原发性肝癌发生机制的研究进展

原发性肝癌是最常见的10种恶性肿瘤之一,在我国占居民恶性肿瘤死亡的第2位.国内外诸多学者长期致力于防治肝癌的研究.笔者综述了近年来关于原发性肝癌的病因,包括外环境致癌因素(病毒、寄生虫、细菌的感染、黄曲霉毒素的摄入、水源污染以及吸烟、饮酒)和自身遗传影响因素的流行病学的研究进展,重点阐明它们在原发性肝癌发生过程中的具体作用机制.对预防和治疗原发性肝癌具有重要意义,为今后进一步向基因、蛋白水平方向的深人研究提供一定参考.     

肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的比较

目的 比较肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的表达变化情况,从中寻找特异性标志物.方法 用双向凝胶电泳分离正常人,慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血清蛋白质,结合质谱技术对差异点进行鉴定; Western blot检测结合珠蛋白β链以验证蛋白质水平的表达.计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析和LSD检验进行两两比较.结果 4组血清的双向电泳图谱经软件匹配分析,并与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱相结合,成功鉴定出结合珠蛋白,SAA1、SP40等30个差异蛋白质点,K cluster聚类分析不同的变化模式.在差异蛋白质点中,7个蛋白质点均为结合珠蛋白,呈现由正常→肝炎→肝硬化持续下调、到肝癌又上调的模式.Western blot证实结合珠蛋白β链的表达与双向电泳表达相一致.结论 在肝癌发生的动态过程中各疾病阶段的血清蛋白质差异表达有4种明显变化模式,可能为肝癌的早期诊断和预后提供依据,与肝癌发生发展相关的结合珠蛋白很可能是肝硬化发展到肝癌的一个潜在早期诊断标志物.     

SELDI—TOF—MS技术建立早期肝硬化患者血清蛋白质谱筛选模型

目的：比较早期肝硬化患者和健康人的血清蛋白质谱并建立相关血清诊断模型。方法：用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）技术及CM10蛋白芯片对50例早期肝硬化患者、50例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析。结果：早期肝硬化患者与健康人对照组共有25个差异有统计学意义的蛋白质峰;建立诊断模型的灵敏度为96％（48／50）,特异度为90％（45／50）,准确率为93％（93／100）。结论：两组人的蛋白质谱有明显的差异,建立的诊断模型能够区分早期肝硬化患者与健康人,SELDI—TOF—MS技术在诊断及特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。     

二甲双胍联合2-脱氧-D-葡萄糖对肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的 研究二甲双胍(Met)和2-脱氧-D-葡萄糖(2DG)联合用药对肝癌HepG2、Hep3B细胞增殖及凋亡的影响及其机制.方法 Wst-1试剂检测Met和2DG单独及联合应用对HepG2、Hep3B细胞增殖的影响;光学显微镜下观察Met、2DG单独及联合作用后HepG2、Hep3B细胞形态上的改变;流式细胞术观察各组药物处理后细胞凋亡的变化;Western blotting测定HepG2细胞的Caspase-3、PARP、Mcl-1的表达情况.结果 药物联合组HepG2细胞的存活率为(22.48 ±0.51)％,与对照组(100.00±5.05)％、Met组(80.68±5.10)％和2DG组(72.56±4.34)％比较,差异具有统计学意义(P ＜0.001;P＜0.001;P=0.001).联合组Hep3B细胞的存活率为(29.16±1.34)％,与对照组(100.00±1.23)％、Met组(59.58±1.92)％和2DG组(33.87±1.95)％比较,差异具有统计学意义(P ＜0.001;P＜0.001;P=0.001).显微镜下,Met和2DG联合用药组HepG2细胞数量明显减少,而漂浮的死亡细胞增多;而联合组虽然也造成Hep3B细胞密度减少,但并未见显著增加脱落细胞.流式细胞术检测HepG2细胞联合用药组的凋亡率为(39.63±0.21)％,与对照组(7.12±0.14)％、Met组(12.56±0.35)％和2DG组(15.16±1.93)％比较,差异具有统计学意义(P ＜0.001;P ＜0.001;P=0.001);Hep3B细胞联合用药组的凋亡率为(12.58±1.03)％,与对照组(2.82±0.51)％和Met用药组(8.98±0.86)％比较,差异具有统计学意义(P ＜0.001;P=0.007),与2DG用药组(12.40±1.78)％比较,差异不具有统计学意义(P=1.000).Western blotting进一步显示,联合用药组可以观察到Caspase-3激活、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)切割以及Mcl-1表达降低.结论 Met和2DG联合用药可以有效抑制HepG2、Hep3B细胞的增殖,并诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与激活Caspase-3、切割PARP底物、降低Mcl-1蛋白表达有关.     

