大鼠神经干细胞与“癫痫样细胞”体外共培养后的分化发育

背景：在癫痫微环境神经干细胞能否被诱导分化为异常放电的“癫痫神经元”？癫痫微环境包括两种情况：一是“无镁”细胞外液，二是与癫痫细胞共培养。其中前者比后者的致癫痫作用强。 目的：模型模拟体内癫痫微环境，将大鼠海马神经干细胞和正常海马神经元以及“癫痫神经元”体外共培养，观察干细胞的分化发育情况。 设计：重复测量观察。 单位：哈尔滨医科大学附属第一医院。 材料：实验于2005—08／2007—04在哈尔滨医科大学病原学教研室及药理学教研室完成，选用150只新生Wistar大鼠，雌雄不拘，由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。兔抗鼠突触素抗体购自美国LabVision公司。携带增强型绿色荧光蛋白标记基因的血清型2型腺相关病毒购自北京本元正阳公司。Axopatch 200B放大器为美国Axon公司产品。5111A示波器为美国Tektronix公司产品。 方法：①分离大鼠海马神经元，采用“无镁”外液处理神经元建立“癫痫神经元”模型。常规方法培养大鼠海马神经干细胞，将绿色荧光蛋白标记的神经干细胞分别与正常海马神经元、“癫痫神经元”共培养14d。②应用膜片钳记录与两种神经元共培养后细胞突触后电位；利用免疫荧光检测神经千细胞突触素抗体染色情况；将神经干细胞分化的神经元放入“无镁”外液，应用膜片钳记录其突触后电位。 主要观察指标：①海马神经干细胞与两种神经元共培养14d后突触后电位、突触素抗体染色结果。②分化后神经元在“无镁”外液中突触后电位及“癫痫样放电”情况。 结果：①神经干细胞与正常海马神经元共培养后，膜片钳记录到60％（6／10）神经干细胞14次，5min兴奋性突触后电位；与“癫痫神经元”共培养后记录到12次，5min兴奋性突触后电位。②神经干细胞分别与正常海马神经元及“癫痫神经元”共培养后，免疫荧光检测均显示80％（12／15）表达绿色荧光蛋白的干细胞突触素抗体染色阳性。③60％（9／15）干细胞分化的神经元在“无镁”外液中出现14次，5min时程约10s的兴奋性突触后电位，未记录到“癫痫样放电”。 结论大鼠海马神经干细胞与“癫痫神经元”体外共培养后可形成功能性突触，未转变成“癫痫神经元”。     

急性颅脑损伤患者垂体前叶功能紊乱的危险因素分析

目的探讨急性颅脑损伤(TBI)患者垂体前叶功能紊乱的危险因素。方法符合入选标准的82例TBI患者,于伤后~3 d采取静脉血,检测垂体激素水平,与正常值作对照;同时将对垂体激素分泌有影响的14项可能因素进行统计学分析。结入选的TBI患者中,82.93%发生垂体前叶激素分泌紊乱,经Logistic回归分析表明,GCS评分3~8分和中线结构移位≥0.5 cmTBI患者伤后前垂体功能紊乱的危险因素(P0.05)。结论 TBI后垂体前叶激素分泌紊乱发生率极高,脑损伤程度和中线结构位是发生TBI后垂体前叶激素分泌紊乱的重要危险因素。     

低糖肠内营养对重度颅脑损伤患者的影响

我院自2004年以来,对重度颅脑损伤患者分别采用普通配方和低糖配方进行早期肠内营养（enteral nutrition,EN）,观察其对患者的代谢和预后的影响。     

Wnt-1和PAR-1在胃癌中的表达及其病理特征的相关性研究

目的探讨Wnt-1和PAR-1在胃癌的表达与临床病理学特征的关系以及2者在胃癌组织中表达的相关性。方法用免疫组化方法检测78例胃癌及其癌旁胃组织中Wnt-1和PAR-1的表达情况,运用统计学分析Wnt-1和PAR-1在胃癌的表达与临床病理学特征的关系,以及Wnt-1和PAR-1在胃癌的表达的相关性。结果 Wnt-1和PAR-1在胃癌的表达明显高于正常胃组织(P<0.05);Wnt-1和PAR-1的表达阳性组具有更高的淋巴结转移率(P<0.05);Wnt-1和PAR-1的表达与患者的性别和年龄无关,与肿瘤的大小、肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况以及TNM分期密切相关(P<0.05);且Wnt-1和PAR-1在胃癌中的表达成正相关。结论 Wnt-1及PAR-1的表达可促进胃癌的侵袭和转移。2者高表达均与胃癌的浸润深度、区域淋巴结转移、TNM分期、淋巴管浸润及较高淋巴结转移率有关,可作为胃癌恶性程度的预测因子,并且2者在胃癌组织中的表达呈正相关性。     

