短期糖尿病大鼠血糖、糖化血清蛋白的动态变化及与体重、器官重量的相关分析

目的 :探讨糖尿病初期大鼠血糖、糖化血清蛋白及体重、器官重量的动态变化。方法 :Wistar雄性大鼠腹腔注射链脲菌素 (STZ)致糖尿病后分别观察 1d、3d、5 d、7d、14d,观察期满测血糖、糖化血清蛋白浓度 ,称体重、心、肝、脾、肺、肾、胸腺重量。结果 :糖尿病大鼠体重明显减轻 ,体重负增长率与血糖正相关 ;胸腺、脾重量明显减轻 ;胸腺重量与血糖、糖化血清蛋白水平显著负相关 ;脾重与糖化血清蛋白水平显著负相关 ;心脏重量与血糖负相关 ;肾重增加 ,与糖化血清蛋白水平高度正相关。结论 :短期糖尿病大鼠体重和器官重量发生明显改变 ,这种变化与血糖或糖化血清蛋白水平有关。     

人前列腺特异性抗原基因重组表达载体pPICZaC-m PSA的构建和表达

目的在毕赤酵母细胞中表达PSA，为临床的检测和治疗提供材料。方法经KT—PCR获得PSA全长cDNA并测序。将编码成熟PSA237氨基酸的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPICZα—C，该栽体含有AOXl启动子和a-factor信号肽序列，构建表达载体体pPICZαC—mPSA。甲醇诱导X33细胞表达rPSA，ELASA试剂盒筛选高表达rPSA的细胞株。结果获得了人PSA全长序列，构建了表达栽体pPICZα-mPSA。获得了高表达rPSA的酵母X33细胞株。表达产量为1．2mg／L。结论建立了重组人前列腺特异性抗原的毕赤酵母表达体系。规族化的生产有助于PSA的生物学特性的研究和临床检测和治疗的应用．     

人卵透明带重组融合基因及其表达载体的构建

目的构建人卵透明带蛋白3（zona pelludda 3，ZP3）／GST蛋白融合基因原核表达载体。方法利用PCR法扩增出去N端的信号肽和C端的跨膜区huZP3成熟蛋白编码基因。先将其克隆到pGEM-T载体，进行序列测定和分析，然后将huZP3核心DNA片断克隆入GST蛋白融合原核表达载体pGEX4T-1内。结果获得一个核苷酸长度约为1000bp的基因，与GenBank（NCBI：M60504）公布的ZP3基因序列有99％的同源性。DNA序列分析发现。有一个氨基酸出现变异。酶切鉴定后证明ZP3基因完整插入GST融合蛋白原核表达载体pGEX4T-1中。结论成功构建出含ZP3基因的GST融合蛋白原核表达载体。     

甜糖尿病雄鼠性腺重量和血糖、糖化血清蛋白、睾酮动态变化的分析

目的：探讨短期糖尿病雄性大鼠血糖、糖化血清蛋白、血清睾酮和性腺重要的动态变化。方法：Wistar雄性大鼠分为正常对照组（C）和糖尿病组（D）。糖尿病组分别观察1、3、5、7及14d。动物处死后,称量各性腺重量,检测血糖、糖化血清蛋白和血清睾酮。结果：糖尿病组血糖、糖化血清蛋白水平显著升高,血清睾酮于链脲菌素（STZ）注射3d后显著下降。糖尿病组附睾、精囊腺、前列腺重要显著降低;精囊腺、前列腺重量与血糖、糖化血清蛋白负相关,与血清睾酮正相关。结论：短期糖尿病雄鼠睾丸、附睾、精囊腺和前列腺发生明显变化,性腺变化与糖尿病代谢紊乱及血清睾酮水平密切相关。     

人卵透明带蛋白原核表达载体的构建

目的:构建人卵透明带蛋白(huZP3)基因原核表达载体。方法:利用PCR法扩增出含人卵透明带蛋白编码基因,先将其克隆到pGEM-T载体,进行序列测定和分析,然后将huZP3蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体pGEX4T-1上,酶切鉴定。结果:获得一个核苷酸长度约为1200bp的基因,同源比较结果表明,与GenBank(NCBI:M60504)公布的ZP3基因序列有100%的同源性。酶切表明ZP3基因正确插入原核表达载体pGEX4T-1。结论:成功构建出含ZP3基因的原核表达载体。     