FTL在慢性肝病患者血清中的表达及临床意义

目的 探讨血清铁蛋白轻链(Ferritin light chain, FTL)在慢性肝脏疾病进展过程中表达水平的变化及其潜在的临床应用价值。方法 利用iTRAQ定量蛋白组学技术对随机选取的慢性肝病患者与健康者血清进行比较研究, 酶联免疫吸附法（ELISA）检测显著性差异蛋白FTL在不同阶段慢性肝病患者和健康者血清中的含量, 应用统计学方法对FTL在不同阶段慢性肝病中表达量进行组间比较,并分析其与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清铁蛋白(Serum Ferritin, SF)的相关性。结果 通过对慢性肝病患者与健康者血清样品进行质谱分析, 筛选并鉴定出差异表达蛋白69个,其中FTL是慢性肝病患者血清中表达明显上调的差异蛋白。ELISA检测不同阶段慢性肝病患者和健康者血清中的FTL表达水平,结果显示不同阶段慢性肝病患者血清中的FTL表达均高于健康者,且随着肝病病情进展呈下降趋势;统计学分析显示:FTL与ALT、AST、SF呈正相关性(P均＜0.01）。不同阶段慢性肝病患者血清中FTL表达差异均具有统计学意义(P＜0.01）,其表达水平和肝病进展程度呈负相关性(rs = -0.405,P ＜0.01)。结论 FTL与慢性肝脏疾病密切相关, 其表达水平不仅能体现肝脏的损伤状况,还能反映肝脏疾病的进展情况,在慢性肝病诊断、监测和治疗方面均具有良好的应用前景。     

两种蛋白芯片筛选血清蛋白标志物的对比分析

目的 从CM10、IMAC3-Cu这两种芯片中选择适合应用于血清蛋白质指纹图谱研究的芯片种类.方法 选择慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者和健康人血清各13例,采用CM10、IMAC3-Cu两种蛋白芯片,经SELDI-TOF-MS技术对样本进行检测比较.结果 在2000-50000Da范围内,CM10和IMAC3-Cu芯片在各实验组捕获的有效蛋白峰数的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CM10能得到更多慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者和健康人的有意义的蛋白峰值,能更好的应用于血清蛋白组学的实验研究.     

体外染尘细胞模型中不同时段HSP70各亚型的诱导表达

本实验拟观察染尘巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)各亚型(HSP70-1、HSP70-2,HSP70-hom)诱导表达的时间-效应关系。采用大鼠巨噬细胞(AMs)和人胚肺成纤维细胞(HELF)组成体外模型,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,检测二氧化硅粉尘处理AMs培养上清液刺激HELF细胞分别在0、2、8、12、16、24h等多个时段HSP70各亚型表达的情况。同时用二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照。结果HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom基因表达与培养时间呈现明显的时间-效应关系。HSP70可能参与了矽肺发生的氧化应激机制,且具有不同的诱导动力学特征。     

两种蛋白芯片筛选血清蛋白标志物的对比分析

目的从CM10、IMAC3-Cu这两种芯片中选择适合应用于血清蛋白质指纹图谱研究的芯片种类。方法选择慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者和健康人血清各13例,采用CM10、IMAC3-Cu两种蛋白芯片,经SELDI-TOF-MS技术对样本进行检测比较。结果在2000-50000Da范围内,CM10和I-MAC3-Cu芯片在各实验组捕获的有效蛋白峰数的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论CM10能得到更多慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者和健康人的有意义的蛋白峰值,能更好的应用于血清蛋白组学的实验研究。     

SELDI在筛选从慢性活动性肝炎到早期肝硬化两阶段血清标记物中的应用

目的比较慢性活动性肝炎患者和早期肝硬化患者血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析／电离飞行时间质谱技术（SELDI．TOF—MS）及CM10蛋白芯片对28例慢性活动性肝炎患者、26例早期肝硬化患者血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立慢性活动性肝炎与早期肝硬化患者的比较筛选模型。结果慢性活动性肝炎组与早期肝硬化组共有26个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度92％（24／26）,特异度86％（24／28）,准确率为89％（48／54）。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分慢性活动性肝炎患者与早期肝硬化患者,SELDI技术在诊断及特异性蛋白生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用前景。     

离体染尘模型中人胚肺成纤维细胞血红素氧合酶-1及热休克蛋白27表达的时间-效应观察

目的观察染尘巨噬细胞(AM)上清液对人胚肺成纤维细胞(HELF)血红素氧合酶-1(HO-1)及热休克蛋白27(HSP27)诱导表达的时间-效应关系。方法经二氧化硅(SiO2)粉尘处理的AM上清液刺激HELF组成离体染尘模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测0、2、8、12、16、24 h培养时段的HO-1、HSP27mRNA表达。同时以二氧化钛(TiO2)为对照。结果HO-1、HSP27mRNA相对表达丰度有随时间变化的趋势,且时间因素的作用随着SiO2、TiO2组的不同而有所区别(P<0.05)。结论染尘AM上清液对HELF的HO-1、HSP27表达的诱导具有时间-效应关系,且2种应激蛋白的表达时相不同,两者可能交错对细胞起到保护作用。