蛛网膜下腔注氧治疗脑干损伤临床分析

我们自1993年以来，采用蛛网膜下腔注氧的方法，辅助治疗原发性和继发性脑干损伤22例，与对照组相对比，在加速患者苏醒方面取得满意效果，现报告如下。1！闲床资料11一般资料蛛网膜下腔注氧组（以下简称治疗组）：22例病人中男匕例、女7例，年龄最大％岁，最小4岁，平均年龄32．5岁，其中原发脑子伤6例，继发脑于伤16例。后者中，脑控裂伤件硬膜下或脑内血肿匕例。广泛脑挫裂伤不伴颅内血肿3例。16例均为脑而时间过长造成继发脑干损伤，入院时格拉斯哥计分4计者3例j分者问例。6分考7例。对照组：在同期住院病入中随机抽样，格拉斯哥计分4分…     

神经元和胶质细胞共培养方法的建立

目的介绍改良的Banker共培养方法,并通过膜片钳、原子力显微镜检验神经元的生长状态。方法利用烙铁在培养皿底面滴入4个高度约为0.1mm的石蜡,以支持盖玻片建立共培养体系。当星形胶质细胞生长至底面积70%~80%后,将胰酶消化、分离的神经元接种在盖玻片上,4h后翻转盖玻片并移到含有星形胶质细胞的培养皿内,进行共培养,4~5d半量换液。膜片钳记录神经元动作电位和自发性突触后电位,原子力显微镜观察培养25d的神经元生长状态。结果神经元最长培养40d,接种后4h~6d和9~13d是两个快速增长期。膜片钳实验中,神经元能够产生动作电位,并且随刺激强度增大动作电位频率增加;能够记录到神经元的兴奋性突触后电位(EPSP)、抑制性突触后电位(IPSP)和自发性动作电位(sAP)。原子力显微镜观察可见神经元胞体呈典型锥体形状,细胞表面光滑平整。结论神经元和胶质细胞共培养方法稳定性强,容易操作,培养的神经元存活时间长、生长状态良好。     

体外癫痫神经元细胞膜显微结构的研究

目的 利用原子力显微镜观察体外癫痫神经元细胞膜显微结构.方法 将培养14 d的神经元放入"无镁"细胞外液处理3 h后,再重新放回含镁的正常细胞外液培养,利用膜片钳记录神经元的自发性电活动.将"无镁"细胞外液处理3h的神经元定为实验组,将未经"无镁"外液处理的神经元定为对照组.分别在80 μm×80 μm,2μm×2 μm和500 nm×500 nm扫描范围,对两组神经元细胞膜表面进行扫描,同时测量两组神经元表面相关结构的直径和深度.结果 膜片钳提示"无镁"细胞外液处理3 h和恢复正常外液14 d时,神经元存在自发的癫痫样放电.在扫描范围为80 μm×80 μm时,两组神经元细胞膜表面光滑;在2 μm×2 μm时,两组神经元细胞膜表面出现一些小凹;在500 nm×500 nm时,实验组神经元表面小凹的直径和深度分别为(114.86±9.33)nm和(5.71±0.69)nm,对照组为(116.4±9.13)nm和(5.69±0.71)nm,两组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 原子力显微镜是进行细胞膜显微结构观察的良好工具;"无镁"外液处理神经元3 h,神经元细胞膜显微结构未发生改变.     

Effect of hyperbaric oxygen on cytochrome C, Bcl-2 and bax expression after experimental traumatic brain injury in rats

Objective: To explore the effects of hyperbaric oxygen (HBO) treatment on the neuronal apoptosis at an earlier stage and the expressions of Cytochrome C (Cyt C), Bcl-2 ( B-cell lymphoma-2 family) and Bax ( Bcl-2 associated X protein) in rat brain tissues after traumatic brain injury (TBI). Methods: Forty adult rats were divided into two groups, i.e. , Group A (the rats with untreated TBI) and Group B (rats with HBO treatment after TBI). Sections of brain tissues of these two groups were then detected at 3,6, 12,24, 72 hours after TBI by immunohistochemistry and electronmicroscope, respectively. Results: HBO treatment could up-regulate the expression of Bcl-2 within 72 hours, reduce the release of Cyt C from mitochondria, attenuate the formation of dimeric Bax and alleviate the mitochondrial edema within 24 hours after TBI. Conclusions: HBO treatment can alleviate neuronal apoptosis after TBI by reducing the release of Cyt C and the dimers of Bax and up-regulating the expression of Bcl-2.     

重型颅脑损伤单侧去骨瓣减压术后发生对侧硬膜下积液的危险因素分析

目的探讨重型颅脑损伤（TBI）单侧去骨瓣减压术（DC）后发生对侧硬膜下积液（SDE）的危险因素。方法选择2009年2月至2012年6月收治的重型TBI并行单侧DC的病人179例,观察其发生对侧SDE的情况,并选用与发生对侧SDE可能相关的11项因素进行统计学分析。结果179例重型TBI行单侧DC后发生对侧SDE 16例,其发生率为8.94%;单因素分析显示外伤性蛛网膜下腔出血、基底池受压、对侧蛛网膜撕裂、减压窗脑外疝4项因素对其发生有显著影响（P〈0.05）;多因素Logistic回归分析显示对侧蛛网膜撕裂（优势比为27.560,95%置信区间为2.314-341.231;P〈0.05）和减压窗脑外疝（优势比为5.921,95%置信区间为1.017-29.334;P〈0.05）是发生对侧SDE的两种独立危险因素。结论对侧蛛网膜撕裂和减压窗脑外疝可增加重型TBI单侧DC后发生对侧SDE的风险。