血管再狭窄大鼠一氧化氮合成的影响

目的观察黄芪、当归对血管内皮剥脱后再狭窄大鼠血浆一氧化氮合成的影响,探讨其防治血管再狭窄的作用与机制。方法建立内皮剥脱后血管再狭窄动物模型,应用黄芪、当归单独及联合治疗21d,进行血管形态学观察,应用Greiss试剂检测各组大鼠血浆中一氧化氮含量。结果与对照组比较,模型组内膜增生明显,一氧化氮合成明显降低;应用黄芪、当归单独及联合治疗21d后,与模型组比较,各治疗组内膜增生明显减轻,一氧化氮合成明显增加,以黄芪、当归联合应用组作用明显。结论黄芪、当归具有抑制血管再狭窄大鼠内膜增生、增加血浆一氧化氮合成的作用,以联合应用作用明显。黄芪、当归可能通过增加一氧化氮合成而发挥其防治血管内皮剥脱后再狭窄的作用。     

黄嘌呤氧化酶比色法测定血清无机磷

目的建立一种酶学分析法以测定血清无机磷的含量。方法血清无机磷与次黄嘌呤核苷在嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）的催化下，生成次黄嘌呤和核糖１磷酸，黄嘌呤氧化酶氧化次黄嘌呤生成尿酸和过氧化氢，过氧化氢与４氨基安替比林和２，４，６三溴３羟基苯甲酸在过氧化物酶的作用下，生成红色产物，在５０５ｎｍ有最大吸收。结果线性范围为０２５～５０ｍｍｏｌ／Ｌ，批内和批间平均变异分别为１１７％和２７９％，平均回收率为１０３４％，与紫外分光光度法比较，相关系数ｒ＝０９９８，Ｙ＝１０５６Ｘ－００５２。结论采用了２，４，６三溴３羟基苯甲酸的方法灵敏、准确、简便、快速、适合于半自动和全自动生化分析仪     

MRE11参与炎症小体信号通路激活的初步研究

目的：探究减数分裂重组蛋白11同系物A（MRE11）在不同刺激物诱导下炎症小体激活中的作用和地位。方法利用不同刺激物,如Poly（I∶C）、Poly（dA∶dT）、E．coli gDNA、293T gDNA和CPPD以及生殖疱疹病毒（HSV）等处理单核巨噬细胞THP-1,通过IL-1β酶联免疫吸附试剂盒（ ELISA）筛选出诱导激活炎症小体的有效刺激物;合成siMRE11干扰小RNA,转染THP-1细胞,免疫印迹检测MRE11干扰下调效率;利用筛选到的阳性刺激物处理MRE11干扰下调的细胞,采用ELISA和免疫印迹方法检测MRE11对细胞分泌炎性因子IL-1β水平和前胱天蛋白酶（pro-caspase）-1切割的影响。结果在MRE11干扰下调的THP-1细胞中,Poly（I∶C）、Poly（dA∶dT）、E．coli gD-NA和293 T gDNA 刺激激活细胞分泌的IL-1β水平以及前胱天蛋白酶-1切割的水平均有不同程度降低。结论MRE11参与由DNA以及RNA刺激激活的炎症小体信号通路。     

应用酶标仪酶法检测TG、TCH和GLU实验探讨

酶法检测甘油三酯（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣＨ）、葡萄糖（ＧＬＵ）具有准确、快速、操作简便等优点。普通分光光度计或半自动生化分析仪比色测定,试剂消耗量大,成本高。我们应用国产酶标仪（武警部队下发装备）采用酶法,对甘油三酯、总胆固醇和葡萄糖的检测进行了探索...     

影响FK-506在全血中分布的因素

目的分析影响FK-506在全血中分布的因素。方法全血和血浆的FK506浓度采用微粒子酶免疫测定法（Microparticle enzyme immunoassay MEIA），红细胞压积和红血球记数采用全自动血液细胞分析仪进行测定，HDL，VLDL和总胆固醇使用常规的生物化学方法进行测定。结果红细胞压积和红血球记数与FK-506的分布呈现正相关的关系，HDL、VLDL、总胆固醇和FK-506在血浆中的浓度密切相关，血浆白蛋白浓度与FK-506在血浆中分布没有相关性。结论红细胞压积和红血球记数严重影响全血中FK-506的分布，HDL、总胆固醇对FK-506在血浆中有一定的影响作用，血浆白蛋白浓度不影响在FK-506在血浆中的分布。     

对氧磷酶（Paraoxonase）的测定方法与临床意义

对氧磷酶（Paraoxonase)是结合在高密度脂蛋白（HDL）上的一种有机磷三酯化合物水解酶，最近研究表明，对氧磷酶可以保护低密度脂蛋白（LDL）的氧化，其活性与基因多态性被认为是动脉粥样硬化，冠心病的独立危险因素。本文综述Paraoxonase的生化特性，基因的多态性，与动物粥样硬化的关系及其酶活性和基因多态性的检测方法。