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目的:研究少汗型外胚层发育不良症 EDA‐A1基因突变体对人脐静脉内皮细胞(ECV )周期和增殖活性的影响。方法构建 EDA‐A1基因编码序列(CDS)突变体和野生型的真核表达载体 pcDNA3.1(‐)‐EDA‐A1‐M /W ,转染人脐静脉内皮细胞,逆转录 PCR(RT‐PCR)扩增 EDA‐A1基因,蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测 EDA‐A1蛋白表达,M TT 法、流式细胞术检测EDA‐A1基因突变体对 ECV 细胞增殖和细胞周期的影响。结果 RT‐PCR 、Western blot 结果显示,野生型组和突变体组 ECV细胞表达 EDA‐A1基因及其蛋白,而空质粒转染组[pcDNA3.1(‐)]和空白对照组细胞无表达。与对照组(空质粒租)相比,突变体组 ECV 细胞增殖活性下降,生长抑制率为45.70%(P<0.01),野生型细胞增殖活性无明显改变(P>0.05)。突变体组中有更多细胞进入 G0/G1期、S 期;野生型组 S 期细胞增多,G2/M 期细胞明显减少(P<0.05)。结论突变体和野生型 EDA‐A1基因对 ECV 细胞增殖和细胞周期有不同的生物学功能。 相似文献
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目的研究唾液中幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)与胃肠疾病的关联性,探讨幽门螺杆菌唾液检测的意义。方法采用细菌培养法,分别对163例胃肠疾病患者的唾液(实验组)和27例非胃肠疾病患者的唾液(对照组)进行检测,并测定阳性样本的Hp分离菌株尿素酶活性及菌液pH值。结果 163例胃肠疾病患者的唾液中有24例(14.72%)检测出Hp,27例非胃肠疾病患者的唾液中有18例(66.67%)检测出Hp。实验组24例Hp分离菌株尿素酶活性高于对照组18例Hp分离菌株,pH值低于对照组,差别具有统计学意义(P〈0.05)。结论唾液中幽门螺杆菌致病性可能存在差异,唾液中尿素酶活性较高、菌液pH值较低的幽门螺杆菌可能与部分胃肠疾病的发生发展相关。Hp的唾液检测作为一种无创,无痛,安全的检测方法值得深入研究。 相似文献
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目的 检测抑癌基因RUNX3 启动子区CpG 岛甲基化状态及其在 BTCC 中 mRNA 和蛋白表达水平.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation - specific PCR,MSP)技术检测 BTCC 中RUNX3 基因启动子区域甲基化状态,RT - PCR 和 Western blot 法分别检测其 mRNA 和蛋白表达水平.结果 RUNX3基因在正常膀胱组织中未发生甲基化,而在 BTCC 组织中甲基化频率占46.9%(15/32),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).在15例启动子异常甲基化的癌组织标本中,14 例同时伴有 RUNX3 基因表达缺失或下调,二者存在明显的相关性(r=0.6472,P=0.012).RUNX3 mRNA 和蛋白表达在正常膀胱组织和 BTCC 组织分别为93.8%(30/32)、34.4%(11/32),二组间表达差异有统计学意义(P相似文献
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HIF-1α、PTEN和P53在大肠癌中的表达和意义及其相关性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨HIF-1 α在大肠癌发生、发展中的作用以及抑癌基因PTEN、P53与HIF-1 α的相关性.方法 采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织标本和相应的癌旁正常黏膜组织中HIF-1αmRNA,PTENmRNA,P53mRNA的表达,并分析其相互关系.结果 HIF-1αmRNA在大肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织中的表达水平(t=12.47,P=0.00);HIF-1αmRNA的表达水平与肿瘤部位(t=0.05,P=0.96)性别无关(t=-0.37,P=0.72);而与Dukes分期呈正相关(t=6.43,P=0.00);PTENmRNA,P53mRNA在大肠癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织;HIF-1α和抑癌基因PTEN、P53之间表现出一定程度的负相关.结论 HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展及浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌中抑癌基因PTEN、P53的缺失突变可致HIF-1 α表达水平增高. 相似文献
