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1.
2.
3.
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Myo10蛋白敲除稳定细胞系,探讨Myo10对结肠癌细胞SW620形态、增殖和细胞周期的影响。方法:根据sgRNA设计网站选择并合成5对针对人Myo10基因的sgRNA序列,经退火形成双链后,用T4DNA连接酶将其与经BsmBⅠ线性化的Lenti-CRISPR v2慢病毒载体连接,包装成病毒感染SW620细胞。经嘌呤霉素筛选后用Western Blot检测Myo10的表达,选择敲除效率最高的sgRNA序列,进行单克隆细胞筛选,最后再用Western Blot验证Myo10是否敲除。用显微镜、Rhodanmine phalloidin细胞染色观察细胞形态;CCK-8实验及流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期变化。结果:经测序鉴定成功构建了5对sgRNA-LentiCRISPR v2慢病毒载体,嘌呤霉素筛选后得到Myo10完全敲除的SW620细胞系。敲除Myo10的SW620细胞形态变圆,其增殖能力明显减弱,细胞周期S期比例增加。结论:成功构建Myo10完全敲除的SW620稳定细胞系;Myo10可影响SW620细胞形态和增殖能力;该实验为后续深入探讨Myo10作为结直肠癌潜在靶向基因的机制研究奠定了基础。 相似文献
4.
目的:观察甘肃产藏药五脉绿绒蒿有效部位对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响.方法:在给药的基础上,采用sc CCl4、喂饲高脂低蛋白复合饲料并饮用20%乙醇来复制肝纤维化动物模型,6周后对大鼠肝组织免疫组化染色,检测TGF-β1的表达,同时检测血清中AST、ALT和TGF-β1的水平以及肝组织中Hyp的含量.结果:复合因素肝纤维化造模结束后,与模型对照组比较,甘肃产藏药五脉绿绒蒿醇提物、黄碱组以及总黄酮能明显降低血清ALT、AST以及肝组织中Hyp与胶原蛋白的含量,显著降低血清与肝组织中TGF-β1的表达,同时发现总黄酮的作用有一定的量效关系.结论:甘肃产藏药五脉绿绒蒿醇提物及其中的总黄酮对CCl4复合因素诱导的肝纤维化大鼠具较好的保护作用,对TGF-β1表达的抑制作用可能是其作用机制之一. 相似文献
5.
目的对比研究红芪不同提取物对环磷酰胺(CTX)所致免疫低下小鼠的影响及相关化学成分含量。方法按照体重将昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、对照组、醇提物组、水提物组、醇沉物组、残留物组。用CTX 40 mg·kg-1造成免疫低下模型。对照组灌胃参芪颗粒5 g·kg-1,其他各组灌胃相应受试样品2 g·kg-1,正常组和模型组灌胃等量0.9%Na Cl,每天给药1次,连续15 d。称重计算小鼠脏器指数,腹腔注射5%鸡红细胞悬液(CRBC)测定腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数,用50%二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液致迟发型超敏反应测定OD值,用5%CRBC致敏测定血清溶血素OD值,尾静脉注射印度墨汁测定网状内皮系统吞噬指数及吞噬系数。用UV法测定多糖、总皂苷含量。结果模型组各指标与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。给药后,正常组、模型组与醇提物组、水提物组、醇沉物组、残留物组的胸腺指数(g·kg-1)分别为2.55±0.88,1.04±0.74,1.24±0.79,1.81±0.62,1.97±0.83,1.09±0.75,水提物组、醇沉物组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);水提物组、醇沉物组与残留物组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。这6组的腹腔巨噬细胞吞噬百分率(%)分别为48.58±5.51,28.54±3.15,35.28±6.03,36.99±6.78,39.89±8.33,27.91±8.02,醇提物组、水提物组、醇沉物组的吞噬百分率与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);水提物组、醇沉物组与残留物组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。这6组的迟发型超敏反应OD值分别为0.53±0.16,0.23±0.09,0.30±0.10,0.37±0.10,0.36±0.11,0.28±0.14,水提物组、醇沉物组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。各提取物中多糖和总皂苷含量:醇提物(6.35%;6.57%),水提物(22.64%;7.68%),醇沉物(42.15%;1.86%),残留物(4.33%;5.37%)。结论红芪水提物和醇沉物均能对抗CTX的免疫抑制作用,有一定的增强体液免疫和细胞免疫作用,可增强机体的非特异性免疫和特异性细胞免疫功能。推测多糖是其对抗CTX免疫抑制作用的主要活性部位。 相似文献
6.
目的 建立不同产地甘松Nardostachys jatamansi的HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法,并结合化学模式识别法探究不同产地甘松化学成分差异,评价不同产地、不同批次甘松药材的质量。方法 采用HPLC法建立甘肃、青海、四川16批次甘松的指纹图谱,并对指标成分进行含量测定。进行相似度评价结合聚类分析(cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)等模式识别技术进行分析。结果 16批次甘松HPLC指纹图谱共匹配到60个共有峰,通过与对照品比对,指认出绿原酸、丁香酸、蒙花苷、甘松新酮、马兜铃酮5个色谱峰,指纹图谱相似度范围为0.943~0.999。16批次甘松样品中绿原酸、丁香酸、蒙花苷、甘松新酮、马兜铃酮含量测定变化范围分别为1.046 5~4.975 3、0.028 4~0.108 7、0.016 7~0.157 4、7.442 1~37.869 1、0.673 7~4.306 5 mg/g,5种成分在不同产地间均具有显著性差异。HCA将16批次甘松分为3类;PCA得不同批次甘松质量差异较大;经OPLS-DA筛选出了绿原酸、丁香酸、甘松新酮、马兜铃酮等31个差异成分。指纹图谱综合评价结果表明S4、S7、S10甘松样本质量较好。结论 确定了绿原酸、丁香酸、甘松新酮、马兜铃酮4种指标成分作为评价甘松质量差异的潜在标志性成分,建立的甘松HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法稳定、可靠,可为甘松药材的质量控制、综合评价和临床应用的有效性提供科学依据。 相似文献
7.
目的探讨支架式建构主义学习理论在药理学教学中的应用与效果。方法选择我校中医学本科2011级学生进行外周神经系统药物理论教学比较,其中A班采用支架式建构主义教学模式,B班采用传统教学模式。结果 A班的阶段性考试平均成绩比B班高,2班考试成绩比较差异有高度统计意义(P〈0.01)。结论支架式建构主义学习理论在提高药理学学习效率等方面有明显的优势。 相似文献
8.
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10.
目的:优选牛蒡甘草汤的最佳提取工艺条件。方法:以牛蒡苷含量和干膏得率的综合评分为指标,采用L9(34)正交设计法,对影响其提取率的重要因素(A)加水量、(B)煎煮时间、(C)煎煮次数进行优选。采用HPLC测定牛蒡苷的含量,Hypersil-Keystone C18色谱柱,流动相甲醇-水(43∶57),检测波长280 nm。结果:优选的最佳水提工艺条件为8倍量水,煎煮3次,每次2 h。验证试验显示牛蒡苷质量分数为20.69%,干膏得率为24.37%。结论:优选出的牛蒡甘草汤水提取工艺稳定可行。 相似文献