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目的探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)和6个串联重复M2蛋白胞外区域(6M2e)的融合蛋白的表达和制备方法, 并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法采用去除高变区的鞭毛蛋白序列, 将HAα和6M2e插入到原高变区位点, 构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定, 并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价, 实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平, CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e, 蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37 ℃诱导10 h, 通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102 400, 且与对照组相比差异有统计学意义(t=0.33, P=0.774;t=7.60, P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升... 相似文献
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