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目的:应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建膀胱移行细胞癌(BTCC)患者与正常人尿脱落细胞差异表达基因cDNA消减文库。方法:分别从BTCC患者与正常人尿液中提取总mRNA,用SMART技术反转录成cDNA,经过HaeⅢ酶切后将BTCC尿脱落细胞cDNA分为两组并接上接头,再与过量正常膀胱尿脱落细胞cD-NA进行两轮消减杂交及两轮抑制性聚合酶链反应(PCR),使得差异表达的DNA片段得以富集。PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌JM109构建成差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后,随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果:PCR鉴定有317个克隆载有主要在200~900bp之间呈随机分布的插入片段,片段插入率达82.6%,证实建库成功。对20个质粒测序结果经同源性比对分析,其中20个片段源于17个已知基因,1个克隆在GenBank中未检索到与其有相似性的基因序列,表明它们可能为BTCC差异表达的新基因。结论:该消减杂交文库质量可靠,其成功构建为进一步筛选、克隆BTCC差异表达基因提供了依据。 相似文献
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目的 探讨PBRM1和P53蛋白在肾癌中的表达和临床意义.方法 应用免疫组化方法对66例肾癌组织进行PBRM1和P53蛋白检测.结果 在肾癌组织中PBRM1和P53蛋白表达阳性率分别为62.1%和39.4%.PBRM1表达与肾细胞癌分级、分期相关(P<0.05),与肾癌的病理类型无关(P>0.05).P53表达与肾癌的病理类型、分级、分期无关(P>0.05).结论 PBRM1表达水平随着肾癌组织的病理分级和临床分期的增高而增高,可能与肿瘤的生物学行为有一定关系.P53表达在肾癌生物学行为不具有重要意义. 相似文献
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目的 建立一种快速、灵敏、特异的鉴定白假丝酵母菌实时荧光定量PCR方法.方法 利用实时荧光定量PCR反应体系对妇科白假丝酵母菌进行检测.鉴定结果与临床常规鉴定方法对照,评价其敏感度、特异度及重复性.结果 通过对50例样品的检测,结果显示实时荧光定量PCR法检测标本的鉴定结果与常规鉴定方法的结果对照,特异度为100%,敏感度为100%;最小能检测到10个拷贝数的重组质粒;批内重复实验和批间重复实验结果均与常规鉴定方法结果相符.结论 实时荧光定量PCR法鉴妇科白假丝酵母菌,特异度和敏感度高,重复性好,且快速、简便,该方法将有助于妇科白假丝酵母菌病的早期诊断和针对性治疗. 相似文献
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肿瘤缺氧是实体瘤常见现象,缺氧可触发机体产生一系列应急性保护反应,使得肿瘤细胞适应缺氧微环境.缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor,HIF-1α)是一个在人类大多数实体瘤中呈过度表达的转录因子,在肿瘤细胞适应缺氧、能量代谢、肿瘤血管生成、侵袭转移和耐药性的产生中起重要作用.本文就HIF-1α的结构,生物活性和其在肿瘤诊治中的应用前景作一综述. 相似文献
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目的 研究人膀胱移行细胞癌(BTCC)中HPV16/18感染与黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)启动子去甲基化状态的关系.方法 取40例HPV16/18阳性BTCC尿脱落细胞及HPV16/18阴性BTCC尿脱落细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)技术,检测BTCC中MAGE-A1基因启动子去甲基化状态,采用RT-PCR和Western blot法,分别检测其mRNA和蛋白表达水平.结果 AGE-1 mRNA和蛋白表达在HPV16/18阳性BTCC和HPV16/18阴性BTCC分别为68%(17/25)、20%(3/15),2组间表达差异有统计学意义(P<0.01),不同病理分级、临床分期间其表达差异有统计学意义(P<0.05).MAGE-A1基因在HPV16/18阴性BTCC中只有2例发生去甲基化,而在HPV16/18阳性BTCC中去甲基化发生率为52%(13/25),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其去甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPV16/18感染与MAGE-A1基因启动子区去甲基化有关,能导致该基因转录表达,HPV16/18的感染可能是导致膀胱癌发生、发展的原因之一. 相似文献