GSK-3β抑制剂对U251胶质瘤细胞的增殖抑制

目的探讨GSK-3β抑制剂(LiCl)对人脑胶质瘤U251细胞株增殖作用,为下一步治疗脑胶质瘤提供临床治疗靶点。方法应用MTT法,HE染色法以及免疫组化方法来观察LiCL对人胶质细胞瘤株U-251增值的抑制作用、量效关系。结果LiCL对人胶质瘤细胞有明显的抑制作用,其药物作用时间为24、48h的IC50分别为138.98mg/ml、53.15mg/ml,且呈良好的量效关系,抑制作用与浓度呈正相关。结论LiCL是有效的、能抑制胶质瘤细胞生长的药物。     

α-细辛醚对小鼠旷场行为的影响

目的探讨α-细辛醚对小鼠旷场行为的影响。方法将105只30dFvb wt小鼠分成7组,采用不同浓度α-细辛醚(1～24mg/kg)分别对小鼠进行处理,分析α-细辛醚对小鼠旷场行为的影响。结果高浓度(9～24mg/kg)α-细辛醚对小鼠探索性、兴奋性、运动性有抑制作用;低浓度(3～6mg/kg)α-细辛醚对小鼠的旷场行为有兴奋作用。结论α-细辛醚对中枢神经系统有双向调节作用。     

30日龄FMR1基因敲除小鼠的旷场行为观察

目的观察30日龄FMR1基因敲除小鼠的旷场行为进行。方法在旷场实验中采取4个区域分割采用VIEWER软件及目测对30日龄的FMR1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行旷场行为观察,数据采用多因素方差分析处理。结果采用VIEWER软件分析发现:FMR1基因敲除小鼠在第4区域的停留时间、运动长度、进入格次数、伸头较野生型小鼠显著增加,而在在第1区域的Tailmoves较野生型小鼠显著减少,FMR1基因敲除小鼠在各区的速度,站立不动与野生型小鼠无明显差别。FMR1基因敲除小鼠在第3区域的运动长度和进入格次数也较野生型小鼠显著增加,FMR1基因敲除小鼠在第2区域和第3区域的点头较野生型小鼠显著增加,P<0.05。采用目测分析发现:FMR1基因敲除小鼠在第4区域进入次数较野生型小鼠增加(P<0.05),FMR1基因敲除小鼠跨线次数较野生型小鼠显著增加,P<0.05。结论30日龄FMR1基因敲除小鼠的行为异常,运动性和兴奋性较野生型小鼠增高。采用VIEWER软件较目测更更加灵敏、客观、准确。     

大鼠脑组织中谷氨酸脱羧酶65基因的克隆和序列测定

目的探讨克隆大鼠脑组织中谷氨酸脱羧酶65基因。方法采用RT-PCR方法,将大鼠脑组织中的mRNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增谷氨酸脱羧酶65基因片段,克隆入T载体,并经序列测定。结果RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度1758bp相符,T载体克隆测序与大鼠谷氨酸脱羧酶65100%同源。结论采用RT-PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织中的谷氨酸脱羧酶GAD65基因克隆,为该基因的体外表达打下基础。     

采用PCR方法检测Fmr1基因敲除小鼠的基因型

目的为Fmr1基因敲除小鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。方法设计两对引物扩增野生型Fmr1基因和Fmr1缺陷突变基因的DNA片段,用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度,并将所得基因型结果与经典的western blot方法比较。结果野生型仅在800bp处有一条条带,突变纯合子仅在500bp处有一条条带,杂合子则在500bp和800bp处出现两条条带。用PCR方法获得的Fmr1基因分析结果与经典的western blot方法获得的结果完全一致。结论用PCR方法分析Fmr1基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。