人前列腺特异性抗原基因重组表达载体pPICZαC-m PSA的构建和表达

目的在毕赤酵母细胞中表达PSA,为临床的检测和治疗提供材料.方法经RT-PCR获得PSA全长cDNA并测序.将编码成熟PSA 237氨基酸的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,该载体含有AOX1启动子和α-factor信号肽序列,构建表达载体体pPICZαC-m PSA.甲醇诱导X33细胞表达rPSA,ELASA试剂盒筛选高表达rPSA的细胞株.结果获得了人PSA全长序列,构建了表达载体pPICZα-m PSA.获得了高表达rPSA的酵母X33细胞株,表达产量为1.2 mg/L.结论建立了重组人前列腺特异性抗原的毕赤酵母表达体系,规模化的生产有助于PSA的生物学特性的研究和临床检测和治疗的应用.     

短期糖尿病雄鼠睾丸氧自由基和抗氧化水平的研究

目的：探讨大鼠睾丸组织在短期糖尿病状态下氧自由基和抗氧化水平的变化。方法：48只Wisar雄性大鼠被随机分为6组，每组8只：其中l组腹腔注射枸橼酸缓冲液作为正常对照组，其余5组腹腔注射链脲菌素，分别观察l，3，5，7，14d。观察期满后断头处死，取睾丸，制备组织匀浆，分别检测组织中SOD、MDA、GSH、GST、GSH-px、N0和NOS水平。结果：与正常大鼠相比，糖尿病大鼠睾丸组织中总SOD活力下降，MDA含量上升；GSH含量和GSH-px活力无显著性变化，GST活力下降；NO含量及NOS活力均下降。结论：睾丸组织的氧自由基，主要是O2^-含量增加以及N0合成受抑制，可能与糖尿病大鼠性与生殖功能障碍有关。     

短期糖尿病雄鼠前列腺细胞凋亡的动态研究

目的:探讨短期糖尿病雄鼠前列腺细胞凋亡状态的动态变化。方法:通过链脲菌素制成糖尿病鼠模型,应用常规组织学方法,原位末端转移酶标记技术(TUNEL),流式细胞术分别研究1d(D1组),3d(D3组),5d(D5组),7d(D7组),和14d(D14组)短期糖尿病腹侧前列腺细胞凋亡和细胞周期的变化。结果:D5组、D7组及D14组前列腺上皮细胞具有明显的凋亡形态学改变,TUNEL阳性细胞百分率显著高于对照组,D3组TUNEL阳性细胞百分率显著低于对照组(C组)D3组、D5组G_0/G_1期细胞所占比例显著低于对照组,D14组S期细胞所占比例显著高于对照组,D14组G_2/M期细胞所占比例显著低于C组,D3组凋亡细胞比例显著低于C组,D7组及D14组凋亡细胞比例显著高于对照组。结论:糖尿病在短期内诱导雄鼠前列腺细胞周期改变及细胞凋亡。     

人ZP3融合蛋白的原核表达

目的:在原核中表达人卵透明带蛋白3(zone pelluc ida,ZP3)。方法:将人ZP3基因的核心片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中。经酶切和序列分析后,用重组质粒转化大肠杆菌BL21,并经丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-ZP3融合蛋白。结果:重组菌株明显诱导表达出预期分子质量为63 000 D的融合蛋白。结论:成功地构建GST-ZP3融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中表达GST-ZP3融合蛋白,为进一步开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础。     

重组人前列腺特异性抗原纯化与活性鉴定

目的：纯化和鉴定重组人前列腺特异性抗原（PSA）,为PSA 的生物学特征研究、临床检测和治疗应用提供关键材料。方法： 采用阳离子交换层析技术纯化重组PSA（rPSA）,利用Western blotting 鉴定其特异性,利用PSA底物S-2586检测rPSA活性。结果：最适甲醇诱导浓度为1.5%,经鉴定纯化的rPSA为人PSA。在不同反应条件下,在3.5 h内酶活性与时间成正比,rPSA 活性显著高于正常精浆PSA酶活性（P<0.05）,酶活性的最适温度为30℃。结论：成功纯化出具有酶活性的rPSA。